TCBS Agar What Is, fundament, przygotowanie, użycie

On Agar TCBS Jest to wysoce selektywna i różnicowa kultura stała, stosowana do izolacji i uprawy bakterii z rodzaju Vibrio, Vibrio cholerae, v. Vulnificus I V. Parahaemolyticus jako główne patogeny tego gatunku.

Akronim TCBS średnio cytrynian żółciowy tiosulfate żółci. Ten agar jest również znany jako selektywne medium dla wibrii. Oryginalna formuła została stworzona przez Nakanishi, a następnie zmodyfikowana przez Kobayashi.

Składa się z ekstraktu drożdżowego, peptonu mięsa, tripteiny, cytrynianu sodu, tiosulfinianu sodu, żółci wołu, sacharozy, chlorku sodu, cytrynianu żelazowego, niebieskiego bromolu, błękitu tymolowego i agaru.

Ten skład umożliwia odpowiedni rozwój gatunków wibrium z próbek wody, żywności i kału; z wyjątkiem Vibrio Hollisae, To nie rośnie w tym medium. Ponadto pożywka TCBS jest w stanie hamować wzrost innych towarzyszących bakterii, zwłaszcza coli.

Ze względu na poważne problemy z przewodu pokarmowego i pozapiejscowe, które wytwarzają niektóre gatunki z rodzaju Vibrio, ich diagnoza jest bardzo ważna. Człowiek jest zakażony głównie spożyciem surowej lub małej gotowanej żywności morza lub zanieczyszczonych wód, ale także przez infekcję rany.

Z tego powodu laboratoria kliniczne muszą obejmować agar TCBS w badaniu copults z płynnych próbek kału, szczególnie w wyglądzie wody ryżowej. Zwłaszcza jeśli pacjent odnosi się do kontaktu z wodą morską lub spożywanym skorupiakiem lub rybami.

Podstawa

Ekstrakt drożdży, peptones mięsa i tripteína są pożywnym źródłem tego medium. Jednak agar TCBS jest niegościnnym pożywką dla większości bakterii.

Jego wysoką selektywność jest podawana przez agregat cytrynianu sodu i żółci wołu; Oba są czynnikami hamującymi, które zapewniają również alkaliczne pH do pożywki, ograniczając wzrost towarzyszącej flory i faworyzując wzrost V. Cholerae, wśród innych gatunków. Szczególnie Vibrio Cholerae jest bardzo wrażliwy na kwasowość.

Ze swojej strony chlorek sodu równoważy osmotycznie równoważy się do środowiska. Ponadto, ponieważ jego stężenie jest wysokie, działa również jako czynnik inhibitora, sprzyjając wzrostowi bakterii haloficznych.

Tarks to fermentowalny cukier, który wraz z niebieskimi wskaźnikami pH niebieskimi i niebieski. Z tego powodu, przy tym medium możliwe jest odróżnienie szczepów fermentacyjnych od niezaledawki.

Kolonie fermentarnych szczepów sacharozy rozwijają się w kolorze i obrócą pożywkę z zielonego na żółty przez wytwarzanie kwasów. Nieprzeważnia półprzezroczysta, a średnie pozostałości oryginalnego koloru (zielony).

Podobnie, ta pożywka zawiera tiosulfinian sodu jako źródło siarki i cytrynianu żelaza jako środka odkrywczego. Oba pokazują bakterie zdolne do wytwarzania siarkowodoru (gaz bezbarwny). H₂S powstaje z tiosiarczanu, a następnie reaguje z cytrynianem żelazowym, powstaje widoczny czarny osad.

Wreszcie, agar jest tym, który zapewnia solidną spójność środowiska.

Przygotowanie

Ważyć 89 grać odwodnionego pożywki i rozpuść się w litrom wody destylowanej. Pomoc w rozwiązaniu w celu częstego ogrzewania i mieszania. Mieszaninę można gotować do 2 minut.

To medium nie jest autoclava. Po rozwiązaniu jest obsługiwany bezpośrednio na sterylnych płytkach. Poprzez zestalanie są one uporządkowane w odwrócony sposób w płytkach krwi i są przechowywane w lodówce (2-8 ° C).

Pożywka po przygotowaniu musi wynosić pH 8,6 ± 0,2.

Kolor odwodnionego pożywki to lekki beżowy lub beżowy, a kolor środowiska to zielony las lub niebieski zielony.

Ważne jest, aby płytki się rozłożyć przed siewem próbek.

Używać

Najczęstszą próbką wibrującej izolacji są odchody biegunkowe.

Próbki stołka nie można wysiewać natychmiast w selektywnym środowisku, należy je przetransportować w środku Cary Blair.

Aby zwiększyć wrażliwość uprawy, kał można przekazać wodą Peptonada na pH 8,4 jako środek wzbogacania przez maksymalnie 8 godzin, stamtąd jest subiektywny dla średniego TCBS.

Należy również pamiętać, że niektóre wibracyjne szczepy mogą powodować posocznicę u pacjentów z immunosupresją, dlatego można je izolować z hodowli krwi. Podobnie próbki żywności i żywności z morza można przeanalizować, gdy występują epidemie wybuchu choroby cholery.

Posiany

Inokulum badanej próbki musi być widoczna, wysiewana jest metoda wyczerpania. Płytki inkubuje się w 37 ° C przez 24 godziny w aerobiozie.

Przypuszczalne kolonie Vibrio Cholerae Są średnie, gładkie, nieprzezroczyste, cienkie i żółte krawędzie, ponieważ fermentują sacharozę.

Podobnie uprawiaj gatunki z V. Alginoliticus, V. rzeka, V. Hareyi, v. Cincinnatiensis, v. Furnissii, v. Metschnikovii a niektóre V. Vulnificus. Inne ważne klinicznie gatunki, takie jak V. Parahaemolyticus Nie fermentują sacharozy, rozwijając się jako zielone kolonie oliwkowe.

Z drugiej strony należy pamiętać, że niektóre szczepy aeromonów i plamiomonów, które są oksydazą (+), mogą rosnąć w tym pożywce, rozwijając żółte kolonie, które mogą pomylić klinicystę. Podczas gdy niektóre szczepy pseudomonów również oksydaza (+) rosną jako zielone kolonie, a także V. Parahaemolyticus.

Ograniczenie

Test oksydazy, który jest dodatni dla rodzaju Vibrio, nigdy nie może być przeprowadzany z kolonii uzyskanych z agaru TCBS, ponieważ uzyskany wynik będzie fałszywie ujemny. Związki medium silnie zakłócają ten test. Dlatego należy to zrobić od osób w agarze krwi.

QA

Udowodnienie, że medium jest w dobrym stanie, jest to wskazane.

W tym celu możesz użyć szczepów:

-Vibrio Cholerae - zadowalający wzrost (żółte kolonie, półprzezroczyste krawędź).

-Vibrio parahaemolyticus - Zadowalający wzrost (kolonia z zielonym środkiem i półprzezroczystą krawędzią).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - Satysfakcjonujący wzrost (żółte kolonie z aureatami o tym samym kolorze wokół kolonii).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - Całkowite lub częściowe hamowanie (małe żółte lub półprzezroczyste kolonie).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- Częściowe lub całkowite hamowanie (niebieskie kolonie).

-Escherichia coli ATCC 25922 - całkowicie zahamowany.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Całkowite lub częściowe hamowanie. (Małe kolonie Zielona krawędź półprzezroczysta krawędź).

Inkubacja pożywki bez zaszczepienia nie powinna mieć zmiany.

Bibliografia

1. Laboratorium BD. Bd. Agar TCBS. Dostępne na: BD.com
2. Britania Laboratories. Średnie TCBS. Dostępne na: Britanialab.com