Barwienie kinyoun

Cryptosporidium parvum barwiony w barwieniu Kinyoun. Źródło: Punlop Anusonpornperm, Wiikimedia Commons

Co to jest barwienie Kinyoun?

Barwienie kinyoun Jest to technika zabarwienia stosowana do barwienia bakterii i pasożytów odpornych na kwas. Urodził się po modyfikacji zabarwienia Ziehl-Neelsen. Obie techniki są interpretowane w ten sam sposób, ale różnią się w dwóch elementach: w przygotowaniu głównego odczynnika i w którym technika Kinyoun nie używa ciepła.

Z tego powodu jest to również znane jako Ziehl-Neelsen w zmodyfikowanym przez zimno lub zimne barwienie Kinyoun. Jest wskazany dla koloru Prątek gruźlicy, Lepra Mycobacterium, Atypowe mykobakterie, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris I Cyclosporras cayetanensis.

Warto to zauważyć Nocardias Są one słabo barwione tą techniką, ponieważ są częściowo kwaśnym alkoholem, więc w tym gatunku istnieje modyfikacja metodologii.

Z kolei technika Kinyoun została połączona z techniką trichromową zmodyfikowaną przez Didiera w celu wykrycia Coccidios (Cryptosporidium parvum I Isospora Belli) i mikrosporydarne zarodniki (Enterocytozoon bieneusi I Enchelitozoon itestinalis).

Podstawa

Głównym odczynnikiem barwienia jest Carbolfucsin lub Fenicada Fuchsin, która ma właściwość łączenia istniejących kwasów karbolowych w ścianie komórkowej rycerzy, bogate w lipidy (kwasy mikoliczne) prątków i niektórych pasożytów.

Związek ten nie przeciwdziała odbarwianie kwasu, dlatego mikroorganizmy są zdefiniowane jako odporne kwas alkoholowy.

W przeciwieństwie do techniki Ziehl-Neelsen-która naprawia barwnik przez ciepło, w technice Kinyoun ten krok nie jest konieczny, ponieważ przygotowywany roztwór Fenicada Fuchsin zawiera wysokie stężenie fenolu.

Może ci służyć: agar Salmonella-Shigella

Fenol rozpuszcza materiał lipidowy ściany komórkowej, co pozwala na wejście barwnika karbolfuksinowego. Po penetracji barwnika jest on przymocowany pomimo prania za pomocą alkoholu.

W ten sposób odporne mikroorganizmy kwasu alkoholowego przyjmują charakterystyczny czerwony kolor, podczas gdy wszystko, co nie jest alkoholem kwaśnym, jest odbarwione i barwione niebieski.

Technika

Materiały

• Zmodyfikowana feniczna fuksyna.
• Alkohol-kwas.
• Błękit metylenowy.

Kinyoun Phoenided Fuchsina Preparation

• Podstawowa Fuchsina: 4 Gr.
• Fenol: 8 ml.
• Alkohol (95%): 20 ml.
• Woda destylowana: 100 ml.

Podstawowa fuksyna w alkoholu powinna zostać powoli rozpuszczona, stale miksując. Następnie krystalizowany fenol topi się w łazience w 56 ° C. Po rozpuszczeniu 8 ml dodaje się do wcześniej przygotowanego roztworu fuksyny.

Przygotowanie alkoholu

• Skoncentrowany kwas solny: 3 ml.
• Etanol (95%): 97 ml.

Musisz zmierzyć, dołączyć i mieszać.

Przygotowanie barwnika niebieskiego metylenowego

• Błękit metylenowy: 0.3 g.
• Woda destylowana: 100 ml.

Waży i rozpuszcza.

Technika barwienia Kinyoun

• Przygotuj rozmaz bezpośrednio z próbki, który może być mądra plwocina, płyn płucny, osad moczu, płyn mózgowo -rdzeni.
• Napraw rozmaz ciepłem.
• Umieść rozmaz na mostku kolorowym i przykryj przygotowanym odczynnikiem Fenicada Fuchsin w Kinyoun. Pozostaw na 3 lub 5 minut.
• Umyj wodą destylowaną.
• Udekoruj alkoholem kwasowym przez 3 minuty i ponownie umyj wodą destylowaną.
• Ponownie udekoruj alkoholem kwasowym przez 1 lub 2 minuty, aż będzie więcej kolorowania.
• Umyj wodą destylowaną i pozwól spuścić, umieszczając poślizg w pozycji pionowej.
• Przykryj preparat błękitem metylenowym i pozostaw na 4 minuty.
• Umyj wodą destylowaną i wyschnij powietrze.
• Zbadaj 40x, a następnie 100x.

Może Ci służyć: Clear Field Mikroskop: Charakterystyka, części, funkcje

Jeśli chcesz poprawić i przyspieszyć barwienie odpornych mikroorganizmów kwasu alkoholowego, dodaje się 1 kroplę środka nawilżającego (takie jak żaba nr 7) do 30 lub 40 ml fenicator fuchsyny Kinyoun.

Niektóre laboratoria zmieniają niebieski barwnik kontrastowy metylenowy z powodu jasnozielonej lub kwasu pinicznego. Pierwszy daje zielony kolor na tle, a drugi generuje żółty kolor.

Specjalna technika Kinyoun dla Nocardias

Aby poprawić barwienie bakterii płciowych Nocardia Zastosowana jest modyfikacja barwienia Kinyoun. Technika jest następująca:

• Zakryj rozmaz fenicada fuchsina z Kinyoun przez 3 minuty.
• Umyj wodą destylowaną.
• Krótko odbarwia z 3% przygotowanym alkoholem, aż będzie więcej kolorowania.
• Umyj ponownie wodą destylowaną.
• Pokryj przygotowanie błękitem metylenowym i pozostawiaj ACT przez 30 sekund.
• Umyj wodą destylowaną i wyschnij powietrze.

Połączona technika feenicznej i trichromowej fuchsiny zmodyfikowanej przez Didier

Ta technika jest zalecana do analizy próbek kału w poszukiwaniu kokcidios i zarodników Microsporidium sp w tym samym czasie. Procedura, którą należy przestrzegać, jest następujący:

• Przykryj rozmaz fenicada fuchsina z Kinyoun przez 10 minut.
• Zdejmij barwnik i umyj wodą destylowaną.
• Udekoruj przez 30 sekund alkoholem kwasu chlorowodorowego.
• Umyj ponownie wodą destylowaną.
• Przykryj rozmaz roztworem trichromowego przez 30 minut w 37 ° C.
• Umyj wodą destylowaną.
• Udekoruj przez 10 sekund alkoholem kwasu octowego.
• Umyj zapach przez 30 sekund za pomocą 95% etanolu.

QA

Jako kontrola pozytywna, rozmaz przygotowuje się ze szczepami Prątek gruźlicy i są barwione odczynnikami przygotowanymi do sprawdzenia, czy bakterie mają odpowiedni kolor (czerwono-fucsia).

Może ci służyć: gametoogeneza

Kontrole ujemne można również stosować, przygotowując rozmaz dowolnym szczepem, który nie jest odpornym kwasem alkoholowym, sprawdzając w ten sposób, że cała próbka przyjmuje kolor kontrastu.

Technika Kinyoun w porównaniu z techniką Ziehl-Neelsen

Technika Kinyoun jest prostsza, ponieważ eliminuje przejście ogrzewania, ale jego główną zaletą jest to, że unika emisji oparów, wysoce toksycznych i powodujących długoterminowe raka. Dlatego zabarwienie Kinyoun jest bezpieczniejsze dla personelu odpowiedzialnego za wykonywanie barwienia.

Ważne jest, aby wziąć pod uwagę, że musisz uważać, aby odczynniki nie miały bezpośredniego kontaktu ze skórą, ponieważ są żrące, a odbarwienie jest łatwopalne.

Jeśli chodzi o wady, negatywny rozmaz niekoniecznie wskazuje, że mikroorganizm nie jest obecny. Ponadto obecność detrytusu komórkowego może powodować fałszywe pozytywy, które generuje zamieszanie w diagnozie.

Odniesienie

1. Zastosowana chemia kliniczna. Zestaw Bk Kinyoun. Cromakit wyzdrowiał.Jest.
2. Orozco-Crico, m. Barwienie kinyoun i dwa kokcidios na HIV. MD MEDICAL MAGAZYN. 
3. Forbes, ur., Sahm, d., Weissfeld, a. Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. Pan -american Editorial S.DO.