Charakterystyka barwienia hematoksyliny-eozyny, zastosowania, techniki

Barwienie hematoksyliną - eozyna Jest to technika zabarwienia, która wykorzystuje połączenie barwników hematoksylinowych i eozynowych. Ta para barwników stanowi idealny duet, ponieważ hematoksylina działa jak podstawowy barwnik, a eozyna jest kwaśnym barwnikiem.

Oznaczenie podstawowych lub kwaśnych barwników nie odnosi się do pH, które otrzymują w roztworze, ale raczej mówi o proporcjach, które panuje pod względem obciążeń anionowych lub kationowych, które posiadają lub po lokalizacji chromoforu.

Cylindryczny nabłonek zabarwiony hematoksyliną - eozyną (HE) Źródło: Todd Straus i Vladimir Osipov [CC przez 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licencje/według/3.0)]

W tym sensie hematoksylina jest uważana za podstawowy (kationowy) barwnik i dlatego ma powinowactwo do struktur kwasowych, takich jak rdzeń komórek. Podczas gdy eozyna jest kwaśnym (anionowym) barwnikiem ma powinowactwo do struktur alkalicznych lub podstawowych, takich jak cytoplazma komórkowa.

Z tego powodu ta kombinacja barwników jest szeroko stosowana do plam. Jądra są barwione ciemnoniebieskim lub fioletowym, a różowa cytoplazma.

Barwienie hematoksyliną-eozyną jest jedną z najczęściej stosowanych technik zabarwiania w dziedzinie histologii i cytologii, ze względu na łatwe obsługa i niski koszt. Jest stosowany do wizualizacji komórek, grubych włókien nerwowych i obecności niektórych mikroorganizmów tkankowych, takich jak: pasożyty, grzyby i bakterie, między innymi.

[TOC]

Charakterystyka

Hematoksylina

Hematoksylina jest neutralnym barwnikiem. Jednak komponent zapewniający kolor (chromofor) znajduje się w kationowym lub podstawowym centrum cząsteczki. Stąd jego powinowactwo do kwaśnych struktur. Jego formuła chemiczna to c₁₆H₁₄ALBO₆ i jego naukowe imię 7.11b-dihydroindeno [2,1-C] Chromene-3, 4,6a, 9,10 (6H) -Pentol.

Zachowaj głównie centra komórek, ponieważ są one bardzo bogate w kwasy nukleinowe. Możesz także farbować cytoplazmatyczne wtrącenia pochodzenia wirusowego.

Tak aby hematoksylina może farbować w stanie utlenionym i przymocować do metalu. Ten ostatni będzie służyć do spojrzenia na tkaninę, to znaczy będzie działać jako mordant.

Gdy hematoksylina jest utleniona, nazywana jest hematein. Utlenianie osiąga się przez ekspozycję na tlen (starzenie się odczynnika lub przez substancje, które pomagają jego utlenianie (utlenianie chemiczne).

Może ci służyć: metody rozdziału heterogenicznych mieszanin

Eosina

Eosina to barwnik czerwony lub różowy. Jest nierozpuszczalny w wodzie, chociaż istnieje wersja hydrosolubna. Zasadniczo Eosina przygotowuje rozpuszczający się alkohol (etanol w wieku 95).

Plamowane cytoplazmy, włókna mięśniowe, organelle cytoplazmatyczne i kolagen, ale nie farbują centrów komórek. Dzieje się tak, ponieważ jest on negatywnie naładowany, ma zatem powinowactwo do pozytywnie załadowanych struktur.

Istnieją dwa rodzaje eoziny „y” i „b”. Eosina „y” jest znana jako żółta eosina. Jego naukowa nazwa to tetrabromowa fluoresceina, a jej wzór chemiczny to c₂₀H₈Br₄ALBO₅.

Z drugiej strony eozyna „B” jest czasami nazywana niebieskawą erythrosiną B. Jego naukowa nazwa to dibromodinitro fluoresceina, a wzór to C₂₀H₈Br₂N₂ALBO₉. Oba są bardzo podobne, a różnica używania jednego lub drugiego nie jest tak naprawdę zauważalna. Jednak najpopularniejszą jest Eosina „y”.

Eozyna ma właściwość rozróżnienia między żywą a martwą komórką, ponieważ jest w stanie przekroczyć błonę tylko w celu farbowania swojej cytoplazmy, gdy komórki są martwe, pozostawiając cytoplazmie komórki bezbarwnej, jeśli pozostaje żywa.

Aplikacje

Barwienie błonnika nerwowego

Z hematoksyliną-eozyną grube włókna nerwowe można farbować i zidentyfikować. Jednak nie jest przydatne pokolorować cienkie włókna nerwowe, ponieważ w celu wizualizacji tego ostatniego potrzebne jest srebrne zabarwienie.

Tony histologicznych cięć skóry

W barwienia warstwy rogówki skóry barwnik, który działa, jest eozyna, ponieważ na tym poziomie komórki nie mają jądra.

W warstwie ziarnistej skóry silnie hematoksylin. Przeciwnie, ciernista warstwa skóry jest słabo barwiona hematoksyliną, podczas gdy warstwa podstawy lub zarodka, jeśli jest całkiem zabarwiona.

Eozyna plami cytoplazma wszystkich komórek, a intensywność kolorów może różnić się między jedną warstwą a drugą.

Barwienie barwieniem hematoksyliną-eozyną

Gómez i współpracownicy, w 2005 r. Wykazali, że barwienie hematoksyliną -eozyną było bardziej skuteczne w identyfikowaniu przypadków amibiazy przez Entamoeba histolytica I Entamoeba odmienne że świeża metoda wizualizacji (roztwór soli i roztworu lugolu) u pacjentów z ostrą chorobą biegunkową.

Może ci służyć: alkohol wtórny: co to jest, struktura, właściwości, użycia

Wykazano również, że ma dużą wrażliwość na wykrywanie erytrofagocytozy (ameby o erytrocytach fagocytów).

Barwienie skaleczeń histologicznych do rozpoznania infekcji

Walwyn i współpracownicy, w 2004 r. Zaproponowali zastosowanie barwienia histologicznego do wykrywania mikroorganizmów powodujących infekcje.

Używając zabarwienia hematoksylinowej eozyny udało się wizualizować infekcje spowodowane przez Clostridium, Actinomyces, Spilila lub Candida. Udało im się również zaobserwować obecność pasożyta SARCOPTES ESCABIEI W skórzanych cięciach i wirusowych wtrąceniach cytomegalii i opryszczki w kawałkach różnych tkanek.

Techniki

Do próbek histologicznych

Barwienie cięć histologicznych przechodzi szereg kroków. Pierwszym z nich jest uzyskanie cięcia histologicznego. Musi to być parafinowane, a następnie uzyskać cięcia (ultra-teren) za pomocą mikrotomu. Technika składa się z następujących kroków:

1-malmacja nadmiaru parafiny: Można użyć xilol lub hemo -d, zanurz się przez 3-5 minut.

2-samowolą próbki: Osiąga się to poprzez zanurzenie próbki w różnych stężeniach alkoholi (etanol) w kolejności malejącej (100 °, 90 °, 70 °). We wszystkich przypadkach przez 7 minut.

3-eliminacja nadmiaru alkoholu: Aby to zrobić, zanurza się w wodzie przez 7 minut.

4-kolekcja z hematoksyliną: Próbka jest zanurzona 6-10 minut na tacy zawierającej hematoksylinę. Czas ekspozycji zależy od wielkości i grubości próbki.

5-eliminacja nadmiaru hematoksyliny: Woda myczono przez 5 minut, a następnie szybkie przejście (10-20 sekund) jest wykonane przez alkohol kwasowy. Następnie ponownie umyte wodą przez 5 minut. Następnie zanurzony w etanolu w 96 ° na 1 minutę.

6-kolorowe z Eosiną: Aby to zrobić, próbka przez 5 minut na tacy Eosina jest zanurzona.

7-deshydration próbki: Aby to zrobić, tace alkoholowe (etanol) są ponownie przekazane, ale tym razem w kolejności rosnącej. (70 °, 90 °, 100 °). (Odpowiednio przez 5 sekund, 5 sekund, 1 minuty).

Wyjaśnienie 8-próbki: Jest to narażone na ksylol przez 5-10 minut i wysycha, aby na stałe uszczelnić balsamem Kanady lub innym podobnym materiałem.

W przypadku próbek kału w poszukiwaniu I. histolytica

W lamelli rozszerzona z kałem pacjenta i jest ustalona 80% alkoholu przez 5 minut. Arkusz jest zanurzony w hematoksylinie przez 5 minut i natychmiast jest myty wodą.

Może ci służyć: wkład z chemii w medycynę

Następnie szybko zanurza się w alkoholu kwasowym, a następnie w wodzie amoniakcyjnej. Umyj wodą. Jest kolorowy przez 5 minut w Eosinie. Próbka jest odwodniona jak wyjaśniono w poprzedniej technice i ostatecznie wyjaśniono za pomocą Xileno.

Przygotowanie odczynników

- Hematoksylina

W litr wody destylowanej rozpuść 50 gramów siarczanu potasu lub amonu. Po całkowitym rozpuszczeniu dodaj 1 gram krystalizowanej hematoksyliny. Podczas rozpuszczania się w całości, 1 GR kwasu cytrynowego dodaje się razem z 50 granem hydratu chloralowego i 0,2 gram.

Mieszanina jest gotowana przez 5 minut, a następnie pozostawiona jest ostygnięcie i filtrowane, aby wyeliminować pozostałe cząstki stałe. W ten sposób przygotowany odczynnik można natychmiast użyć.

- Eosina

Można go przygotować z bazą alkoholową lub wodną.

Alkoholik eozyna

W 100 ml etanolu w 95 ° rozpuszcza 0,5 gramów eozyny „y”. Następnie dodaj kilka kropli lodowcowego kwasu octowego.

2% wodna eozyna

W 1250 ml wody destylowanej rozpuść 25 gramów eozyny „y” hydrosolubne. Następnie dodaj kilka kropli lodowcowego kwasu octowego.

Alkohol kwasowy

Zmierz 0,5 ml skoncentrowanego kwasu solnego i kompletne 100 ml z bezwzględnym alkoholem.

Woda amoniakalna

Zmierz 0.5 ml skoncentrowanego amoniaku i kompletne 100 ml z wodą destylowaną.

Bibliografia

1. Navarrete, g. Histologia skóry. Rev fac med unam 2003; 46 (4): 130-133. Dostępne na: Medigraficzne.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela lub.
3. Identyfikacja Entamoeba histolytica/e. różny W przypadku techniki świeżej amiba w porównaniu z jej barwieniem hematoksyiną-eozyną w ostrej biegunce. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Dostępne na: Medigraficzne.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Przydatność technik histologicznych do rozpoznania infekcji w elementach anatomicznych. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Dostępne na: Scielo.Sld
5. Panreac Applichem itw Regnts. Barwienie hematoksyliną-eozyną. 2017, Hiszpania. Dostępne na: ItWreAgnts.com
6. „Eosina." Wikipedia, bezpłatna encyklopedia. 7 listopada 2018, 08:18 UTC. 4. 2019, 22:13 jest.Wikipedia.org
7. „Hematoksylina." Wikipedia, bezpłatna encyklopedia. Maj 2019, 11:23 UTC. 4. 2019, 22:48 Wikipedia.org