Fundacja histochemii, przetwarzanie, barwienie

Histochemia Jest to bardzo przydatne narzędzie w badaniu morfologii różnych tkanek biologicznych (warzywa i zwierzęta), ze względu na jego zasadę reakcji składników tkanek, takich jak węglowodany, lipidy i białka, między innymi z kolorowankami substancji kolorowanki.

To cenne narzędzie pozwala nie tylko zidentyfikować skład i strukturę tkanek i komórek, ale także różne reakcje występujące w tych. Podobnie możliwe uszkodzenie tkanek, spowodowane obecnością mikroorganizmów lub innych patologii.

Barwienie histochemiczne. Wirus Nilu, Gram dodatnie i gram ujemne bakterie (Gram), histoplasma capsulatum (Grocott), Mycobacterium tuberculosis (Ziehl Neelsen). Źródło: Pixinio.com/Wikipedia.Org/Nephron [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licencje/by-sa/3.0)]/Cdc/Dr. George p. Kubica [domena publiczna]

Histochemia, od minionego stulecia zapewniła istotny wkład, taki jak demonstracja istnienia bariery krwinek przez Paula Ehrlicha. Było to możliwe dzięki faktowi, że mózg zwierzęcia eksperymentowego używanego przez Ehrlicha nie farbował aniliną, co jest podstawowym barwnikiem.

Doprowadziło to do zastosowania różnych barwników, takich jak metylen i błękit indofenolowy, w celu barwienia różnych rodzajów komórek. Odkrycie to spowodowało klasyfikację komórek w kwasofilowych, bazofilowych i neutrofilach, zgodnie z ich specyficznym barwieniem.

Ostatnie badania zastosowały tę technikę, aby wykazać obecność różnych związków, w tym fenoli, a także węglowodanów i nie strukturalnych lipidów u gatunków gatunku Litsea glaucescens, Najbardziej znany jako laur. Będąc tym, zarówno w prześcieradłach, jak i w drewnie.

Podobnie Colares i in., 2016, zidentyfikowali roślinę odsetek leczniczych Tarenaya Hassleriana, poprzez techniki histochemiczne. U tego gatunku wykazano obecność skrobi, miroziny, a także związków fenolowych i lipofilowych.

[TOC]

Podstawa

Histochemia opiera się na barwieniu struktur komórkowych lub cząsteczek obecnych w tkankach, dzięki ich powinowactom z określonymi barwnikami. Reakcja kolorów tych struktur lub cząsteczek w ich oryginalnym formacie jest następnie wizualizowana w mikroskopie optycznym lub mikroskopie elektronicznym.

Specyficzność barwienia wynika z obecności grup akceptujących jon obecnych w komórkach lub cząsteczkach tkanek.

Wreszcie celem reakcji histochemicznych jest możliwość dowodu poprzez zabarwienie. Od największych struktur biologicznych po najmniejsze z tkanek i komórek. Można to osiągnąć dzięki faktowi, że barwniki reagują chemicznie z cząsteczkami tkanek, komórek lub organelli.

Może ci służyć: co to jest wertaż?

Oskarżenie

Reakcja histochemiczna może prowadzić do kroków przed realizacją techniki, takiej jak fiksacja, włączenie i cięcie tkanki. Dlatego należy wziąć pod uwagę, że w tych krokach możesz uszkodzić strukturę, którą chcesz zidentyfikować, rzucając fałszywie negatywne wyniki, nawet jeśli jest obecna.

Mimo to, poprzednie utrwalenie tkanki przeprowadzonej jest właściwie, ponieważ zapobiega autolizy lub zniszczeniu komórek. Dla tego.

Włączenie tkanki odbywa się, aby utrzymywała swoją jędrność podczas cięcia, a tym samym zapobieganie jej zdeformowaniu. Wreszcie, cięcie odbywa się za pomocą mikrotomu do badania próbek za pomocą mikroskopii optycznej.

Dodatkowo, przed przejściem do barwienia histochemicznego, zaleca się włączenie zewnętrznych lub wewnętrznych kontroli pozytywnych do każdej partii testów. A także zastosowanie określonych barwników do zbadania struktur.

Barwienie histochemiczne

Od pojawienia się technik histochemicznych po teraźniejszość zastosowano szeroki zakres barwników, w tym najczęstsze zastosowanie, takie jak: Schiff (PAS), Grocott, Ziehl-Neelsen i Gram.

Podobnie, inne barwniki były stosowane rzadziej, takie jak chiński atrament, orcein lub Masson's Trichromic Barwienie, między innymi.

Kwas okołowy Schiffa (PAS)

Dzięki temu zabarwieniu można zobaczyć cząsteczki o wysokiej zawartości węglowodanów, takich jak: glikogen i mucyna. Jest jednak również przydatny do identyfikacji mikroorganizmów, takich jak grzyby i pasożyty. Oprócz niektórych struktur (błona podstawy) w skórze i w innych tkankach.

Podstawą tego barwienia jest to, że kolorystyka oksyda wiązania węglowe występują między dwiema pobliskimi grupami hydroksylowymi. To powoduje wydanie grupy aldehydu, co jest wykrywane przez odczynnik Schiff, rzucając fioletowy kolor.

Odczynnik Schiff składa się z podstawowej fuksyny, metabisulfitu sodu i kwasu solnego, a składniki te są odpowiedzialne za fioletowe kolorowanie, gdy obecne są grupy aldehydowe. W przeciwnym razie generowane jest kwas bezbarwny.

Może ci służyć: izomeraza: co to jest, funkcje, nomenklatura, typy

Intensywność kolorowania będzie zależeć od ilości grup wodotsylli obecnych w monosacharydach. Na przykład w grzybach błony podstawy, mucyny i glikogen kolor może przechodzić od czerwonego do fioletu, podczas gdy jądra są barwione niebieski.

Grocott

Jest to jedno z barwień, które przedstawia największą wrażliwość w identyfikacji grzybów w tkankach zawartych w parafinie. Umożliwia to identyfikację różnych struktur grzybów: strzępki, zarodniki, endospory,. Dlatego uważa się go za rutynowe barwienie diagnozy mikozy.

Szczególnie stosuje się go w diagnozie mikozy płucnej, takiej jak pneumocystoza i aspergiloza spowodowana przez niektóre grzyby gatunkowe Pneumocystis I Aspergillus, odpowiednio.

Ten roztwór zawiera azotan srebra i kwasu chromowego, przy czym ten ostatni jest utrwalaczem i barwnikiem. Podstawą jest to, że kwas ten wytwarza utlenianie wodoroksylów do aldehydów, przez śluzowe obecne w wybranych strukturach, na przykład w ścianie komórkowej grzybów.

Wreszcie srebro obecne w roztworze jest utleniane przez aldehydy, powodując czarne zabarwienie, które nazywa się reakcją argentafiny. Możesz także użyć barwników kontrastowych, takich jak jasnozielone, a zatem budzą struktury grzybowe z jasnozielonym tłem.

Ziehl-Neelsen

To barwienie opiera się na obecności oporności na alkohol kwasu, częściowo lub całkowitych, w niektórych mikroorganizmach, takich jak gatunki Nocardia, Legionella i Mycobacterium.

Zaleca się zastosowanie tego barwienia, ponieważ ściana komórkowa wcześniej cytowanych mikroorganizmów zawiera złożone lipidy, które utrudniają penetrację kolorowania. Szczególnie w próbkach dróg oddechowych.

Stosowane są mocne barwniki, takie jak Fenicada Fuchsin (podstawowy barwnik) i stosuje się ciepło, aby mikroorganizm mógł zatrzymać barwnik i nie odbarwiać się kwasami i alkoholi. Na koniec zastosowano roztwór błękitny metylenowy, aby pokolorować struktury, które zostały przebarwione.

Obecność odporności na kwas-alkohol obserwuje się w czerwonych strukturach, podczas gdy struktury, które nie odporają na przebarwienia, są barwione niebieski.

Gram i chiński atrament

Gram jest bardzo przydatnym zabarwieniem w diagnozowaniu infekcji bakteryjnych i grzybiczych, między innymi. To zabarwienie pozwala różnicować między mikroorganizmami Grama ujemnego gramu, wyraźnie wskazując na różnice, które istnieją w składzie ściany komórkowej.

Może ci służyć: lipidy podlegające saponifikowalne: cechy, struktura, funkcje, przykłady

Podczas gdy chiński atrament jest barwieniem, które służy do kontrastu struktur zawierających polisacharydy (kapsułka). Wynika to z faktu, że w środowisku tworzy się pierścień Cryptococcus neoformans.

Orcein

Z tym barwieniem, elastyczne włókna i chromosomy różnych komórek są zabarwione, umożliwiając ocenę procesu dojrzewania tego ostatniego. Z tego powodu było to bardzo przydatne w badaniach cytogenetycznych.

Opiera się to na zbieraniu barwnika przez ujemne obciążenie cząsteczek, takich jak DNA, obecne w centrach szerokiej gamy komórek. Więc są to barwione niebieskie do mrocznego fioletu.

Masson's Trichromic

To barwienie stosuje się w identyfikacji niektórych mikroorganizmów lub materiałów zawierających pigmenty melonowe. Tak jest w przypadku mykozy, spowodowanej grzybami dematicowymi, ugohifomikozą i w czarnym ziarnie Eumicetoma.

Ostateczne rozważania

W ostatnich latach nastąpiło wiele postępów w tworzeniu nowych technik diagnostycznych, w których zaangażowana jest histochemia, ale powiązana z innymi fundamentami lub zasadami. Techniki te dążą do innego celu, podobnie jak w przypadku immunohistochemii lub enzymohistochemii.

Bibliografia

1. Acuña U, Elguero J. Histochemia. Jakiś. Chem. 2012; 108 (2): 114-118. Dostępne na: są.IQM.CSIC.Jest
2. Mestanza r. Częstotliwość barwienia histochemicznego PA, Grocott i Ziehl-Neelsen zastosowana do identyfikacji mikroorganizmów, wykonywanej w patologicznej służbie anatomii Eugenio Espejo Specialties w 2015 r. [Praca licencjacka]. Central University of Ecaador, Quito; 2016. Dostępne na: DSPACE.Uce.Edu
3. Tapia-Torres N, de la Paz-Pérez-Olvera C, Román-Guerrero A, Quintanar-Isaías A, García-Márquez E, Cruz-Sosa F. Histochemia, całkowita zawartość fenoli oraz aktywność przeciwutleniacza liści i drewna Litsea glaucescens Kunth (Laureaceae). Drewno i lasy. 2014; 20 (3): 125-137. Dostępne na: Redalyc.org
4. Colares, MN, Martínez-Alonso, S, Aambarri, AM. Anatomia i histochemia Tarenaya Hassleriana (Cleomaceae), rodzaj interesu leczniczego. Biuletyn latynoamerykański i karaibski roślin leczniczych i aromatycznych 2016; 15 (3): 182-191. Dostępne na: Redalyc.org
5. Bonifaz a. Podstawowa mikologia medyczna. Wydanie 4. Meksyk: redaktorzy McGraw-Hill, S.DO. c.V. 2012.
6. Silva Diego Filipe Bezerra, Santos Hellen Bandeira de Pontes, León Jorge Esquiche, Gomes Dalian. Klinika patologiczna i immunohistochemiczna analiza raka płaskonabłonkowego komórki wrzecionowej języka: rzadki przypadek. Einstein (São Paulo) 2019; 17 (1): ERC4610. Dostępne od: Scielo.Br