Barwienie Wright

Różne peryferyjne smesy krwi farbowane w barwieniu Wright. DO. Ostra białaczka b. Plasmodium vivax w erytrocycie. C. Plasmodium falciparum, makrogametocito. D. Limfocyt

Co to jest barwienie Wrighta?

Barwienie Wright Jest to technika zabarwienia stworzona przez amerykańskiego patologa Jamesa Homera Wrighta w 1902 roku, oparty na barwieniu Romanowsky'ego, aby lepiej różnicować różne typy komórek krwi. 

To zabarwienie jest polichromatyczne, co oznacza, że ​​generuje kilka kolorów w zależności od struktury, która pochłania barwnik. Ta technika zabarwienia była szeroko stosowana do wykonywania różnicowych białych krwinek i badania morfologii czerwonych krwinek, płytek krwi i leukocytów w krwi obwodowej i śmiecie kostnej.

Jego zastosowanie jest bardzo ważne, ponieważ nieprawidłowości można zaobserwować w różnych liniach komórkowych krwi, ułatwiając diagnozę chorób, takich jak białaczka lub infekcje bakteryjne lub pasożytnicze.

Być może są to najczęstsze zastosowania, w których stosuje się tę technikę, jednak nie są one jedyne. Jest również przydatny w innych próbkach innych niż krew i szpik kostny, takie jak próbki wydzielania nosa, śluz kałowy, plwocina, skóra,.

Fundament barwienia Wrighta

Barwienie Wrighta narodziło się z plamy Romanowsky.

Mieszanka barwników stosowanych w barwieniu Wrighta powoduje efekt znany jako Romanowsky, to znaczy zapewnia piękne fioletowe zabarwienie jąder leukocytów i granulki neutrofilowe, podczas gdy czerwone krwinki są barwione różowe.

Składnikami odpowiedzialnymi za podanie zakresu typowych kolorów barwienia Wrighta to niebieski B i Eosina i. Zaobserwowany efekt będzie zależeć od połączenia barwników ze strukturami chemicznymi i interakcji niebieskiego B i eozyny i.

Struktury kwasowe, takie jak kwasy nukleinowe, białka jądrowe i niedojrzała reaktywna cytoplazma niektórych rodzajów komórek, ustawiona niebieska B (podstawowa kolorystyka).

Podczas gdy podstawowe struktury, takie jak hemoglobina, granulki segmentowanych eozynofili, między innymi struktury komórkowe, ustawiają eozynę i (kolorystykę kwasu).

Na wynik barwienia mogą mieć wpływ różne czynniki, takie jak pH barwnika Wrighta, roztwór tłumienia i mycia, a także czas barwienia i ustalania.

Dlatego każdy krok w przygotowaniu odczynników ma kluczowe znaczenie i należy wykonać dbanie o każdy szczegół.

Materiały

Wright Dye. Dla 100 ml jest to wymagane:

Waż 0.3 GR z barwnika Wrighta, mierz 97 ml metanolu i 3 ml glicerolu.

Przygotowanie

W moździerzu ciężka ilość barwnika Wrighta i stopniowo włącza glicerol, aż kurz zostanie całkowicie rozpuszczona.

Następnie dodaje się metanol, miesza się i wlewa do bursztynowej butelki.

Przed użyciem należy mieszać roztwór z miękkimi ruchami i filtrem.

Może ci służyć: Wybór kierunkowy: co to jest, definicja, przykłady

Roztwór buforowy buforowany

W litr wody destylowanej dodaje się 3,76 g disodium hydrofosforanu (na₂HPO₄   2h₂0) plus 2,1 GR dihydrogennego fosforanu potasu (KH₂PO₄).

Mieszaj bardzo dobrze, aż rozpuścisz wszystkie włączone odczynniki. Dostosuj pH do 7,2.  Wlać do szklanego słoika i trzymaj w temperaturze pokojowej.

Dodatkowe materiały potrzebne do wykonania zabarwienia

Ponadto do wykonania techniki zabarwienia wymagane są inne materiały, są to: obiekty Porta lub obejmują obiekty, most kolorowy, taśmy z wodą lub buforem do mycia, stoper, aby wziąć czas kolorów i trochę materiału suszącego (papier chłonny, gaza lub bawełna ).

Wright Składniki do barwienia

Metanol

Alkohol (metanol) służy jako utrwalacz rozmazu krwi do zjeżdżalni.

Zasadniczo jest to reaktywne, odwadniane i koagulantowe utrwalacze. Dlatego ich funkcją jest koagulacja białek i uczynienie ich nierozpuszczalnym, ale bez denaturowania.

Metanol jest najczęściej używanym odczynnikiem do naprawy rozmazu we wszystkich laboratoriach, ponieważ zapewnia lepsze wyniki niż te uzyskane z etanolem. Idealne stężenie wynosi 99%.

Absorbnik wstrząsu

Absorbnik wstrząsu (roztwór buforowany) ma funkcję regulacji lub utrzymania.

Przejście ustalenia z komórkami metanolu, a amortyzator pomaga im nawodnić.

Eosina (y)

Eosina ma powinowactwo do podstawowych składników, ponieważ jest to kwaśny barwnik. Dwa rodzaje eozyny są bardzo podobne do siebie, tak bardzo, że można je użyć, uzyskując ten sam wynik.

Jedna nazywa się eozyna i żółta eozyna lub tetrabromofluoresceina, a druga, eozyna B, niebieskawa e erytrozina lub dibromodytrofluoresceina. Jednak eozyna i jest tą, która jest najczęściej używana.

Najważniejszą właściwością tego barwnika jest jej ujemna polaryza.

Błękit metylenowy

To podstawowy barwnik. Jego główną właściwością jest metakromia, to znaczy, że nie wszystkie struktury będą barwione w tym samym kolorze, będzie zależeć od składu chemicznego kolorowania struktur.

Niektóre staną się jasne lub ciemnoniebieskie, a inne ciemnego fioletu lub bladego liliowego.

Technika

1. Zrób rozszerzoną próbkę, aby była cienka warstwa, czy to na zjeżdżalni, czy coverach.
2. Pozwól wyschnąć powietrze przez około 2 godziny.
3. Umieść suchy zapach na mostku zabarwienia lub wiadra barwienia z przedłużoną próbką w górę.
4. Przykryj arkusz Wright Drop By Gota, aby pokryć całą powierzchnię. Pozostaw ACT na 5-8 minut.
5. Barwnik musi całkowicie pokryć slajd, bez rozlania się przez krawędzie. Jeśli w czasie zabarwienia zacznie się odparować, należy umieścić dodatkowe krople.
6. Następnie dodaj równą ilość amortyzatora, wydmuchnij nieco, aż pojawi się charakterystyczna metaliczna jasność. Oswojone od 10 do 15 minut.
7. Umyj wodą z kranu, umieszczając miękki strumień, aż arkusz będzie różowy.
8. Z gazą impregnowaną alkoholem wyeliminowało kolorystykę z tyłu zjeżdżalni.
9. Niech such wyschł przed umieszczeniem oleju zanurzenia, aby go wizualizować w mikroskopie.

Może ci służyć: poziomy taksonomiczne

Używa/aplikacje barwienia Wright

Hematologia

Jest idealny do barwienia obwodowych śmieci krwi.

Ze względu na właściwości chemiczne tej kombinacji barwników można łatwo rozpoznać struktury komórkowe, będąc w stanie odróżnić różne rodzaje komórek.

Katar

Ta technika jest bardzo przydatna do identyfikacji komórek wydzielania nosa (komórki nabłonkowe, segmentowane eozynofile, polimorfonuklearne) w diagnozowaniu alergicznego zapalenia nieżytu nosa.

Parazytologia

W tym sensie było to przydatne do badania Leishmania sp W ramach histiocytów podskórnej tkanki komórkowej w wrzodach skóry. Służy również do identyfikacji leukocytów w próbce stolca (leukogram kałowy).

W takim przypadku lekarz interesuje się, czy leukocytoza obecna w kale jest przez polimorfonuklearność lub jednojądrzasty. To odkrycie w leukogramie kału poprowadzi to, czy jest to odpowiednio infekcja bakteryjna czy wirusowa.

Z drugiej strony pasożyty krążące we krwi mogą znajdować się wewnątrz erytrocytów lub wolne w osoczu. Poszukiwane pasożyty są Plasmodium spp, trypanosoma cruzii a filarias, a weterynaryjne są przydatne w poszukiwaniu IILILE Equ I Babesia caballi, Przyczynowe czynniki dziecka, szczególnie u koni.

Zabarwienie Wrighta, a także Giemssa, pozwalają na odróżnienie hemoparazów od normalnych składników komórkowych. W tym celu można użyć dwóch rodzajów rozszerzonych:

Dobra rozszerzona

Krew jest rozciągająca się jako cienka warstwa na zjeżdżalni. Barwienie Wright, ujawniając charakterystykę jądra i cytoplazmy.

Gruba kropla

Ta metodologia jest stosowana do badania obecności pasożytów w większej ilości krwi.

W tym celu na zjeżdżalni umieszcza się duża kropla krwi. Po tam,.

Wreszcie, aby obserwować pasożyty w grubym zapachu, erytrocyty muszą być wymienione z wodą.

Infekcje dróg oddechowych

Na poziomie oddechowym technika ta jest również przydatna, ponieważ komórki obecne w próbkach plwociny, mycie oskrzelowe lub oskrzelowe są ważne dla ustalenia diagnozy.

Tutaj możesz rozróżnić komórki polimorfonuklearne i komórki jednojądrzaste.

Bakteriologia

Zastosowanie tej techniki w bakteriologii jest ograniczone, ponieważ nie jest dobrze farbować bakterie. Dlatego do ich barwienia stosowane są inne wyspecjalizowane techniki zabarwienia.

Jednak został użyty do wyszukiwania komórek nabłonkowych z ciałami inkluzyjnymi Chlamydia trachomatis W rozmazie błony śluzowej cewki moczowej lub śródbrężnej, chociaż należy rozpoznać, że nie jest to najlepsza metoda.

Może ci służyć: hemocianins

Możliwe jest również obserwowanie, wśród czerwonych krwinek, bakterie spiralne, takie jak Borrelia Burgdorferi U zainfekowanych pacjentów, a także morulas lub ciał włączenia Ehrlichia sp W cytoplazmie limfocytów, monocyty lub neutrofili w wymazie krwi.

Mikologia

On Histoplasma capsulatum Jest to często diagnozowany grzyb patogenny przez mikroskopową obserwację różnych próbek tkanek, farbowanie z barwieniem Wright.

Jak obserwuje się struktury próbki krwi w przypadku barwienia Wrighta?

Zalecenia dotyczące pysznych sanguine srols do czytania hemogramu. Źródło: Retamales E, Mazo V. Instytut Zdrowia Publicznego, rząd Chile

Zalecenia dotyczące dobrego barwienia

- Rozszerzenia próbek krwi muszą spontanicznie wyschnąć. Rozmazy powinny być tak cienkie, jak to możliwe, aby uzyskać lepsze utrwalanie barwnika i uniknąć nakładania się.

- W przypadku farbowania wysokiej jakości jest to wskazane. Z drugiej strony idealną próbką jest krew naczyń włosowatych, bez antykoagulantu.

- Jeśli jednak stosuje się krew żylną, należy ją stosować jako antykoagulant EDTA i nie -heparyny, ponieważ te ostatnie mogą odkształcić struktury komórkowe.

- Aby uniknąć pogorszenia przygotowanego barwnika, należy go przechowywać w suchych miejscach.

- Podczas procesu mycia zaleca się stosowanie wody skorygowanej do neutralnego pH.

- Wskazane jest, aby od czasu do czasu testować metody barwienia stosowane w laboratorium.

Odbywa się to barwienie próbek lub rozszerzone wzory, jako kontrola jakości. Ten krok jest ważny, ponieważ zapewnia, że ​​barwienie jest odpowiednio przygotowane, a czasy zabarwienia są dobrze znormalizowane.

Jeśli arkusz wzorów jest źle zabarwiony, są problemy, które należy rozwiązać.

Powszechne błędy w zabarwieniu Wrighta

Bardzo blade barwienie

Bardzo blade rozmazy są zwykle spowodowane bardzo krótkim czasem barwienia lub bardzo przesadnego mycia. Jest korygowany przez wydłużenie czasu kontaktu z barwnikiem lub skrócenie czasu mycia.

Dzwonki barwnika

Obecność zabarwienia w zapachu może mieć kilka przyczyn. Najczęstsze to: użycie niefiltrowanego barwnika, barwnika na nierównych mostach kolorowych, zużywają brudne arkusze z kurzem lub tłuszczem, a nie dobre mycie po zakończeniu barwienia.

Pocieranie się wyjątkowo czerwonawym lub niebieskim zabarwieniem

Absorber jest odpowiedzialny za pH barwnika. Kolory z pH poniżej wskazanego (kwasu) spowodują uzyskanie bardzo czerwonawych zapachów.

Jeśli pH barwnika jest powyżej (alkaliczna), uzyska wyjątkowo niebieskawowy rozmaz.

Tryb przechowywania

Odczynnik musi być przechowywany w temperaturze pokojowej.

Bibliografia

1. López-Jácome, L., Hernández-durán, m., Colín-Castro, c., Ortega-Peña, s., Cerón-González, g., Franco-Cendejas, f. (2014). Podstawowe barwienie w laboratorium mikrobiologii. Badania niepełnosprawności.
2. Calderón, a., Cardona, J., Vergara lub. (2013). Częstotliwość Babesia SPP. U koni Montería, Córdoba (Kolumbia). Obrót silnika. Udcaacttual Disculg. naukowiec. 
3. Retamales, e., Mazo, v. Public Health Institute of Chile. Zalecenia dotyczące pysznych sanguine srols do czytania hemogramu.