Trzymanie tego, co jest, podkład, przygotowanie, używa

On Agar Endo lub średnie endo to solidna, różnicowa kultura i z pewnym stopniem selektywności. Oryginalna formuła została utworzona przez ENDO w 1904 r. W celu rozróżnienia bakterii fermentary. Wstępny Salmonella Typhi, Ale później cel medium zwrócił się do poszukiwania coli.

Początek agaru Endo pozostał, ale jego sformułowanie doznało niezliczonych zmian na przestrzeni lat. Obecnie pożywka składa się z tkanki zwierzęcych, tkanki tkankowej, laktozy, nadmuchania wodoru, siarku sodu, podstawowego fuksyny i agaru i agaru.

Główne zastosowanie pożywki zostało powiązane z izolacją i różnicowaniem gramowych bachilli należących do rodziny Enterobacteriaceae i innych pobliskich rodzin.

Przez długi czas był używany w wykrywaniu coli w próbkach wody, nabiału i jedzenia, ale dziś użycie tego pożywki zostało przesunięte przez inne podobne funkcje. Jednak niektóre laboratoria mikrobiologii wykorzystują ten agar do izolacji z próbek klinicznych.

Podstawa

Agar Endo zawiera peptones, które służą jako źródło aminokwasów, azotu, węgla i energii, niezbędne do wzrostu małych wymagających mikroorganizmów.

Z drugiej strony lekko selektywny charakter agaru jest dostarczany przez agregat siarczku sodu i podstawowej fuksyny; Oba składniki częściowo lub całkowicie hamują rozwój większości dodatnich bakterii Gram.

Zróżnicowany charakter jest podawany przez obecność fermentacyjnego węglowodanu, który w tym przypadku jest laktoza i podstawowa fuksyna, która również służy jako wskaźnik pH.

Bakterie gramowe, które rosną w tym agaru i są w stanie fermentować laktozę, będą tworzyć silne różowe kolonie; bycie patognomonicznym Escherichia coli Formacja ciemnoczerwonych kolonii z zielonkawym metalowym blaskiem. Wynika to z wysokiej produkcji kwasu z fermentacji węglowodanów.

Należy zauważyć, że medium znalezione wokół kolonii również zmienia silny różowy kolor. Podczas gdy gram negatywny bachilli bez fermentowania laktozy tworzą jasnoróżowe kolonie podobne do średniego lub bezbarwnego.

Fosforan dopotasowy wodoru równoważy pH pożywki, a agar jest składnikiem, który zapewnia solidną spójność.

Przygotowanie

Agar Endo

Ważyć 41,5 grania odwodnionego pożywki i rozpuść się w 1 litorze wody destylowanej. Rozgrzej mieszaninę często mieszającą, aż do całkowitego roztopienia średniego. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C, 15 funtów ciśnienia, przez 15 minut.

Po usunięciu z autoklawu pozwól ostudzić do przybliżonej temperatury 45-50 ° C, wstrząśnij mieszaniną do homogenizacji przed podaniem. Wlać 20 ml sterylnymi płytkami Petriego.

Upowszechnij płytki, zainwestuj i oszczędzaj w tablicy lub owinąć ciemnym papierem przed zapisaniem w lodówce. Bardzo ważne jest ochrona przygotowanego środowiska przed bezpośrednim światłem. Zalecaną praktyką jest przygotowanie dokładnej ilości potrzebnej.

Jeśli są przechowywane w lodówce, płytki powinny być dozwolone do temperamentu przed użyciem.

Średnie pH musi wynosić od 7,2 do 7,6, a kolor przygotowanego pożywki ma jasnoróżowy kolor.

Agent M-Endo

Istnieje inna wersja Agar Endo (M-Endo), która następuje po formule McCarthy, Delaney i Grasso, która zawiera więcej związków i różni się w postaci przygotowania.

Ten wariant zawiera: laktoza, triptoza, strawiona enzymatyczna kazeinowa, enzym tkanki zwierzęcy, chlorek sodu, fosforan dibásiczny potasu, sód siarczkowy sodu, sód sodu, sód sodu i agar.

W tym przypadku 51 GR odwodnionego pożywki jest ważna i zawieszona w 1 litorze wody destylowanej zawierającej 20 ml etanolu.

Lekko podgrzewaj się, mieszając, aby całkowicie rozpuścić medium. Nie powinien się przegrzać i albo sterylizuje w autoklawie. Gdy mieszanina jest jednorodna, serwuj w petriego sterylne i pozwól się zestalić.

Używać

W niektórych krajach jest nadal używany do liczenia całkowitej i kału w wodzie i próbkach żywności, zwłaszcza obecności Escherichia coli jako główny wskaźnik zanieczyszczenia kału.

Agar M-Endo jest zalecany przez American Public Health Association (APHA) do monitorowania i kontroli programów dezynfekcji ścieków i leczenia, a także w ocenach jakości wody pitnej.

Najczęściej stosowaną metodą jest filtracja błonowa, wcześniejsze wzbogacenie próbki z bulionem laurylu siarczanu przez 2 do 4 godzin.

Może być również stosowany jako substytut agaru EM w analizie mikrobiologicznej żywności i wody za pomocą najbardziej prawdopodobnej techniki liczby (NMP), szczególnie w pełnej fazie potwierdzającej, aby potwierdzić obecność I. coli z mrocznych bulionów EC.

QA

Aby ocenić jakość partii końcowej przygotowania, zasiane są znane lub certyfikowane kontrole.

Wśród szczepów, które można użyć do tego celu, są: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Kanalizacja Enterobacter ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella Typhimurium ATCC 14028, Shigella Flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 i Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Szczepy są wysiewane przez wyczerpanie i inkubowane w 37 ° C przez 24 godziny w aerobiozie.

Oczekiwane wyniki to:

• Dla Escherichia coli: Mocne czerwone kolonie, z metalicznym połyskiem.
• Dla I. Cloacae I K. Pneumoniae Kolonie muszą być różowymi mucoidami.
• W przypadku s. Typhimurium, s. Flexneri i p. Mirabilis Kolonie są zwykle jasnoróżowe lub bezbarwne.
• Wreszcie, I. Faecalis Oczekuje się, że będzie częściowo zahamowany, dlatego jego wzrost musi być słaby z bardzo małymi różowymi kolonami.

Ograniczenia

-Medium Endo ma moc selektywną, może wyhodować niektóre mikroorganizmy dodatnie Grama, takie jak Staphylococcus, Enterococcus, a nawet drożdże.

-Inne bachilli nie należące do rodziny Enterobacteriaceae mogą rozwinąć się na tym medium, na przykład Pseudomonas sp I Aeromonas sp. Charakterystyką tych szczepów to bezbarwne nieregularne kolonie.

-Ta przygotowana medium jest bardzo wrażliwa na światło, dlatego przedłużając się narażeniem na to pogorszenie systemu wskaźnika, nieodwracalnie uszkadzając środowisko.

-Średnie składniki są uważane za rakotwórcze, więc należy unikać bezpośredniego kontaktu.

-Odwodniona pożywka jest bardzo higroskopijna i musi być utrzymywana w oryginalnym pojemniku w temperaturze pokojowej, dobrze zamkniętej i suchym środowisku.

Bibliografia

1. BD Laboratories. Agar Endo. Dostępne na: BD.com
2. Neogen Laboratories. Jestem agarem. Dostępne na: Foodsafety.Neogen.com