Agar m.R.Co to jest, podkład, przygotowanie, używa

On Agar m.R.S. Jest to selektywna pożywka hodowlaną, stosowana do izolacji i zliczania bakterii kwasu mlekowego, zwłaszcza z rodzaju Lactobacillus. Ten agar został utworzony w 1960 roku przez człowieka, Rogosę i Sharpe, niosąc medium tę samą nazwę, ale ze względu na jego złożoność często stosuje się skrót M.R.S.

Składa się z białka peptonu, ekstraktu mięsnego, ekstraktu drożdżowego, glukozy, monoletem sorbitanowego, fosforanu dipbotasowego, octanu sodu, cytrynianu amonu, siarczanu magnezu, siarczanu manganu i agaru.

Agar Han i Sharpe Man (m.R.S.) zasiany z Lactobacillus sp SP. Źródło: Podarowane zdjęcie do tego artykułu autorstwa autorów: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Zdjęcie wykonane podczas badania zatytułowanego: Ocena bakterii kwasu mlekowego i dwufifidobakterii o potencjałach probiotycznych w mleku matki i kale niemowląt.

Ten skład umożliwia dobry rozwój bakterii kwasu mlekowego z próbek klinicznych, takich jak kał, wydzielanie pochwy, próbki doustne i mleko matki, a także produkty mleczne i mięsne.

Nie jest stosowany rutynowo w laboratoriach klinicznych, ponieważ bakterie kwasu mlekowego rzadko są zaangażowane w procesy patologiczne. Jednak w obszarze mikrobiologii żywności stosowanie agaru M jest częstsze.R.S.

Z drugiej strony, podłoże jest używane przez niektóre ośrodki badawcze, których celem jest badanie bakterii kwasu mlekowego.

Podstawa

Człowiek, Rogosa i Sharpe ma dość złożoną kompozycję. Rozerwanie funkcji, którą wypełnia każdy z jego komponentów, możesz wyjaśnić jej podstawę.

Białko peptonowe, ekstrakt mięsny, ekstrakt drożdżowy i glukoza, to składniki odżywcze, które stanowią źródło węgla, azotu, witamin i minerałów niezbędnych do wzrostu bakterii. Ponadto glukoza jest uniwersalnym źródłem energii używanym w większości mediów uprawnych.

Z drugiej strony, aby sprzyjać wzrostowi bakterii kwasu mlekowego, obecność niezbędnych kofaktorów (kationów) jest konieczna w metabolizmie Lactobacillus i powiązanych bakterii; Te związki to sole sodu, magnezu i manganu.

Może ci służyć: opssonizacja: co to jest, typy, funkcje, cząsteczki

Podobnie, monoleoan sorbitanu lub polisorbate 80 jest ważnym źródłem kwasów tłuszczowych po wchłanianiu jako składniki odżywcze.

Ponadto monoleoan sorbitanu i cytrynian amonu hamuje rozwój towarzyszącej flory, zwłaszcza bakterii gramowych, zapewniając selektywny charakter tego agaru.

Wreszcie, agar -agar jest tym, który zapewnia solidną spójność dla środowiska.

Istnieją inne warianty agaru Rogosa Sharpe; Jednym z nich jest uzupełnienie cysteiny (m.R.S.c), bardzo przydatne do izolacji bifidobakterii, między innymi mikroorganizmami. Z drugiej strony istnieje MRS uzupełniona neomycyną, paromomycyną, kwasem tyłkowym i chlorkiem litowym, specjalne dla selektywnej liczby bifidobakterii w produktach mlecznych.

Przygotowanie

Waż 68,25 gramów odwodnionej pożywki i rozpuszcza się w litrom wody destylowanej. Odstaw na 5 minut. Rozpuść się w całości, prowadzi do często machania źródłem ciepła i gotowania przez 1 do 2 minut. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

Opuszczając autoklawę, odstaw na kilka minut i dystrybuuj jeszcze gorąco na sterylnych płytach Petriego.

Pozwól, aby zestalić i zainwestować płytki, zamów w płytki krwi i oszczędzaj w lodówce do czasu użycia. Niech płyty przejmują temperaturę pokojową przed ich użyciem.

Średnie pH musi wynosić 6,4 ± 0,2. Niektóre domy komercyjne zalecają pH od 5,5 do 5,9.

Odwodnione pożywkę jest beżową i przygotowana jest ciemna bursztyn.

Zarówno odwodnione pożywki, jak i przygotowane płytki muszą być przechowywane od 2 do 8 ° C.

Aplikacje

Płytki Agar M.R.S. Można je zasnąć na powierzchni (wyczerpanie lub za pomocą szpatułki Drigalski). Można go również zasnąć według głębi. Płytki muszą być inkubowane w 37 ° C w mikroaerofilii (4% lub₂ i 5-10% CO₂) Przez 24 do 72 godzin.

Może ci służyć: amensalizm: charakterystyka, przykłady, różnice z jadą Dinerism

Metoda zasiana jest wybierana zgodnie z realizowanym celem (izolacja lub liczba).

Charakterystyka kolonii

Przypuszczalne kolonie Lactobacillus rosną białawe kolory i mają w tym agar. Następnie muszą zidentyfikować.

Izolacja bakterii kwasu mlekowego

W tym celu używana jest zasiana powierzchnia. Próbki do pozwania wymagają poprzedniej procedury. 

W przypadku próbek mleka matki zaleca się odśrodki 1 ml próbki na 14.000 RMP przez 10 minut, aby usunąć warstwę tłuszczu. 900 µl są odrzucane, a w pozostałych 100 µl osad jest zawieszony, a powierzchnia agaru m.R.S. Następnie musisz dystrybuować równomiernie za pomocą szpatułki Drigalski.

W przypadku próbek kału jeden (1) gram kału jest ważony, a 9 ml sterylnej wody peptonowanej 0,1%jest homogenizowany, co odpowiada rozcieńczeniu 1/10. Następnie wykonywane są seryjne rozcieńczenia, aż do ostatecznego rozcieńczenia 10^-4.

Wreszcie pobrano 100 μl rozcieńczeń 10^-2, 10^-3 i 10^-4 I każde rozcieńczenie jest zasiane na Mrs Agar, dystrybuując równomiernie za pomocą szpatułki drigalskiego.

Liczba bakterii kwasu mlekowego

W takim przypadku zasiewane odbywa się według głębokości.

W przypadku próbek mleka matki pobiera 1 ml i umieszcza się w sterylnej stożkowej plastikowej rurce. Agar MRS jest dodawany w przybliżonej temperaturze 40 ° C do końcowej objętości 25 ml, uzyskując jednorodną mieszaninę. Następnie wlewa się do sterylnego Petriego.

W przypadku próbek kału wykonywane są rozcieńczenia, jak opisano powyżej. 1 ml każdego rozcieńczenia jest przyjmowane, a plastikowe rurki sterylne. Masted Agar MRS jest dodawany do objętości 25 ml.

Może ci służyć: biomy wodne: cechy, typy, flora, fauna, przykłady

Mieszanina każdego rozcieńczenia jest równomiernie wlewana do sterylnych płytek Petriego. Wreszcie odstawić, aż do twojej polimeryzacji.

Kolonie liczą się na agaru człowieka i Sharpe (m.R.S.). Źródło: Podarowane zdjęcie do tego artykułu. Autorzy: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Zdjęcie wykonane podczas badania zatytułowanego: Ocena bakterii kwasu mlekowego i dwufifidobakterii o potencjałach probiotycznych w mleku matki i kale niemowląt.

Na poziomie badań

Codzienne badanie bakterii kwasu mlekowego staje się większe zainteresowanie; Szczególnie badacze starają się poznać nowe szczepy i ich potencjał jako fermentację inicjatyw do standaryzacji w produkcji produktów mlecznych, między innymi.

W tym sensie Alvarado i in. (2007) używali agaru M.R.S. Aby przeprowadzić badanie, w którym izolowali, zidentyfikowali i scharakteryzowali bakterie kwasu mlekowego obecne w andyjskim serze rzemieślniczym Ahumado.

W serie stwierdzili obecność bakterii gatunków Lactococcus i Lactobacillus i doszli do wniosku, że mieszaniny izolowanych szczepów są odpowiednie jako inicjowanie szczepów w produkcji serów z pasteryzowanego mleka.

Z drugiej strony Sánchez y cols. (2017) używali agaru M.R.S. Aby zbadać obecność bakterii kwasu mlekowego w przewodzie pokarmowym prosiąt, aby je wykorzystać jako rodzime probiotyki, które zwiększają wydajność zdrowych świń.

Z tym medium udało im się odizolować cztery gatunki: Lactobacillus Johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae I PEDIOCOCCUS PENTOSACEUS.

Podobnie Báez i in. (2019) używali starzenia się m.R.S. Ocena bakterii kwasu mlekowego (BAL) i BIFIDOBACTERIA o potencjał probiotycznych w mleku matki i kale niemowląt.

Udało im się odizolować 11 BAL i 3 Bifidobacteria sp W mleku matki i 8 BAL i 2 Bifidobacteria sp. W odchodach. Wszystkie spełniły pewne parametry, które akredytują je jako bakterie z aktywnością probiotyczną.

Autorzy doszli do wniosku, że zarówno mleko matki, jak i kał niemowląt karmiących piersią wyłącznie służą jako naturalne źródła bakterii probiotycznych.

QA

Aby ocenić jakość agaru M.R.S. Elementy sterujące, takie jak:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli i Bacillus cereus.

Oczekiwane wyniki to zadowalający wzrost dla pierwszych 6 bakterii, a I. coli I Bacillus cereus Musi być hamowany w całości.

Bibliografia

1. Britania Laboratory. M.R.S agar. Dostępne na: Britanialab.com