May Grünwald-Giemssa Staina

Przewlekła próbka białaczki szpikowej z barwieniem maja Grünwald-Giemssa. Źródło: Paulo Henrique Orlandi Mourao, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Czym jest zabarwienie Grünwalda-Giemsa?

May Grünwald-Giemssa Staina, o Pappenheim, jest techniką różnicową zabarwieniem, która miesza odczynniki Giemsę i May Grünwald. Jest stosowany do różnicowania normalnych i nieprawidłowych komórek krwi w rozmazie krwi obwodowej i szpiku kostnym, a także do barwienia skaleczeń histologicznych i próbek cytologicznych.

Zarówno odczynniki -Giessa, jak i może Grünwald- pochodzą z barwienia Romanowsky'ego, techniki opartej na kombinacji kwasu i podstawowych barwników.

Giemsa poprawiła tę technikę, stabilizując mieszaninę eozyny, błękitu metylenowego i jej pochodnych, z glicerolem. Zamiast tego, może Grünwald użyć eozyny i błękitu metylenowego, używając metanolu jako rozpuszczalnika. Ta strategiczna kombinacja dała doskonałe wyniki.

Podczas gdy obserwacja morfologii komórkowej działa podobnie do zabarwienia Giemssy i Wrighta, technika ta poprawia powyższe kolorystykę pasożytów, które powodują malarię, zło Chagas, Leishmaniasis i Trichomoniasisisis.

Dodatkowo okazało się, że jest bardzo przydatny w badaniu cytologicznym cieczy plemników. Nie tylko zostało to podkreślone przez pokazanie cech morfologicznych nasienia, ale także umożliwia znaczne różnicowanie leukocytów, komórek nabłonkowych i komórek spermatogenezy.

Podstawa

Technika ta jest podstawą barwienia Romanowsky'ego, w której kwaśne barwniki mają selektywne powinowactwo do podstawowych składników komórkowych, a komponenty kwaśne przyciągają podstawowe barwniki.

Innymi słowy, zarówno struktury komórkowe, jak i barwniki mają dodatnie lub ujemne obciążenia elektryczne, równe obciążenia są odpychane, a różne obciążenia przyciągają.

Na przykład podstawowe barwniki, takie jak błękit metylenowy, są dodatnio ładowane i przyciągane przez ujemnie obciążone struktury. Właśnie dlatego ten barwnik farbuje jądra, które są bogate w DNA i RNA, które mają negatywnie obciążone grupy fosforany.

Granulki bazofilnego segmentowane i cytoplazmy jednojądrzastych białych krwinek zawierających ARN są również wybarwione.

Może ci służyć: Flora i fauna Jalisco: reprezentatywne gatunki

Również kwaśny barwnik ma obciążenie ujemne, więc wiąże się z dodatnio obciążonymi strukturami, takimi jak erytrocyty i granulki segmentowanych eozynofili. Jeśli chodzi o granulki segmentowanych neutrofili, oba barwniki ustawione.

Różnorodność barwników

W tej technice współistnieje kombinacja reakcji między ortochromatycznym i metakromatycznym. Ortochromatyczne (eozyna i błękit metylenowy) są ustalone do struktury komórki, z którą są powiązane i zapewniają stabilny kolor, który nie różni się.

Z drugiej strony, metakromatyczne (te pochodzące z błękitu metylenowego, lazuru i lazurów b), ich oryginalny kolor zmienia się po zjednoczeniu z określoną strukturą, może być nawet wiele niuansów.

Wreszcie, krok, który podejmuje roztwór May Grünwald, wymaga obecności wody, ponieważ bez tego barwnik przeniknie do struktur, ale nie zostanie ustalony. Aby się wydarzyć, barwnik musi stać się polarny lub jonizacji, a tym samym być w stanie wytrącić i patrzeć na powiązane struktury.

Technika

Materiały

• Prześcieradło.
• Kolorowanie mostów.
• May Grünwald Solution.
• Barwienie Giemsa.
• Woda destylowana.

Skoncentrowany maj barwnik Grünwald

0,25 GR eozyny eozyny metylenowej (barwnik według maja Grünwald) i rozpuścić w 100 ml metanolu. Następnie preparat jest mieszany przez 1 godzinę i pozostaw na 24 godziny. Za czasem jest filtrowane.

Aby zastosować technikę, barwnik May Grünwald jest rozcieńczony w następujący sposób: Dla 200 ml rozcieńczonego barwnika mierzono 30 ml stężonego roztworu, 20 ml roztworu buforowego i 150 ml wody destylowanej dostosowanej do pH 7.2-7.3. Następnie jest mieszany i filtrowany.

Skoncentrowany kolorystyka Giemsa

0,5 G-GR-eozyny metylenu (barwnik według Giemsa), rozpuszcza się w 50 ml metanolu i dodaj 50 ml gliceryny.

Aby wykonać technikę, 1:10 jest rozcieńczane roztworem bufora i pozostaw na 10 minut. W razie potrzeby można go filtrować.

Może ci służyć: Mesénquima

Przygotowanie roztworu buforowego o pH 7,2

Należy je zważyć:

• 40 mg fosforanu potasu di-hydrogenu (KH2PO4).
• 151 mg wodoru di-syfotycznego fosforanu 12-hydrat (Na2HPO4).

Oba związki rozpuszczane są w 100 ml wody.

Procedura Tincion Sanguine lub Bone Medol

Istnieją dwa metody: klasyk i szybki.

Modalność klasyczna

• Przykryj zapach przez 2 lub 3 minuty za pomocą roztworu May Grünwald.
• Umyj buforowaną wodą destylowaną, aby usunąć poprzedni roztwór.
• Przykryj tym samym buforowanym roztworem do mycia i pozostaw na 1 minutę. Chodzi o to, że barwnik przednia jest ustalony do struktur i że jednocześnie komórki są uwodnione.
• Dodaj 12 rozcieńczonych kropli nalewki Giemsa na buforowaną wodę i dmuchaj, aby wymieszać i homogenizować. Pozostaw na 15 lub 20 minut.
• Umyj rozmaz buforowaną wodą destylowaną i umieść ją do wyschnięcia w powietrzu.
• Focus i obserwuj w mikroskopie optycznym farbowanie komórek krwi za pomocą celu 40x. W razie potrzeby można użyć 100x.

Tryb szybki

• Przykryj rozmaz barwnikiem maja Grünwalda rozcieńczonego przez 1 minutę.
• Umyj buforowaną wodą destylowaną.
• Przykryj buforowaną wodą i odstaw na 1 minutę.
• Umieść rozcieńczony barwnik Giemsa i pozostaw na 5 minut.
• Umyj buforowaną wodą destylowaną i wyschnij powietrze.

Opisane tutaj techniki są przewodnikiem, ale należy wziąć pod uwagę, że procedury i czasy zabarwienia różnią się w zależności od domu komercyjnego, który sprzedaje odczynniki. Wskazane jest wykonanie kroków ściśle wskazanych przez każdy dom komercyjny.

Wydłużona technika kolorowania płynu nasienia

• Pokryj rozszerzoną drobną warstwą roztworu May Grünwald przez 4 minuty.
• Zdejmij barwnik i umyj wodą destylowaną.
• Umieść rozcieńczoną warstwę Gieessa (1:10) w wodzie destylowanej przez 15 minut.
• Zdejmij barwnik i umyj wodą destylowaną.
• Pozwól wyschnąć i obserwować w mikroskopie.

Może ci służyć: fermentacja butyryczna

Ważne specyfikacje

Technika stwierdza, że ​​odczynniki i roztwory mycia mają pH dostosowane do 7.2-7.3, tak że powinowactwa barwników przez struktury komórkowe nie są zniekształcone, a oczekiwany końcowy kolor nie różni się.

Aplikacje

• Technika ta jest stosowana przez laboratoria kliniczne do barwienia obwodowych pocierania krwi i szpiku kostnego, cięć tkanek i cytologii.
• W dziedzinie hematologicznej technika ta ma istotne znaczenie w badaniu nieprawidłowości komórek pod względem formy, wielkości i liczby. Jest to bardzo cenne narzędzie do diagnozy niektórych chorób, takich jak białaczka i niedokrwistość.
• Przedstawia wyjątkową użyteczność, gdy szukał pasożytów w dziedzinie hematologicznej (Plasmodium sp I Cruzi Tripaosoma) lub histologiczne (Leishmanias sp).
• Jeśli chodzi o cytologię pochwy, technika ta jest szczególnie korzystna dla obserwacji Trichomonas vaginalis. To ważne odkrycie, ponieważ jego obecność symuluje obrazy raka In situ to wtedy znikają, gdy pasożyt zostanie wyeliminowany.
• Było to idealne narzędzie do badań próbek nasienia, ponieważ zapewnia cenne informacje na temat jakości nasienia. Dane, które oferuje, mają głównie z liczbą i morfologią, a także z jednoczesnymi komórkami, które mogą być obecne i które mają istotne znaczenie, takie jak komórki płciowe, leukocyty i komórki nabłonkowe. Dzięki tej analizie można opisać nieprawidłowości obserwowane w nasieniu na głowie, szyi, środkowym kawałku i głównym kawałku. Ponadto mogą również pomóc pokazać przypadki hosospermii (obecność czerwonych krwinek) i leukospermii lub piosppermii (wzrost liczby leukocytów w nasieniu).

Bibliografia

1. Merck KGAA Laboratory. May Grünwald Eosina Blue Microscopy Metylen.
2. May-Grünwald-Giemssa Barwienie. Odzyskane z ES.Wikipedia.org.
3. Szklane chemikalia Panreac Laboratory. Odczynniki dla technik histologicznych, hematologii i mikrobiologii. Odzyskane z Glasschemicals.com.