Voges-Proskauer Test What Is, Foundation, przygotowanie, używa

On Test Voges-Proskauer Jest to test biochemiczny, który służy do identyfikacji bakterii należących do rodziny Enterobacteriaceae. Szczególnie jest przydatny do odróżnienia odkształceń od Escherichia coli z Klebsiella i Enterobacter, m.in.

Test przeprowadza się w ciekłej pożywce hodowlanej zwanej czerwonych metyl-voges proskauer, lepiej znany z akronimu RM/VP. Ta pożywka składa się z buforowanego polipeptonu, glukozy, fosforanu dipotasowego i wody destylowanej.

Czerwona Metil Metilo-Voges odpowiednio proskauer (RM/ VP)/ pozytywny i ujemny test VP. Źródło: Zdjęcie wykonane przez autora MSC. Marielsa Gil/ Sudipta.11 listopada [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licencje/by-sa/3.0)], z Wikimedia Commons

Obecne medium RM/VP jest modyfikacją pożywki Clark i Lubs, która pierwotnie zawierała mniej stężenia peptonów i glukozy. Dlatego istniała mniejsza ilość jonów wodoru, wymagana do pozytywnej reakcji Voges-prosphauer.

Test opiera się na zdolności mikroorganizmu stosowania glukozy drogą butylén-glikologiczną i tworząc neutralny produkt końcowy zwany acetoiną, w obecności tlenu i alkalicznego pH.

W medium RM/VP, oprócz możliwości ujawnienia testu Voges-Proskauer, możesz również ujawnić test metaliczny czerwony.

Podstawa

Foundation of the Voges-Proskauer Test

Pluripepttonowie obecne pośrodku zapewniają niezbędne wymagania żywieniowe dla wzrostu bakteryjnego. Ze swojej strony glukoza jest głównym związkiem. Wiele bakterii ma zdolność metabolizowania glukozy i tworzenia kwasu piruvinowego.

Kwas piruwiczny jest punktem środkowym w metabolizmie glukozy i stamtąd każdy mikroorganizm może przyjmować różne ścieżki. Niektóre będą tworzyć mieszane kwasy, takie jak kwas mlekowy, kwas octowy, kwas mrówkowy i kwas sukcynisty.

Może ci służyć: flora i fauna z Meksyku

Test Voges-Proskauer ujawnia zdolność mikroorganizmu tworzenia karbinolu metylo-metylowego (acetoiny), produktu pośredniego 2,3-butdiol w warunkach aerobiozy.

Acetoina jest zmniejszona, a kształt 2,3-butodol, ale reakcja ta jest odwracalna, dlatego jeśli 2,3-butodiol zostanie utleniony. Dlatego tlen jest niezbędny.

Fosforan dipotasowy to bufor, który amortyzuje mieszaninę do pH 6,9 ± 0,2.

Fundament rozwoju dowodów i interpretacji

Aby pokazać reakcję, należy przeprowadzić objawienie za pomocą dwóch odczynników (odczynników barrowych), znanych jako Voges A i Voges B.

VOGES A jest roztworem 5% α-naftolu, a Voges B jest 40% preparatem wodorotlenku potasu. Jeśli wodorotlenek potasu nie jest dostępny, można go zastąpić 40% wodorotlenkiem sodu.

Α-Naftol jest katalizatorem, który zwiększy intensywność koloru reakcji, co stanowi najbardziej czuły test. Α-Naftol należy zawsze dodawać najpierw, mieszając rurkę, aby pożywka wchodziła w kontakt z tlenem. W ten sposób obecna acetoina jest utleniona do diacetylu, a 2.3-butdiol jest utleniany do tworzenia acetoiny, przekazując ją do diacetylu.

W ten sposób α-Naftol dołączy do diacetylu, który z kolei dołączył do jądra guanidyny obecnego w aminokwasach argininowych, które ostatnie z multipartonów.

Ze swojej strony wodorotlenek potasu lub sodu jest odpowiedzialny za wchłanianie CO₂ I reagować z Peptonami. Ta reakcja powstaje w tworzeniu koloru różowego salmonowego, wyraźnie widocznego po bardzo dobrze mieszaniu rurki.

Może ci służyć: poziom tkanki organizacji: Charakterystyka i przykłady

Aby zabarwienie wystąpiło natychmiastowo, należy mieszać prawidłowe ilości diacetylu, peptonu i α-naftolu. Jeśli tak się nie stanie, rurka może odpocząć przez 15 minut przed interpretacją.

Test jest ogólnie dodatni po 2 do 5 minutach, kiedy widać słaby różowy kolor. Jeśli pozostanie w spoczynku przez 30 minut w 1 godzinie, intensywność koloru będzie maksymalna (intensywna czerwona).

Test ujemny zostanie udowodniony, gdy bulion jest żółty. Po 1 godzinie, jeśli test jest ujemny, można utworzyć miedziowy produkt reakcji wodorotlenku potasu na α-naftolu.

Przygotowanie

Środkowy RM/VP

Zważyć 17 gr z odwodnionej kultury i rozpuść się w litrom wody destylowanej. Odstaw na 5 minut. Rozgrzewać się do gotowania, aby całkowicie się rozpuścić. Serwuj 3 do 4 ml w probówkach i sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

Odwodniona pożywka hodowlana to beżowa, a przygotowana pożywka to lekki bursztyn.

Ostateczne pH pożywki wynosi 6,9 ± 0,2.

Voges Reagent a

Waż 5 GR α-naftolu i rozpuść w 50 ml alkoholu etylowego (bezwzględnie). Następnie dodanie alkoholu etylowego nawet na 100 ml.

Voges Reagent b

Ważą 40 GR wodorotlenku potasu i rozpuść w 50 ml wody destylowanej w zlewce. Szkło musi być umieszczone w łaźni zimnej wody, aby kontrolować temperaturę, ponieważ w momencie rozpuszczenia przygotowania gwałtownie podnosi temperaturę.

Po zimnym roztworze przenoszony do posiekanej kulki i spłukiwanie przy 100 ml wodą destylowaną.

Może ci służyć: agar krwi

Procedura testowa Voges-Proskauer

Aby wykonać test Voges-Proskauer, bulion RM/VP jest zaszczepiony badanym mikroorganizmem, z czystej uprawy od 18 do 24 godzin.

Inokulum nie powinno być bardzo gęste. 35-37 ° C to inkuba przez 24 do 48 godzin, chociaż czasami konieczna jest inkubacja przez kilka dni. Cowan i Steel uważają, że 5 dni to minimalny czas inkubacji niezbędny do wykrycia wszystkich pozytywnych gatunków Voges-Proskauer (VP) z rodziny Enterobacteriae.

Test ujawniony

Oddziel porcję 1 ml w rurce i wykonaj rozwój w następujący sposób: Umieść 12 kropli (0,6 ml) Voges A i 4 krople (0,2 ml) Voges B. Wymieszaj do powietrza i odstawić 5–10 minut przed interpretacją. Jeśli jednak test jest nadal ujemny, odstaw i obserwuj rurkę po 30 minutach do 1 godziny.

Wygląd koloru różowego-czerwonego wskazuje, że reakcja Voges-Proskauer jest dodatnia. Jeśli medium pozostaje żółte, reakcja jest ujemna.

Dodanie ujawnienia w kolejności i wskazanej ilości jest niezbędne, aby uniknąć fałszywych negatywów.

Używać

Test Voges-Proskauer jest przydatny do odróżnienia między szczepami od I. coli które są negatywnymi wiceprzewodniczą.

Źródło: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. Ed. Pan -american Editorial S.DO. Argentyna.

QA

Aby przetestować jakość przygotowanego medium, możesz użyć elementów sterujących, w tym Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella Typhimurium i Kanalizacja Enterobacter ATCC 13047.

Oczekiwane wyniki to dodatnie reakcje voges-prospauer tylko dla K. Pneumoniae I I. Cloacae. Reszta daje negatywne reakcje.

Bibliografia

1. Britania Laboratories. Średnia MR-VP. Dostępne na: www.Britanialab.com