Tincion of Capsula Foundation and Techniques

Barwienie kapsułki Jest to technika zróżnicowanego zabarwienia, która jest właścicielem właściwości podkreślenia struktury polisacharydowej, która otacza niektóre bakterie i drożdże zwane kapsułką. Jest stosowany w laboratoriach klinicznych, aby pomóc w rozpoznaniu niektórych patologii spowodowanych przez torebki mikroorganizmy.

Jest również stosowany w nauczaniu laboratoriów do demonstracji tej struktury morfologicznej dla studentów kariery zdrowotnej, takich jak: medycyna, bioanaliza, pielęgniarstwo lub cytotechnologia,.

Rozmaz klebsiella pneumoniae barwiony barwieniem kapsułki. Indyjska metoda tuszu z safraniną. Źródło: а.А.В [domena publiczna]

Istnieje kilka prostych technik wykazania obecności kapsułki w mikroorganizmach, które ją posiadają, są to: barwienie ujemne, barwienie Anthony'ego i wariant, który łączy dwa poprzednie dwa.

Barwienie ujemne jest stosowane głównie w próbkach CSF, gdy podejrzewa się obecność drożdży Cryptococcus neoformans. Ta drożdże jest częstą przyczyną zapalenia opon mózgowych.

Ta technika wykorzystuje atrament nigrozyny lub chiński i opiera się na stworzeniu kontrastu między dnem przygotowawczym a nieprzeniknioną kapsułką mikroorganizmu. Tło jest barwione ciemne, a kapsułka jest bezbarwna. W ten sposób ta struktura jest podświetlona.

Jeśli chodzi o technikę Anthony'ego, można powiedzieć, że jest ona najczęściej stosowana w nauczaniu laboratoriów w celu wykazania struktury polisacharydu w bakteriach Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae I Neisseria meningitidis.

Zastosowanie tej techniki do celów diagnostycznych jest bardzo rzadkie, ponieważ istnieją inne rutynowe testy, które umożliwiają zidentyfikowanie tych mikroorganizmów.

[TOC]

Podstawa

Kapsułka jest silną strukturą o charakterze polisacharydowym. Chroni to mikroorganizmy fagocytozy, a zatem jest trudną strukturą do penetracji.

Właśnie dlatego plamy kapsułki oparte są na kontrastu. Barwniki plamiły dno preparatu, podczas gdy kapsułka jest bezbarwna.

Dlatego przy tych technikach kapsułka jest łatwo rozpoznawalna. Jeśli mikroorganizm nie ma kapsułki, nie będzie go rozróżnić z tego rodzaju zabarwieniem, ponieważ wszystko będzie barwione od tego samego koloru.

Może ci służyć: struktury homologiczne i analogiczne (z przykładami)

Wszystkie techniki stosowane do pokolorowania kapsułki mają ten sam podkład, mimo że używają różnych kolorów i procedur.

Techniki pardo barwienia kapsułki

-Anthony Barwienie

Barwienie Anthony'ego używa fioletowego szkła jako barwnika. To farbuje ciało bakteryjne i fioletowe tło.

Z drugiej strony stosuje się 20% siarczanu miedzi. Służy to jako roztwór do prania, to znaczy usuwa nadmiar fioletowej szklanki preparatu, powodując wyjaśnienie kapsułek, ale bez ciała bakteryjnego lub tła utraty koloru.

Materiały

- Krótkoazolate mleko.

- Przenośna blaszka.

- 1% szkło fioletowe.

- 20% siarczanu miedzi.

- Mikroskop optyczny.

- Olej zanurzeniowy.

Procedura

Ta technika składa się z:

1. Uprawiaj mikroorganizm w linii na mleku przez 36 godzin.
2. Umieść kroplę upraw na końcu arkusza obiektowego, a obok umieszcza kroplę fioletowego szkła, wymieszaj i rozszerz się z końcem kolejnego slajdu.
3. Na zewnątrz i nie naprawić ciepła.
4. Umyj 20%roztworem siarczanu miedzi, wypuść na zewnątrz.
5. Obserwuj mikroskop z obiektywem zanurzenia. Szukaj skrajności rozszerzonego.

Ważne jest, aby nie używać ciepła, naprawy ani wysuszyć, ponieważ uszkadza to kapsułkę. Ani myj wodą.

Interpretacja

Krótkie mleko jest doskonałym pożywką hodowlaną, ponieważ zapewnia niezbędne składniki odżywcze dla mikroorganizmu do opracowania wydatnej kapsułki.

Z drugiej strony lakierne mleko utworzy grube i zwarte tło, które będzie barwione fioletem wraz z ciałem bakteryjnym, ale kapsułka otaczająca mikroorganizm jest bezbarwna. Dlatego wokół ciała bakteryjnego obserwuje się wyraźne halo.

Może ci służyć: czynniki wpływające na aktywność enzymatyczną Reprezentacja graficzna na obserwacji mikroskopowej rozmazu Klebsiella pneumoniae barwionego barwieniem Anthony'ego. Źródło: Wykonane przez autora MSC. Marielsa Gil.

Zalety

To prosta technika do wykonywania. Nie wymaga utrwalenia.

Podobnie należy zauważyć, że można użyć innych mediów hodowlanych, ale medium z mlekiem jest preferowane, ponieważ ma tę zaletę, że zapewnia bardziej widoczne kapsułki.

Niedogodności

Jest to nieco bardziej pracochłonna technika niż zabarwienie negatywne, a do wizualizacji wymaga oczekiwania na wyschnięcie przygotowania.

-Barwienie negatywne

Materiały

- Prześcieradło.

- Medium hodowlane z mikroorganizmem.

- Atrament chiński lub nigrozyny.

- Mikroskop optyczny.

- Sól fizjologiczna.

Procedura

Umieść kroplę fizjologicznej soli fizjologicznej na osłonach i rozpuść niewielką część upraw drobnoustrojów. Ważne jest, aby przygotowanie nie było zbyt grube. Następnie umieść kroplę chińskiego lub nigarynowego atramentu i wymieszaj.

Następnie na preparat umieszcza się arkusz pokrycia bez przekraczania cieczy. Obserwuje się go na mikroskopie skupiając się najpierw na celu 10x, a następnie przechodzi do 40x.

Ta technika może być również stosowana na próbkach CSF. To znaczy, zamiast umieszczać kroplę kultury drobnoustrojów, umieszcza się kroplę.

Zalety

Jest to prosta metoda wykonywania, a jednocześnie ekonomiczna. Nie wymaga utrwalenia ani suszenia przygotowania.

Niedogodności

Ma wadę, że należy go zaobserwować na mikroskopie przed wyschnięciem przygotowania, ponieważ jeśli tak się stanie, mikroorganizmy się kurczą, co utrudni wizualizację.

Z drugiej strony mogą wystąpić fałszywe pozytywy, jeśli analityk jest niedoświadczony, ponieważ leukocyty zwykle mylą drożdże.

Obserwację drożdży z kapsułką z techniką chińską lub nigrozyną należy uznać za domniemaną diagnozę Cryptococcus neoformans Dopóki nie zostanie wykazane z uprawą.

Dzieje się tak, ponieważ istnieją inne drożdże, które mogą być przyczyną zapalenia opon mózgowych i nie tylko Cryptococcus neoformans, takich jak z rodzaju Candida i Rhodotorula, a także inne gatunki Cryptococcus.

Może ci służyć: koenzym acetyl

Interpretacja

Jeśli pojawią się mikroorganizmy torebki, zaobserwowano ciemne tło, z przezroczystymi ciałami unoszącymi się w cieczy, podkreślając obecność kapsułki.

Cryptococcus Capsule Neoformans barwione chińskim atramentem. Źródło: Zdjęcie: Dostawcy treści: CDC/DR. Leanor Haley [domena publiczna]

-Indyjska technika atramentu

Tę technikę można również wykonać za pomocą nigrozyny. Jest to połączenie wcześniej wyjaśnionych technik. Ta technika wykorzystuje fioletowe kryształy i Indie lub atrament nigrozyny.

Ciało bakteryjne przyjmuje fioletowy kolor fioletowego szkła, ponieważ jest on ujemnie ładowany, podczas gdy nigrozyna zabarwia dno rozmazu. Jeśli bakteria ma kapsułkę, będzie ona postrzegana jako przezroczysta halo wokół mikroorganizmu.

Kryształ fioletowy można zastąpić dowolnym z tych zabarwień: safranina, podstawowa fuksyna lub błękit metylenowy.

Materiały

- Fiolet szkło.

- Atrament nigrozyny lub indyjski.

- Prześcieradło.

- Mikroskop.

Procedura

- Pielęgnuj mikroorganizm w pożywce hodowlanej.

- Umieść kroplę plonu na końcu arkusza zjeżdżalni, a obok umieszcza kroplę indyjskiego lub nigrozyn.

- Sucha powietrze i nie naprawiaj ciepła.

- Przykryj fioletowym roztworem szklanym na 1 minutę, umyj wodą destylowaną, ale bardzo delikatnie (miękki odrzutowiec), wypuść na zewnątrz.

- Obserwuj mikroskop z obiektywem zanurzenia. Szukaj skrajności rozszerzonego.

Interpretacja

Fioletowe ciało bakteryjne i ciemne tło będzie obserwowane. Kapsułka, jeśli jest obecna, będzie bezbarwna wokół bakterii.

Bibliografia

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Podstawowe techniki mikrobiologii. Obserwacja bakterii. Zmniejszenie (biologia). Seria mikrobiologii. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Podstawowe barwienie w laboratorium mikrobiologii. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Dostępne na: Medigraficzne.com
3. Gil m. Barwienie negatywne: fundament, technika, zalety i wady. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Argentyna. Pan -american Editorial S.DO
5. Tankeshwar a. Plama na kapsułki: zasada, procedura i wyniki. 2019. Przewodnik mikrobiologii medycznej. Dostępne w: Microbeonline.com