Barwienie negatywne

Obraz ujemnego barwienia wirusa grypy A. Źródło: patrz strona autora, Wikimedia Commons

Co to jest zabarwienie negatywne?

Barwienie negatywne Jest to specjalna metoda zabarwienia, aby podkreślić obecność kapsułki w niektórych mikroorganizmach - Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae I Cryptococcus neoformans-, z próbek klinicznych lub czystych upraw.

Bezpośrednio używanej próbki bezpośredniej do zastosowania ujemnego barwienia jest płyn mózgowo -rdzeniowy. Ta technika stanowi szybką alternatywę dla domniemanej diagnozy zapalenia opon mózgowych, szczególnie przez Cryptococcus neoformans.

To barwienie można zastosować do sterylnej plwociny i ogólnie cieczy, a także na szczepy uzyskane z młodych czystych upraw. Technika ta wykorzystuje atrament nigrozyny lub chiński do jej wykonania, dlatego jest to bardzo prosta i ekonomiczna metodologia, która zapewnia informacje o dużej wartości diagnostycznej w krótkim czasie.

W tym sensie każde laboratorium jest możliwe do wykonywania tego zabarwienia. Oczywiście laboratorium musi mieć kompetentny personel, który jest w stanie rozpoznać drożdże Cryptococcus neoformans izolowane lub w gemionie i odróżniaj je od leukocytów i artefaktów, które może przedstawiać próbka.

Podstawa

Nigrozyna i atrament chiński działają podobnie, więc każda substancje można używać niewyraźnie.

Ta technika nazywa się barwieniem negatywnym, ponieważ działa ona wbrew reszcie technik zabarwiania. W tym to, co nie ma farbowania, to szukana struktura lub że chcesz zobaczyć, to znaczy mikroorganizmów.

Dlatego zabarwienie opiera się na farbowaniu dna rozmazu w ciemnym kolorze. W tym scenariuszu konstrukcje toczące się w świetle lub bezbarwnym.

Zwykle obserwowane są drożdże, otoczone przez wyraźną halo, która odpowiada kapsułce. Dzieje się tak, ponieważ chiński atrament i nigrozyna są substancjami niezdolnymi do penetracji polisacharydu, który tworzy kapsułkę żywych mikroorganizmów.

Może ci służyć: fermentacja butyryczna

Należy zauważyć, że inne struktury, które mogą być obecne w próbce bezpośredniej, takie jak leukocyty lub czerwone krwinki.

Teraz, jeśli mikroorganizmy są martwe, nalewaczka może się w nich wniknąć, tak że to barwienie jest również przydatne do oceny żywotności mikroorganizmów.

Technika

Materiały

Nigrozyna

Nigrozyna zawdzięcza swoją nazwę czarnego koloru, który ma. Jest to substancja syntetyczna uzyskana z ogrzewania mieszaniny związków organicznych -takich jak nitrobenzeina, anilina i chloryn anilinowy -stosowany w tej reakcji katalizator (żelazo lub miedź).

Chiński atrament

Chiński atrament to substancja stosowana głównie przez Azjatów do pisania, opracowanie dzieł sztuki i malarstwa monochromatycznego. Jest bardzo popularny w kulturze chińskiej.

Jest uzyskiwany z atramentu kalmarskiego wymieszanego z sproszkowanym węglem, produktem spalania małych żywicznych drzew.

Możliwe jest również przygotowanie go z sadzy spalania węglowodorowego (oleje roślinne), wraz z galaretką białkową, która nadaje mu odpowiednią konsystencję, aby uniknąć wytrącania cząstek węgla.

Specyfikacje do pobierania próbek

• Nie wymaga postu.
• Próbka próbki, plwocka lub sterylna ciecz musi zawierać co najmniej 1 ml objętości i musi zostać przeniesiona do laboratorium w temperaturze pokojowej.
• Próbki CSF i sterylne płyny powinny być pobierane przez specjalistycznego lekarza.
• Może to być również czysta uprawa podejrzanego szczepu związanego z wyżej wymienionymi patogenami.

Wykonanie techniki z bezpośrednimi próbkami

• Próbki muszą być wirowane, a następnie supernatant jest odrzucany, a osad jest przyjmowany.
• Umieszczono kroplę materiału odwirowanego (osad) i kroplę chińskiego lub nigrozynowego atramentu.
• Musi być dobrze mieszany i osłony z okładką, pozwalając, aby kropla rozciągała się jak dobry film bez przekraczania krawędzi.
• Następnie zamontowane jest przygotowanie mikroskopu.
• Jeśli przygotowanie jest bardzo ciemne, można go rozcieńczyć wodą.

Może ci służyć: chemotropizm

Wykonanie techniki z odmianami od uprawy

• Bardzo mała część młodej upraw jest pobierana z siewą i rozpuszcza się w kropli chińskiego atramentu wcześniej umieszczonego na czystym slajdzie.
• Pokrywa jest umieszczona na górze.
• Obserwuje się go w mikroskopie 10x, a następnie na 40x.

Możesz także rozwiązać część kolonii w wodzie destylowanej, a stamtąd zrzuć i wymieszać z chińskim atramentem. W ten sposób przygotowanie nie będzie tak gęste, co umożliwia obserwację struktur w izolacji. Jeśli istnieją aglomeracje, nie będzie to dobrze zaobserwowane.

Inna metodologia jest następująca:

• Umieść spadek zawieszenia na jednym końcu slajdu.
• Umieść kroplę nigrozyny na tym samym końcu i mieszaj.
• Za pomocą kolejnego slajdu rozszerz próbkę tak, jakby robiła rozmaz hematologiczny.
• Pozwól wyschnąć i obserwować w mikroskopie.

Obserwacja mikroskopu

Najpierw należy skoncentrować się na celu 10x, aby mieć szeroką wizję pola. Następnie musisz szukać, jeśli istnieją jasne przestrzenie. Jeśli tak, skup się na 40x, aby zobaczyć szczegóły.

Zalety

• Łatwo jest wykonać.
• To technika ekonomiczna.
• Ta metoda nie wymaga naprawy rozmazu do ciepła lub z chemikaliami, dlatego mikroorganizmy obserwuje się bez zniekształceń.
• Przygotowanie fresku nie musi być suche, więc można je natychmiast zaobserwować, szybko generując wyniki.

Niekorzyść

• Po zamontowaniu należy natychmiast zaobserwować nowe preparaty. Jeśli wolno im wysuszyć, nie można już ich obserwować i nowego.

Może ci służyć: samozapłanianie

Cynowanie tkanek chińskim atramentem

Inną funkcją, która może wypełnić chiński atrament, jest laboratoria patologiczne. Jest to stosowane w próbkach chirurgicznie ekstrahowanych w celu oznaczenia marginesów resekcji guza.

Oznaczona tkanka spryskuje się kwasem octowym. Działa to jako mordanie i zapobiega wydostaniu się atramentu, gdy tkanka podlega rutynowym przetwarzaniu w celu przygotowania biopsji.

Procedura polega na kąpieniu tkaniny w alkoholu i ksylenu, a następnie osadzona w wosku parafinowym. To oznaczenie prowadzi patologa podczas obserwowania tkanki, wskazując, gdzie jest margines chirurgicznej resekcji lub inny punkt zainteresowania.

Bibliografia

1. Nigrozyna. Odzyskane z ES.Wikipedia.org.
2. Forbes, ur., Sahm, d., Weissfeld, a. Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. Pan -american Editorial S.DO.