Agar Count Standard Foundation, przygotowanie i zastosowania

On standard agarowy Jest to solidne, nieselektywne pożywkę hodowlaną, zaprojektowaną do kwantyfikacji tlenowego obciążenia mikrobiologicznego obecnego w wodach konsumenckich, ściekach, napojach mlecznych, między innymi. Ta pożywka jest również znana jako agar PCA) ze względu na akronim w języku angielskim agarze. Został stworzony w 1953 roku przez Buchbinder, Baris i Goldstein.

Standardowe podłoże konta składa się z ekstraktu drożdżowego, tripteiny, glukozy, agaru i wody destylowanej. Ten preparat zawiera podstawowe elementy odżywcze, które pozwalają na rozwój obecnego, wymagającego obciążenia mikrobiologicznego Nienodzniejszego.

Rozcieńczenia dziesiętne dla standardowej liczby liczenia UFC. Źródło: Quentin Geissmann [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licencje/by-sa/3.0)]

Ponieważ medium nie zawiera inhibitorów, bakterie mogą się rozwijać bez żadnych ograniczeń, więc jest idealny dla ogólnej liczby kolonii. Jednak technika kwantyfikacji płytki nazębnej nie wykryje wszystkich obecnych bakterii, ale tylko te, które są zdolne do wzrostu w warunkach środowiskowych, do których poddawany jest agar.

W tym sensie technika kwantyfikacji płytki jest zwykle określana przez ilość bakterii tlenowych mezofilowych, to znaczy tych, które są opracowane w temperaturach od 25 do 40 ° C, z optymalną temperaturą wzrostu w 37 ° C.

Ta grupa bakteryjna jest bardzo ważna, ponieważ istnieje większość patogennych bakterii dla człowieka.

Należy zauważyć, że czasami odsetki kwantyfikują ilość bakterii psychofilicznych obecnych w żywności. Te bakterie to te, które rozwijają się w niskich temperaturach (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Podobnie bakterie termofilowe, które rozwijają się w zakresie między 50 ° C w 80 ° C lub więcej, mogą być ważne w niektórych rodzajach pokarmów, takich jak puszki.

Mikrobiologiczna kwantyfikacja jest wyrażana w jednostkach formujących okrężnicę (UFC) na gram lub mililitr próbki.

[TOC]

Podstawa

Standardowe konto zostało zaprojektowane w celu umożliwienia zadowalającego rozwoju bakterii aerobowych niezmiennych, ponieważ ekstrakt drożdży, tripteine ​​i glukoza zapewniają niezbędne składniki odżywcze do dobrego rozwoju mikrobiologicznego.

Może ci służyć: Alizarina: Charakterystyka, przygotowanie, zastosowania i toksyczność

Z drugiej strony medium ma jasny kolor i przezroczysty wygląd, więc idealnie nadaje się do wizualizacji kolonii opracowanej metodą wysy w IN (wyciek płyt).

Możliwe jest również liczenie kolonii metodą zasadzoną na powierzchni za pomocą szpatułki Drigalski.

Gdy obciążenie drobnoustrojów jest wysokie, należy wykonać rozcieńczenie dziesiętne badanej próbki, aby móc wykonać liczbę UFC.

Należy zauważyć, że to medium jest zalecane przez American Public Health Association (APHA) dla aerobowych messofili.

Przygotowanie

Ważyć 23,5 GR odwodnionej pożywki i rozpuść się w litrom wody destylowanej. Aby całkowicie się rozpuścić, mieszanina powinna być podgrzewana przez często machanie, aż się zagotuje. Poniższe kroki zależą od posadzonej techniki, która zostanie zastosowana.

Dla techniki zrzucania płyty

Rozpowszechniaj, dając od 12 do 15 ml w rurkach testowych. Następnie sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Niech ustąpi pionowo w postaci taco. Zapisz aż do użycia.

Stopić taco, gdy będzie używane. Po zatrzymaniu go w Marii do 44-47 ° C podczas przygotowywania próbek.

Do zasianego powierzchni

Sterylizuj pożywkę w autoklawie w 121 ° C, a następnie rozłóż 20 ml w sterylnych płytkach Petriego. Pozwól, aby umocnić, zainwestować i zapisać w lodówce do użycia.

Hartować płytki przed użyciem. Średnie pH musi wynosić 7,0 ± 0,2.

Używać

Standardowe konto jest stosowane w technice aerobowej mezofilnej liczby podczas analizy mikrobiologicznej wody i żywności. Rachunek mezofilosu aerobowego jest konieczny, ponieważ określa jakość zdrowia badanej próby.

Zastosowanie tej techniki (przy użyciu tego medium) umożliwia makroskopową wizualizację izolowanych kolonii do kwantyfikacji.

Technika rozładowania płyty (zasiana z głębokością)

-Procedura

Technika składa się z następujących:

1) Homogenizuj próbkę w celu redystrybucji obecnych bakterii.

2) Początkowe zawieszenie wykonuje się w sterylnej butelce lub torbie, w odniesieniu do stosunku 10 GR lub 10 ml w 90 ml rozcieńczenia (10^-1).

Może ci służyć: ficology

3) Od początkowego zawieszenia odpowiednie rozcieńczenia dziesiętne są wykonywane w zależności od rodzaju próbki. Np.: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Rozcieńczenia są wykonywane za pomocą roztworu buforu w wodzie lub fosforanowej Peptonada.

Dla tego^-2 i tak dalej.

4) 1 ml każdego rozcieńczenia jest przyjmowane i umieszczane na pustych sterylnych płytkach Petrie.

5) Dodaj do każdej płyty od 12 do 15 ml agaru wcześniej stopionego i spoczywa na 44–47 ° C.

6) Podaj miękkie ruchy obrotowe do płyt, aby równomiernie rozłożyć próbkę obok agaru i umożliwić zestalenie.

7) Zainwestuj płytki i inkubuj w 37 ° C w aerobiozę przez 24 do 48 godzin.

8) Kulminacją, że czas przechodzi do badania płyt i zliczania kolonii w rozcieńczeniu, które na to pozwala. Te płyty, które mają od 30 do 300 UFC, są wybrane na konto.

Liczba może być podręczona lub może korzystać z zespołu księgowego kolonii.

Wartości dozwolone przez ML próbki mogą się różnić w zależności od kraju w zależności od zasad, przez które są rządzone.

-Obliczanie UFC

Ogólne obliczenia odbywa się przy użyciu następującego wzoru:

Wzór ogólnego obliczenia kwantyfikacji UFC. Źródło: National Drug Administration and Medical Technology (Anmat). Analiza mikrobiologiczna żywności, oficjalna metodologia analityczna, mikroorganizmy wskaźnikowe. 2014 Tom 3. Dostępne na: Anmat.Gov.ar

Wyrażaj wyniki w 1 lub 2 cyfr, mnożąc się przez odpowiednią bazę 10. Przykład: jeśli wynik to 16.545 jest zaokrąglone na podstawie trzeciej cyfry o 17.000 i zostanie wyrażone w następujący sposób: 1,7 x 10⁴. Teraz, jeśli wynik był 16.436 jest zaokrąglone do 16.000 i wyraża 1.6 x 10⁴.

Technika zasiana powierzchni

-Procedura

-Zaszczepić 0,1 ml próbki bezpośredniej, jeżeli jest płynem, początkowe zawieszenie 10^-1 lub z kolejnych rozcieńczeń 10^-2, 10^-3 itp., w centrum standardowej płyty konta.

Może ci służyć: flora i fauna Tamaulipas: bardziej reprezentatywne gatunki

-Rozłóż próbkę za pomocą szpatułki Drigalski lub szklanej pręta w postaci L. Odstaw na 10 minut.

-Zainwestuj płytki i inkubuj w aerobiozę w 37 ° C przez 24 do 48 godzin.

-Połącz się do liczenia kolonii, wybierz te płyty, które są w zakresie od 20 do 250 UFC.

-Obliczanie UFC

Do obliczeń stosuje się współczynnik rozcieńczenia, co jest odwrotnością. Liczba do 2 znaczących cyfr jest zaokrąglona (zaokrąglanie zgodnie z trzecią cyfrą) i jest wyrażana w mocy podstawowej 10. Na przykład, jeśli 224 UFC jest liczone w próbce bez rozcieńczenia (10^-1), Odnotowano 22 x 10¹  UFC, ale jeśli liczba wynosiła 225, zgłoszono, że 23 x 10¹ UFC.

Teraz, jeśli 199 UFC zostanie policzone w rozcieńczeniu 10^-3, 20 x 10 zostanie zgłoszone⁴ UFC, ale jeśli 153 UFC zostanie zliczone w tym samym rozcieńczeniu, zostanie zgłoszone 15 x 10⁴ UFC.

QA

Standardowe medium konta można ocenić przy użyciu certyfikowanych znanych szczepów, takich jak: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella Flexneri ATCC 12022.

Jeśli pożywka hodowlana jest w optymalnych warunkach, we wszystkich przypadkach oczekuje się zadowalającego wzrostu, z wyjątkiem L. Fermentum które mogą mieć regularną wydajność.

Aby ocenić sterylność pożywki hodowlanej, należy inkubować jedną lub dwie płytki z każdej przygotowanej działki (bez zaszczepienia) w 37 ° C w aerobiozie przez 24 godziny. Po tym czasie nie należy zaobserwować wzrostu ani zmiany koloru pożywki.

Ograniczenia

-Nie stopić agaru więcej niż raz.

-Przygotowane medium może trwać do 3 miesięcy, o ile pozostaje w lodówce i chronione przed światłem.

-To medium nie nadaje się do wymagających mikroorganizmów lub beztlennych.

Bibliografia

1. National Administration of Medicines Food and Medical Technology (Anmat). Analiza mikrobiologiczna żywności, oficjalna metodologia analityczna, mikroorganizmy wskaźnikowe. 2014 Tom 3. Dostępne na: Anmat.Gov.ar
2. Diffco Laboratories Francisco Soria Melguizo, S.DO. Agar z liczby płyt. 2009. Dostępne na: http: // f-soria.Jest
3. CDADA PREMADISA LABOROTIONS. Agar dla metod standardowych (PCA) zgodnie z APHA i ISO 4833. Dostępne na: Condalab.com
4. Britania Laboratories. Liczba płytki agarowej. 2015. Dostępne na: Britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B i Velázquez lub. 2009. Techniki analizy mikrobiologicznej żywności. 2 edycja. Wydział Chemii, Unam. Meksyk. Dostępne na: DePa.Fquim.Unam