Fundacja Hektoen, przygotowanie i zastosowania

On Agar Haktoen o Agar Hektoen jelit jest solidnym, selektywnym i różnicowym pożywką hodowlaną. Został stworzony w Hektoen Institute przez King i Metzger do izolacji bakterii enteropatogennych gatunków shigelli i salmonelli.

Pożywka składa się z białka peptonu, ekstraktu drożdżowego, soli żółciowych, laktozy, sacharozy, salicyny, tiosulfinianu sodu, chlorku sodu, cytrynianu żelaza, cytrynianu amonu, niebieskiego bromolu, kwasu fuksyny i agaru i agaru. Ten preparat pozwala odróżnić gatunki shigella i salmonelli od reszty bakterii zdolnych do wzrostu w tym medium.

DO. Hektoen virgen b agie b. Haktoen Agar Sown. Źródło: Flickr.com/oryginalnym przesyłaczem był Philippinjl na francuskiej Wikipedii. [CC BY-SA 2.0 fr (https: // creativeCommons.ORG/Licencje/BY-SA/2.0/fr/czyn.W)]

Chociaż istnieją inne media o tej samej funkcji co agar Hektoen, ma to większą przewagę w porównaniu z innymi mediami, szczególnie gdy chcą odzyskać gatunki Shigella.

Gatunki obu rodzajów wytwarzają poważne problemy żołądkowo -jelitowe u ludzi z powodu spożywania zanieczyszczonej żywności; Dlatego transmisja jest kałem - doustnie. Właśnie dlatego stosowanie agaru Hektoen jest głównie wskazane w analizie mikrobiologicznej kału i próbek żywności.

[TOC]

Podstawa

Agar Hektoen zawiera peptones i drożdżowe ekstrakt jako źródło składników odżywczych, zapewniając niezbędne elementy rozwoju drobnoustrojów.

Ma jednak również sole żółciowe, które działają hamujące wzrost niektórych bakterii, zwłaszcza Grama dodatniego i niektórych gramowych negatywnych. Z tego powodu jest uważane za selektywne medium.

Z drugiej strony agar Hektoen jest różnicowym medium. Ta właściwość nadaje się obecność fermentacyjnych węglowodanów, takich jak laktoza, rysunek i salicyine, obok systemu wskaźnika pH, reprezentowane przez błękit bromotimolowy i kwas fuksyny.

Może ci służyć: sismonetia

Wszystkie bakterie zdolne do wzrostu w tym pożywce, które nie należą do rodzaju Salmonella i Shigella, opracują łososia lub pomarańczowe kolonie, z wyjątkiem rodzaju Proteus. Wynika to z fermentacji jednego lub więcej obecnych węglowodanów, co zakwasza pożywkę, co sprawia, że ​​wskaźnik pH jest obrót.

Z drugiej strony, rodzaj Shigella i Salmonella nie są w stanie fermentować żadnego z obecnych węglowodanów, używając tylko peptones jako źródła energii, które zasadowują medium, a zatem ich kolonie są zielonymi niebieskimi.

Również w tym pożywce bakterie zdolne do tworzenia siarkowodoru (gaz bezbarwny) można rozróżnić w tym pożywce. Tiosiarczan sodu działa jak źródło siarków, podczas gdy cytrynian żelaza jest środkiem odkrywczym. Oba związki umożliwiają tworzenie się czarnego osadu siarczku żelaza, który pokazuje reakcję.

Czarny osad na środku kolonii z przezroczystą aureolą w pobliżu pojawia się. Ta funkcja sugeruje obecność gatunku Salmonella.

Wreszcie, chlorek sodu utrzymuje równowagę osmotyczną, a agar zapewnia solidną spójność dla środowiska.

Przygotowanie

Ważą 76 G GR odwodnionej pożywki i rozpuść się w litrom wody destylowanej. Obserwuj mieszaninę, a następnie odejdź na 10 do 15 minut. Można go ogrzewać i gotować, co daje ruchy obrotowe do całkowitego rozwiązania. To medium nie jest sterylizowane w autoklawie.

Gdy pożywka osiąga przybliżoną temperaturę 45 ° C, objętość 20 ml w sterylnych płytach Petriego jest wylewa się bezpośrednio.

Może ci służyć: dynamika populacji

Agar jest zestalony. W tym czasie są już gotowi do użycia. Wskazane jest ich natychmiastowe użycie. Jeśli nie jest to możliwe, są trzymane w lodówce, aż do ich użycia.

Płytki należy usunąć z lodówki z lodówki przed wysiewem, aby podjąć temperaturę otoczenia.

Średnie pH musi wynosić 7,5 ± 0,2. Kolor odwodnionego pożywki jest fioletowy i przygotowany kolor to brązowy zielony.

Używać

Zaleca się stosowanie agaru Hektoen do poszukiwania bakterii z rodzaju Shigella i Salmonella w próbkach żywności i żywności.

Możliwość izolowania tych bakterii jest znacznie zwiększona, jeśli próbka w specjalnych bulitach jest wcześniej wzbogacona.

Inokulum musi być silne, a sadzenie odbywa się przez strosowanie. Płytki inkubuje się w 37 ° C przez 24 do 48 godzin w aerobiozie.

Zaleca się inkubację przez 48 godzin, ponieważ cechy kolonii są w tej chwili wyraźniejsze dla interpretacji i różnicowania.

QA

Aby wykonać kontrolę jakości dla tego medium, stosuje się certyfikowane szczepy bakteryjne, takie jak: Salmonella Typhimurium ATCC 14028, Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Shigella Flexneri ATCC 12022 i Shigella Sonnei ATCC 25931.

Oczekiwane wyniki są następujące: Salmonella Typhimurium i  Salmonella Enteritidis Muszą rozwijać zielone - niebieskawe kolonie z czarnym ośrodkiem lub bez. Podczas gdy gatunki Shigella będą rosły jako zielone - niebieskawe kolonie.

Możesz także dołączyć odmiany Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Może ci służyć: bulion z Lactosado

W takich przypadkach zaobserwowane cechy są następujące: I. coli I K. Pneumoniae Rozwijają się w tym średnim kolonie kolorowym łososia do pomarańczy, z osadem tego samego koloru wokół. Podczas gdy Proteus rozwija niebiesko-zielone kolonie z czarnym ośrodkiem lub bez.

Chwila S. aureus I  I. Faecalis Czasami muszą być hamowane I. Faecalis Udaje się rosnąć jako żółte, bardzo małe kolonie.

Z drugiej strony, ponieważ to medium nie jest sterylizowane w autoklawie, ważne jest, aby ocenić sterylność medium. Dlatego z każdej przygotowanej działki należy je inkubować od jednej do dwóch płyt bez zaszczepienia 37 ° C przez 24 godziny w aerobiozie.

Oczywiście nie ma wzrostu na płycie.

Ograniczenia

-Gatunki proteusowe mogą rozwinąć się w tym medium, a cechy ich kolonii można mylić z gatunkami Salmonella lub Shigella. Z tego powodu każda podejrzana kolonia musi zostać potwierdzona testami biochemicznymi.

-Konieczne jest towarzyszyć zastosowaniu tego pożywki z innymi mniej selektywnymi wiekami, ponieważ jeśli poszukiwany mikroorganizm jest w niskich stężeniach, nie mógłby rozwinąć się w tym medium.

-Nie przegrzewaj się podczas jego przygotowania, ponieważ nadmierne ciepło zmienia skład środowiska.

-Mogą pojawić się niezwykle kolonie laktozy fermentującego salmonellę, które mogą pozostać niezauważone.

Bibliografia

1. Współtwórcy Wikipedii. Hektoen Enteric Agar. Wikipedia, wolna encyklopedia. 13 marca 2019, 23:38 UTC. DOSTĘPNE O: .Wikipedia.Org/ Accessed 16 marca 2019.
2. BD Laboratories. BD Hektoen Enterric Gang (He Gank). 2013. Dostępne na: BD.com
3. Britania Laboratories. Hektoen Entérico Agar. 2015. Dostępne na: Britanialab.com
4. Diffco Laboratories Francisco Soria Melguizo. Agar Haktoen. Dostępne na: F-Soria.Jest
5. Podręcznik DIFCO & BBL, Hektoen Enterric Agar. 2. edycja. Dostępne w: BD.com/Europe