Tioglicololowy fundament bulionu, przygotowanie i zastosowania

On Bulion tioglikolanowy Jest to wzbogacony środek spójności płynów. Jest znany z akronimu FTM). Został stworzony przez Brewera i zmodyfikowany w 1944 r. Przez Vera, która włączyła go pepton kazeiny.

Ta pożywka ma niski potencjał utleniania, więc nie jest zalecane do opracowywania ścisłych bakterii tlenowych, ale idealnie nadaje się do odzyskiwania opcjonalnych bakterii tlenowych, ścisłych i mikroaerofilowych bakterii beztlenowych.

Bulion tioglikolanowy bez wskaźnika. Przykładowe wydzielanie pochwy. Źródło: Bobjgalindo [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licencje/nabrzeże/4.0)]

Wysoka wydajność zaobserwowana z tym medium w izolacji i odzyskiwaniu szerokiej gamy mikroorganizmów, przyjęła ją przez Farmakopeię Stanów Zjednoczonych (USP), przez oficjalne stowarzyszenie chemików rolniczych (AOAC) i europejskiego farmakopoei (EP).

Organizacje te zalecają to testom kontroli sterylności produktów farmaceutycznych i wzbogacania różnych rodzajów próbek.

Cado tioglikolanowe składa się z ekstraktu drożdżowego, kazeiny digitowej, bezwodnej dekstrozy, L-cistiny, chlorku sodu, tioglikolanu sodu, spoczynku i piku w niewielkiej ilości w niewielkiej ilości w niewielkiej ilości.

Istnieje kilka wersji tego pożywki, w tym: bulion tioglikolanowy ze wskaźnikiem, bulion tioglikolanowy bez wskaźnika, bulion tioglikolanowy z wskaźnikiem bogactwa z heminą i witaminą K_1, I bulion tiogliokolanowy z węglanem kalcycznym.

Należy zauważyć, że wariant bulionu tioglikinianowego wzbogaconego heminą i witaminą K służy do poprawy wzrostu wymagających ścisłych beztlenów, a wariant bulionu tioglikolanowego, który zawiera węglan wapnia, jest przydatny do przeciwdziałania kwasom wytwarzanym podczas mikrobiologicznego wzrostu.

[TOC]

Podstawa

Bulion tioglikolanowy jest uważany za wzbogacanie, nie selektywny, ponieważ pozwala na rozwój większości bakterii nieudanych. Wymagania żywieniowe są dostarczane przez ekstrakt drożdżowy, strawiono trzustki i glukozę.

Z drugiej strony to medium, mimo że jest bulionem, zawiera niewielką ilość agaru; Powoduje to niski potencjał redukcji tlenku, ponieważ hamulce wejścia tlenu, tak że tlen maleje, gdy pogłębia się w rurce.

Dlatego to medium jest idealne do opracowania opcjonalnych bakterii aerobowych, mikroaerofilów i ścisłego beztlenowego, które ostatnie 2 bez inkubacji w tych warunkach. To samo medium reguluje ilość tlenu w środowisku, nieobecnym na dnie rurki i w wystarczającej ilości na powierzchni.

Może ci służyć: fenyloalanina: cechy, funkcje, biosynteza, żywność

Podobnie, tioglikolan i l-cistin działają jako środki redukujące, przyczyniając się do zapobiegania gromadzeniu substancji szkodliwych dla rozwoju bakterii, takich jak nadtlenek. Ponadto związki te zawierają grupy sulfidryl (-SH-), neutralizując hamujące działanie pochodnych rtęci, arsenu, wśród innych metali ciężkich.

Z drugiej strony niepokój jest wskaźnikiem redukcji tlenku. Ta substancja jest bezbarwna, gdy jest zmniejszona i różowa po utlenianiu. Istnieją warianty bulionu tiogliokolanowego ze wskaźnikiem i bez wskaźnika. Jego użycie będzie zależeć od rodzaju preferencji próbki i laboratoryjnej.

Tymczasem chlorek sodu utrzymuje równowagę osmotyczną bulionu tioglikinianowego, a stosowanie glukozy anhydry zapobiega nadmiarowi wilgoci w odwodnionym środowisku.

Przygotowanie

Bulion tioglikolanowy ze wskaźnikiem

Waż 29,75 GR odwodnionej pożywki i rozpuść się w 1 litorze wody destylowanej. Mieszanina pozostawia się po około 5 minutach. Przynieś źródło ciepła i często mieszaj, aż całkowicie się rozpuści.

Wlej medium do probówek i autoklaw w 121 ° C przez 15 minut. Pozwól ostygnąć przed użyciem. Sprawdź wkładkę domu komercyjnego pod kątem jego ochrony. Niektórzy zalecają oszczędzanie w temperaturze pokojowej w ciemnym miejscu, a inni w lodówce chronione przed światłem.

Przygotowane średnie pH wynosi 7,1 ± 0,2.

Kolor odwodnionego pożywki jest lekki i przygotowany beżowy jest wyraźnym bursztynem z pewnym opalescem.

Bulion tioglikolanowy z wskaźnikiem heminy i witaminy K₁

Istnieją media komercyjne, które już przynoszą heminę i witaminę k₁, Specjalne do uprawy beztlenowej.

Jeśli nie masz wzbogaconego medium dla beztlennych, można przygotować podstawowy bulion tioglikolanowy. Aby to zrobić, dodaje się 10 mg chlorowodorku heminy i 1 mg witaminy K₁ Dla każdego litra medium. Jeśli jednak krew lub surowica zostanie dodana do bulionu tioglikolanowego, dodanie heminy, witamina K nie jest konieczna.

Może ci służyć: konkurencja wewnątrzgólna: cechy, typy i przykłady

Bulion tioglikolanowy z węglanem wapnia

Jest komercyjnie i przygotowuje się zgodnie z instrukcjami wkładki.

Bulion tioglikolanowy bez wskaźnika

Ma ten sam skład podstawowego tioglikatu, ale nie zawiera resazuryny.

Zważyć 30 grać odwodnioną pożywkę i rozpuść się w litrom wody destylowanej. Reszta preparatu jest równa tej opisanej w bulionie tioglikatu ze wskaźnikiem.

Używać

Bulion tioglikolanowy jest przydatny do wzbogacania próbek klinicznych, szczególnie dla tych ze sterylnych miejsc. Jest również przydatny do próbek nieklinicznych, takich jak kosmetyki, leki itp.

W przypadku zaszczepienia próbek ciekłej (takich jak CSF, między innymi płyn maziowy), próbki najpierw odwirują, a następnie 2 krople osadu są pobierane i umieszczane w bulionie tioglikolanowym. Inkubuj w 35 ° C przez 24 godziny. Jeśli w tej chwili nie ma wzrostu (zmętnienia), inkubuje się to maksymalnie 7 dni.

Jeśli próbka zostanie pobrana za pomocą hiopusa, pożywki hodowlane są najpierw zaszczepione w płytkach, a na koniec wymaz jest wprowadzany do bulionu, część, która się wyróżnia, a rurka jest pokryta, pozostawiając wymaz w środku. Inkuba w 35 ° C przez 24 godziny, 7 dni maksymalnie.

W przypadku próbek stałych należy go homogenizować w roztworze soli fizjologicznej (SSF), a następnie zaszczepić bulion tioglikolanowy z 2 kroplami zawiesiny.

Czasami może być stosowany jako środek transportu dla próbek, w których podejrzewa się obecność surowych beztlennych.

Wariant bulionu tioglikolanowego z węglanem wapnia jest wykorzystywany do utrzymania kontroli przez dłuższy czas, ponieważ ma on zdolność do zneutralizacji kwasów wytwarzanych przez zastosowanie glukozy; Te kwasy są toksyczne dla niektórych bakterii.

Wzrost bulionu tioglikolanowego zostanie zaobserwowany z powodu zmętnienia środowiska. Zaleca się przeprowadzenie barwienia gramu, a następnie subiektywne w pożywkach nieselektywnych i selektywnych, w zależności od rodzaju próbki i mikroorganizmów, których są podejrzane.

QA

W przypadku kontroli sterylności zaleca się inkubowanie jednego lub dwóch bulionów bez zaszczepienia. Oczekiwanym rezultatem jest przezroczysty bulion, bez zmiany koloru, chociaż jest normalny, aby zaobserwować lekki różowy kolor.

Może ci służyć: Morski łąka: co to jest, cechy, flora, fauna

Do kontroli jakości, od 10 do 100 UFC certyfikowanych elementów sterujących, takich jak Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Bakteridy vulgatus ATCC 8482.

Inkubuj w 30-35 ° C w aerobiozie przez 24 godziny do maksymalnie 3 dni, ponieważ mikroorganizmy są szybkim wzrostem.

We wszystkich przypadkach oczekuje się dobrego rozwoju, z wyjątkiem Micrococcus luteus I Bacillus subtilis, gdzie może wystąpić umiarkowany rozwój.

Do kontroli jakości bulionu tioglikolanowego wzbogaconego heminą i witaminą K₁, Można użyć szczepów kontrolnych Bakteridy vulgatus  ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 i Bakteridy fragilis ATCC 25285. Oczekiwanym rezultatem jest zadowalający wzrost.

Zalecenia

-Czasami widać, że powierzchnia bulionu tioglikatu ze wskaźnikiem staje się różowa; Wynika to z utleniania środowiska. Jeśli różowy kolor obejmuje 30% lub więcej całkowitego bulionu, można ogrzać w łaźni wodnej przez 5 minut, ponownie chłodząc i użyć.

To wyeliminuje pochłonięty tlen, zwracając medium do pierwotnego koloru. Tę procedurę można wykonać tylko raz.

-Aby poprawić wzrost bakterii aerobowych, należy go inkubować z lekko leniwą pokrywką. Jednak w tym celu preferowane jest użycie w tym celu infuzyjnego bulionu mózgowego lub trypowego bulionu sojowego dla dobrego rozwoju surowych tlenków.

-Należy unikać zamrażania środowiska lub przegrzania, ponieważ oba warunki uszkadzają medium.

-Bezpośrednie światło uszkadza medium hodowlaną, musi być chronione przed światłem.

Bibliografia

1. Britania Laboratories. USP tioglikolan z wskaźnikiem. 2015. Dostępne na: Labbritania.com.
2. Quos Sas Laboratories. 2019. Bulion tioglikolanowy. Dostępne na: Quios.com.współ
3. BD Laboratories Fluid Tioglikollate Medium (FTM). 2003. Dostępne na: BD.com/Europe
4. Media BBL przygotowane w rurach do uprawy beztlenowych mikroorganizmów. Media tioglikate. 2013. Dostępne na: BD.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Pan -american Editorial S.DO. Argentyna.