Rozmaz bakteryjny, co jest, cechy i przygotowanie

On Rozmaz bakteryjny Jest to przedłużenie w postaci cienkiej warstwy zawiesiny mikroorganizmów bakteryjnych, które są wykonane na przezroczystej szklanej płycie lub szkiełku, do obserwacji pod mikroskopem optycznym.

Rozszerzenie w postaci filmu jest przeprowadzane w celu oddzielenia mikroorganizmów tak bardzo, jak to możliwe, ponieważ jeśli obserwacja jest zgrupowana.

W badaniu upraw bakteryjnych stosuje się techniki rozmazu, mocowania i przygotowywania kolorowania. Ze względu na niewielki rozmiar mikroorganizmów koniecznie konieczne jest zastosowanie mikroskopu optycznego do obserwacji.

Mikroskopy optyczne są niezbędnymi instrumentami do obserwacji rozmazu. Używają one soczewek optycznych i światła, umożliwiając wizualizację próbek o dużym wzroście wielkości.

Ogólnie rzecz biorąc, żywe komórki nie mają głównie kolorowych struktur, widoki na mikroskop optyczny są bezbarwne, przezroczyste próbki i wykazują bardzo mało wewnętrzny kontrast i z otoczeniem.

Obserwacja z prostym mikroskopem optycznym pola czystego, bez zastosowania technik barwienia pomocniczego, jest bardzo ograniczona i jest stosowana tylko w niektórych przypadkach, jak w obserwacji ruchu mikroorganizmu.

W przypadku optymalnie obserwacji mikroorganizmów konieczne jest osiągnięcie równowagi między kontrastem a rozdzielczością. Szczegóły komórek nie można zaobserwować na mikroskopie, nawet przy wysokiej rozdzielczości; Wymagane jest zastosowanie barwników za pomocą technik barwienia, co przyczynia się do kontrastu dla obserwacji.

Charakterystyka dobrej jakości rozmazu bakteryjnego

Doskonały kontrast

Aby osiągnąć doskonały kontrast, nazywane są wyrafinowane mikroskopy mikroskop kontrastowy fazowy, interferencja różnicowa i mikroskop ciemnego pola. Ten typ mikroskopu służy do obserwacji struktur bakteryjnych, takich jak strąki i włókna, między innymi.

Barwienie jest prostą techniką zwiększania kontrastu osiągniętego za pomocą mikroskopu pola przezroczystego. W tej technice można zastosować różne barwniki, które znacznie poprawiają obserwację mikroskopu.

Barwienie wykonuje się bezpośrednio na rozmazach lub przedłużeniach zawiesin mikroorganizmu na szkiełkach, wcześniej wysuszonych i ustalonych.

Dobry ustalony

Naprawienie jest techniką stosowaną do zachowania struktur komórkowych; powoduje inaktywację mikroorganizmów i przyczepność do szklanki zjeżdżalni. Istnieją różne obróbki ustalania: utrwalanie ciepła i fiksacja chemiczna.

Może ci służyć: kwas palmitolowy: struktura, funkcje, gdzie to jest

Utrwalanie ciepła

Jest to najczęściej stosowana metoda obserwacji rozmazu bakteryjnego. Technika polega na przekazywaniu zawiesiny bakteryjnej przez płomień zapalonego. Ta technika jest w stanie zachować zewnętrzną morfologię bakterii, ale niszczy jej wewnętrzne struktury.

Fiksacja chemiczna

Połączenie chemiczne wykorzystuje substancje chemiczne w zachowaniu, takie jak między innymi formaldehyd lub formalina, etanol i kwas octowy. Zaletą stosowania ustalania środków chemicznych jest to, że osiągnięto zachowanie wewnętrznych struktur mikroorganizmów.

Rozmaz krwi. Źródło: Bobjgalindo [GFDL (http: // www.gnu antylopa.Org/copyleft/fdl.HTML) lub CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licencje/nabrzeże/4.0)], z Wikimedia Commons

Dobre barwienie

Najczęstszymi procedurami przeprowadzania barwienia wcześniej suszenia i stałego rozmazy są barwienie pozytywne lub proste, różnicowe barwienie i barwienie ujemne. Istnieją również specjalne techniki barwienia określonych struktur komórkowych (kapsuła, zarodniki, wici).

Pozytywne barwienie lub proste barwienie

Pozytywne lub proste barwienie jest najczęściej stosowaną techniką barwienia rozmazu. Użyj barwników, które mają możliwość łączenia niektórych struktur drobnoustrojów, umożliwiając im obserwowanie ich na mikroskopie.

Barwniki te mają grupy chromoficzne (część kolorowa) w ich strukturze chemicznej, z alternatywnymi podwójnymi wiązaniami i prostymi wiązaniami (koniugacja). Linki te mogą z kolei ustalić wiązania jonowe lub kowalencyjne z niektórymi strukturami komórkowymi.

Barwniki stosowane w pozytywnym lub prostym barwieniu są głównie chemicznymi pochodnymi anilina (kolorowe sole organiczne).

Z drugiej strony, wśród barwników możemy znaleźć niektóre z podstawowym pH, a inne z kwasowym pH.

Podstawowe barwniki

W podstawowych barwnikach grupa chromoforów ma dodatni ładunek elektryczny. Zdecydowana większość mikroorganizmów prokariotycznych ma wewnętrzne neutralne pH, a ich powierzchnia komórkowa ma obciążenie ujemne. Poprzez tę interakcję elektrostatyczną chromofor wiąże się z komórką i barwnikiem.

Przykładami podstawowych barwników są między innymi błękit metylenowy, szklanki fioletowe, zielony malachite, podstawowy bezpiecznik, safranina.

Kwasowe barwniki

W kwaśnych barwnikach grupa chromoforów ma ujemny ładunek elektryczny. Są one stosowane do barwienia białka z grupami ładunku dodatnim. Przykładami barwników kwasowych są bezpiecznik kwasowy, róża bengalska, Czerwona Kongo i Eozyna.

Może ci służyć: propage: co to jest, typy i ich cechy

Barwienie różnicowe

Technika barwienia różnicowego polega na zastosowaniu dwóch barwników o różnym kolorze lub intensywności, w celu rozróżnienia mikroskopu mikroskopowego. Barwienie Grama i barwienie odporności na alkohol kwasu są najczęściej stosowanym barwieniem różnicowym w bakteriologii.

Barwienie Grama jest używane jako test wstępny, aby poznać kształt, rozmiar, grupę komórkową, oprócz rodzaju ściany komórkowej. Za pomocą testu barwienia Gram bakterie ściany komórkowej są klasyfikowane jako bakterie Gram dodatnie i bakterie gramowe ujemne.

Barwienie negatywne

W tej technice stosuje się barwniki chemiczne, które nie penetrują wnętrza komórkowego, ale tworzą medium, w którym mikroorganizmy pojawiają się jako czarne tło.

W technice barwienia ujemnego rozmaz jest przygotowywany z kroplem zawiesiny z atramentu chińskiego lub nigrozyny, który po zezwoleniu na suszenie w temperaturze pokojowej tworzy nieprzezroczystą folię do przejścia światła. W ten sposób mikroorganizmy są obserwowane jako jasne formy na ciemnym tle.

Przygotowanie

DO. Rozmaz

1.- Umyj bardzo dobrze slajdy, sucha z chłonnym papierem i oznacz je. Etykieta musi wskazywać zawartość przygotowania, daty i nazwy tych, którzy ją przetworzyli.

2.- Zapal lżejszy i sterylizuj uchwyt zaszczepienia w płomieniu do czerwonego żywa.

3.- Niech uchwyt.

4.- Weź bakteryjną rurkę uprawną, zdejmij czapkę i szybko przejdź usta rurki w pobliżu lżejszego płomienia (płomień).

5.- Wprowadź uchwyt zaszczepienia do rurki zawierający hodowlę bakteryjną i weź próbkę.

6.- Jeśli uprawa jest w cieczy, umieść próbkę pobraną uchwytem w środku zjeżdżalni i starannie rozszerz ją w okręgu o średnicy około 2 cm.

7.- Sterylizuj uchwyt zaszczepienia.

8.- Pozwól na wysuszenie rozmazu w powietrzu.

9.- Powtórz kroki od 3 do 8 trzy razy.

10.- Jeśli uprawa jest w stałej, na szkiełce należy wcześniej umieścić kroplę wody destylowanej. Odbywa się to w celu wymieszania małej próbki upraw wykonanej z uchwytem zaszczepienia, zgodnie ze wskazaniami kroków od 2 do 5 (warunki ASEPSIS).

Może ci służyć: Biologia rozwoju: historia, jakie badania, aplikacje

jedenaście.- Rozszerz próbkę rozcieńczoną kroplem wody na szkiełku i powtórz trzykrotnie.

B. Fiksacja

1.- Dodaj do nauczycieli suchego rozmazu w płynnym podłożu -dwa krople metanolu lub absolutnego etanolu.

2.- Pozwól, aby powietrze wyschnęły od zapalniczki.

3.- Jeśli rozmaz pochodzi z solidnej kultury, ustalony suchy zapach jest wykonany z ciepła, przekazując go 2 do 3 razy szybkie.

4.- Dotknij dna rozmazu częścią grzbietową lewej ręki (dla prawej strony; w przeciwnym razie użyj prawej ręki) i sprawdź, czy jest zimno.

C. Proste barwienie

1.- Dodaj do 2 kropli wybranego barwnika i pozwól działać przez czas wymagany w określonych protokołach każdego barwnika (zwykle od 1 do 5 minut).

2.- Niektóre barwniki wymagają użycia ciepła do aktywacji, w którym to przypadku musisz być bardzo ostrożny podczas podgrzewania bagażu w płomieniu zapalniczki (manipulując go pincewami i unikanie gotowania). Przegrzanie rozmazu może zniszczyć pożądane komórki.

3.- Zdejmij nadmiar mycia barwnika z wodą destylowaną ze zdjęcia. Wyeliminuj mycie wody, delikatnie uderzając w zjeżdżalnię do piosenki, skłonna na stole roboczym.

4.- Pozwól na suszenie powietrza.

5.- W zależności od rodzaju obserwacji, na tym etapie używana jest pokrycie lub nie. Pokrycie i zachowuje rozmaz. Jeśli na tym etapie przeprowadzana jest obserwacja nurkowania oleju, rozmaz nie jest używany, ale rozmazu nie można zachować.

D. Ostateczne zachowanie wymazu

1.- Zanurz rozmaz sukcesywnie w każdym z roztworów wskazanych poniżej, przez co najmniej 5 minut. Celem tych „łazienek” jest pozostawienie rozmazu całkowicie odwodnionych. Każdy odczynnik musi być dobrze osuszony, zanim wejdzie do rozmazy w następującej łazience.

Kolejność kąpieli odwodnionych jest następująca:

1. 70 % etanolu
2. 95 % etanolu
3. Czysty aceton
4. Mieszanka acetonowa -xilol 1: 1
5. Xilol

Następnie pozwól suszeniu powietrza.

2.- Zamontuj osłony, najlepiej 22 × 22 mm, przy użyciu balsamu Kanady lub innych środków do montażu.

Bibliografia

1. Cappucino, J.G. i Welch, C.T. (2017). Mikrobiologia: laboratorium ręczne. osoba.
2. Holt, J.G. Redaktor. (1977). Krótszy podręcznik bakteriologii determinatywnej Bergey. 8^th Baltimore: The Williams and Wilkins Co.