Fundacja Peptonada, przygotowanie i zastosowania

On Woda Peptonada Jest to środek wzbogacania płynnego, nie selektywnego, stosowanego głównie jako rozcieńczenie próbek pokarmowych lub innych materiałów. Oznacza to, że z chemicznego punktu widzenia jest bardzo proste, zawiera pepton mięsa, chlorku sodu i wody.

Ma pewną wartość odżywczą, umożliwiając wzbogacenie próbki. Jeśli istnieją bakterie pobijne, to medium ma moc naprawy żywotności. Jest to szczególnie przydatne w odzyskiwaniu bakterii należących do rodziny Enterobacteriaceae.

Woda w peptonada w słoikach. Źródło: MSC. Marielsa Gil

W przypadku odzyskiwania salmonellas zaleca się zastosowanie buforowanego wariantu wody Peptonada; Służy to jako sposób wstępnego wzniesienia próbki, w tym przypadku zawiera inne pierwiastki, takie jak fosforan dysol i fosforan dipotasowy.

Zwykle woda w Peptonada przygotowuje neutralne pH, jednak istnieją inne warianty, w których pH jest konieczne do wynoszenia 8,5 ± 0,2 (alkalicznego), ponieważ bakterie, które mają izolowanie, jest alkalofil, jest alkalofil Vibrio Cholerae.

Z drugiej strony to medium może być stosowane jako podłoże podstawowe do testów fermentacji węglowodanów.

[TOC]

Podstawa

Peptonas zapewnia składniki odżywcze wymagane do rozwoju bakterii, zwłaszcza azotu i aminokwasów krótkich łańcucha, podczas gdy chlorek sodu utrzymuje równowagę osmotyczną.

Ponadto medium pozwala rozproszyć, homogenizować i naprawić komórki bakteryjne, które zostały uszkodzone przez poddanie się procesom przemysłowym.

Ponieważ rozcieńczenie jest idealne, skutecznie zastępując roztwór fizjologiczny (SSF) lub roztwór tłumienia fosforanu (PBS).

Wzrost bakterii staje się widoczny dzięki obserwacji zmętnienia tego samego.

Przygotowanie

Przygotowanie domowe (niekomercyjne)

Waż 1 gr z peptonu i 8,5 G. PH należy dostosować do 7,0. Do tego możesz użyć chlorku sodu 1 N.

Może ci służyć: przejściowe uprawy

Przygotowanie za pomocą medium komercyjnego

Zważyć 15 grać odwodnioną pożywkę i rozpuść się w litrom wody destylowanej. Homogenizuj mieszaninę. W razie potrzeby mieszanina gotuje się przez 1 minutę, aby pomóc w całkowitym roztworze. W razie potrzeby serwuj w 100 ml słoikach lub 10 ml rur. Autoklawar w 121 ° C przez 15 minut.

Schodź i użyj w lodówce. Ostateczne pH pożywki wynosi 7,2 ± 0,2.

Kolor odwodnionego pożywki jest lekki i przygotowany beżowy jest czysty bursztyn.

Przygotowanie do testów fermentacji

Do poprzedniego przygotowania - po sterylizacji - węglowodan należy dodać do końcowego stężenia 1%, plus wskaźnik Andrade (kwas fuksyna) lub czerwony fenol (0.018 g/l). Rurki powinny być umieszczone w Durham Bell do obserwacji tworzenia gazu.

Inne warianty wody Peptonada

-Buforowana woda Peptonada

Zawiera enzymatyczną kazeinę hydrolizowaną, chlorek sodu, dihydrogenny fosforan potasu i wodór sodowy fosforan sodu. Ostateczne pH wynosi 7,0 ± 0,2.

Aby się przygotować, zważyć 20 grając odwodnioną pożywkę i rozpuść w 1 litorze wody destylowanej. Pozostaw na około 5 minut. Ogrzewać się o 1 minutę, aż całkowicie się rozpuści.

Nałóż odpowiednie słoiki zgodnie z potrzebą. Sterylizuj za pomocą autoklawu w 121 ° C przez 15 minut.

-Alkaliczna woda Peptonada

Ważyć 25 grać odwodnionego pożywki i rozpuść w 1 litorze wody. Postępuj zgodnie z opisem powyżej. PH wynosi od 8,3 do 8,7.

Używać

Inokulum odbywa się poprzez umieszczenie próbki bezpośrednio.

Służy do rozcieńczenia próbek, zwłaszcza gdy podejrzewa się, że mogą być uszkodzone bakterie. Ogólnie rzecz biorąc, rozcieńczenia to 1:10 i 1: 100.

Może ci służyć: dlaczego grzyby nie produkują własnego jedzenia?

Jest inkubowany przez 24 godziny w aerobiozie w 35-37 ° C.

Próbki stołka

W przypadku próbek kału w poszukiwaniu salmonelli zaleca się stosowanie wody buforowanej lub buforowanej.

Aby to zrobić, postępuj w następujący sposób:

Jeśli utworzone są kale, aby wziąć 1 gr próbki. Jeśli są płynne, weź 1 ml kału i zawieszaj w rurce z 10 ml buforowanej wody Peptonada. W przypadku wymazów odbytniczych pobierz materiał zawarty w wymazie w rurce z wodą buforowaną Peptonada.

We wszystkich przypadkach bardzo dobrze mieszaj i homogenizuj próbkę.

Inkubuj w 37 ° C przez 18 do 24 godzin. Następnie subkulturowe w bulionie wzbogacającego jako bulion bulionu selenito lub bulion tetrationate w 37 ° C przez 18–24 godziny więcej. Wreszcie rozwijaj się między innymi w selektywnych mediach dla Salmonelli, takich jak Agar SS, Agar XLD, Hektoen Agar.

Próbki pokarmu

Woda Peptonada jest wykorzystywana jako środek wzbogacania lub jako prosty rozcieńczenie, ale jeśli poszukiwane są gatunki Salmonelli, jest stosowany jako środek przednrique, jak już opisano.

W jedzeniu postępuj w następujący sposób:

W przypadku pokarmów stałych żałuj 25 gr próbki i dla płynnych pokarmów, zmierz 25 ml tego samego. Umieść tę część w słoikach zawierających 225 ml wody Peptonada. Wymieszaj i homogenizuj próbkę.

Jeśli podejrzewa się, że obciążenie drobnoustrojów jest wysokie, można przeprowadzić rozcieńczenia szeregowe lub dziesiętne, aby ułatwić liczbę jednostek tworzących kolonie (UFC).

Liczba rozcieńczeń będzie zależeć od rodzaju próbki i doświadczenia analitycznego.

Jeśli wręcz przeciwnie, podejrzewa się, że obciążenie drobnoustrojów jest bardzo niskie, nie jest konieczne wykonywanie rozcieńczeń. Następnie subiektywne w selektywnych mediach.

Może ci służyć: katalaza: charakterystyka, struktura, funkcje, patologie

W przypadku żywności z morza, takie jak owoce morza, ryby, w poszukiwaniu Vibrio Cholerae lub inne gatunki Vibrio, należy zastosować wodę Peptonada dostosowaną do pH 8,5 (alkaliczna woda peptonada) (alkaliczna peptonada).

QA

Z każdej przygotowanej działki należy inkubować dwie rurki bez zaszczepienia przez 24 godziny w aerobiozie w 37 ° C. Czas się skończył, nie należy obserwować zmętnienia lub zmiany koloru.

Znane kontrole można również wykorzystać do oceny jego skuteczności:

W tym celu możesz użyć następujących szczepów bakteryjnych: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella Typhimurium ATCC 1428, Salmonella Enteritidis ATCC 13076.

We wszystkich przypadkach oczekuje się zadowalającego rozwoju drobnoustrojów, co jest obserwowane przez zmętnienie środowiska.

Ograniczenia

-Odwodniona pożywka jest bardzo higroskopijna, więc należy go trzymać z dala od wilgoci.

-Pożywki nie należy stosować, jeśli zaobserwowano jakikolwiek rodzaj pogorszenia.

-Odwodniona pożywka hodowlana powinna być przechowywana między 10–35 ° C

-Przygotowane pożywkę musi być przechowywane w lodówce (2-8 ° C).

Bibliografia

1. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B i Velázquez lub. Techniki analizy mikrobiologicznej żywności. 2009, 2 ed. Wydział Chemii, Unam. Meksyk. Wersja administratora ręcznego i dokumentów (Amyd) Wydziału Chemii, Unam 1. Dostępne pod adresem: http: // depa.Fquim.Unam.MX
2. Britania Laboratories. Buforowana woda Peptonada. 2015. Dostępne na: Britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Woda Peptonada. Dostępne na: Foodsafety.Neogen.com
4. Britania Laboratories. Woda Peptonada. 2015. Dostępne na: Britanialab.com
5. Merck Laboratories. Woda buforowana Peptonada. Dostępne na: MerckMillipore.com
6. CDADA PREMADISA LABOROTIONS. Alkaliczna woda Peptonada. Dostępne na: Condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Pan -american Editorial S.DO. Argentyna.