Media kultury, funkcja, typy, przygotowanie

Media kulturowe Są to szczególne preparaty żywieniowe do odzyskiwania, izolacji i utrzymania mikroorganizmów bakteryjnych i grzybiczych. Te pożywki mogą być stałe, płynne lub półsolidowe.

Louis Pasteur jako pierwszy wykazał, że w bulionie wykonanym z kawałków gotowanego mięsa podawał, aby bakterie były odtwarzane w dużej ilości, aż do rozbudzenia bulionu. W tym sensie bulion Pasteur Meat jest uważany za pierwsze zastosowane podłoże hodowli płynnej.

Nieprzestrzegane pożywki hodowlane (stałe i płyny). Źródło: Flickr

Następnie Robert Koch, dzięki pomocy jego współpracowników Juliusa Richarda Petriego i Waltera Hesse, dokonali wielkich postępów. Pierwszy zaprojektował płytę Petriego, która jest nadal używana; A drugi przyszedł do niego, aby zastąpić żelatynę dla wody agarowej, aby przygotować solidne media hodowlane, co było bardzo istotne, ponieważ galaretka została zdegradowana przez niektóre mikroorganizmy.

Obecnie istnieje wiele rodzajów mediów kulturowych do różnych celów, dlatego są one klasyfikowane według ich funkcji: wśród najważniejszych środków uprawy żywieniowej, selektywnego, różnicowego, transportu, wzbogacenia, liczenia, kolonii, utrzymania i utrzymania i utrzymania i utrzymania i utrzymania dla dowodu podatności.

Niektóre pożywki hodowlane są specjalne do obserwowania reakcji chemicznych, ponieważ są bardzo przydatne do identyfikacji zaangażowanego mikroorganizmu. Wśród nich można je wspomnieć: średnio Kigler, Mio, Lia, cytrynian,.

[TOC]

Historia

Pierwsze medium kulturowe przygotował Louis Pasteur, kiedy próbował.

Przygotował bulion z kawałkami mięsa i zauważył, że po kilku dniach po wystawieniu na powietrze stał się mroczny, aw bulionie istniała znaczna ilość mikroorganizmów. W tym samym czasie kolejny bulion z ugotowanymi wcześniej kawałkami mięsa i hermetycznie zamknięty pozostał półprzezroczysty, gdy dni minęły dni.

To zwróciło uwagę wielu badaczy i zdało sobie sprawę, że te mikroorganizmy były odpowiedzialne za rozkład mięsa i oprócz tworzenia niektórych chorób.

Z tego powodu konieczne było stworzenie sposobu na odtworzenie tych mikroorganizmów w laboratorium, aby dokładnie je dokładnie zbadać.

W tym sensie Robert Koch wniósł nieoceniony wkład w poprawę niektórych technik laboratoryjnych, zwłaszcza tych związanych z izolacją bakteryjną, ponieważ wprowadził koncepcję pożywki do hodowli stałej.

Początkowo użył plasterków ziemniaków jako solidnego pożywki, ale następnie dodał żelatynę do bulionów mięsnych z lepszymi wynikami. Były jednak chwile, kiedy galaretka stopiła się i stała się płynną uprawą. Dzisiaj wiadomo, że dzieje się tak, ponieważ niektóre bakterie są zdolne do hydrolizowania żelatyny.

Wtedy pomysł użycia dodawania agarów, związek, którego jego żona użyła do pogrubienia słodyczy, przyszedł jednemu z jego współpracowników.

Ten medium podstawowej kultury stopniowo się wyrafinuje, aż do dotarcia do znanych dzisiaj mediów kultury.

Kompozycja

Każde medium ma inny skład, ale istotne jest, aby zawierać określone składniki odżywcze dla dobrego rozwoju rodzaju poszukiwanego mikroorganizmu.

Może również zawierać określone chemikalia, które pomagają ujawnić szlak metaboliczny, który ma określony szczep lub który wykazał obecność niektórych enzymów.

Kolejnym ważnym elementem jest zastosowanie substancji amortyzujących. Pomagają one utrzymać równowagę osmotyczną mediów, a także pH.

Mogą również zawierać węglowodany i wskaźnik pH, aby pokazać fermentację dodanego cukru. Zmiana koloru pożywki zostanie zaobserwowana, jeśli wygeneruje się zakwaszenie przez fermentację.

Niektóre pożywki hodowlane zawierają substancje inhibitora. W zależności od zastosowanej substancji wzrost mikroorganizmów zostanie ograniczony, a wzrost innych.

Rodzaje mediów kulturalnych

Media uprawne są klasyfikowane zgodnie z różnymi kryteriami. Są to: zgodnie z ich konsekwencją, ich składem i funkcją.

- Zgodnie z twoją konsekwencją

Płyny

Nie zawierają agaru. Wzrost bakteryjny lub grzybowy świadczy zmętnienie bulionu, który jest pierwotnie półprzezroczysty.

Solidki

Zawierają od 1,5 do 2% agaru -agar. Zaliczona mieszanina ma powierzchnię, która opiera się drobne przesunięcie uchwytu platyny, bez złamania.

Półstały

Zawierają około 0,5% agar -agar, dlatego jest to stan pośredni między cieczą a ciałem stałym. Idealny w mediach, które służą do ruchliwości. Są również zalecane do ochrony szczepów, ponieważ przez długi czas utrzymują wilgoć.

Może ci służyć: stacyonizm: cechy, dowody i przykłady

Dwufazowe

Są to środki, które są przygotowywane w taki sposób, że istnieje faza stała, a na tym ciekłym pożywce. Powszechnie stosowany do kultur krwi.

- Według jego składu

Naturalne media kultury

Są to substancje pobierane bezpośrednio z natury do uprawy bakterii, co daje im środowisko najbliższe rozwoju w ekosystemie. Przykład, mleko, soki, rozcieńczona krew, surowica itp.

Syntetyczne media kultury

Są najczęściej używane dzisiaj, są odwodnionymi środkami, które nabywamy w domach komercyjnych i do których znany jest ich skład chemiczny, ponieważ zostały strategicznie zaprojektowane zgodnie z typem mikroorganizmu, którego stara się izolować.

Półtyntetyczne media kultury

Jest to połączenie syntetycznego pożywki, do którego dodaje się naturalny element w celu wzbogacenia medium.

Pożywki do hodowli komórkowej

Są to szczególne środki do uprawy wirusa, takie jak te mikroorganizmy, nie są w stanie przetrwać zewnętrznych komórek, muszą zawierać tkanki lub komórki żywych, od zwierzęcia lub rośliny.

Przykład: Cellular Monkey Nerki uprawy lub jaja embrionalne.

- Według jego użyteczności

Odżywcze, selektywne, różnicowe, transport, wzbogacanie, identyfikacja, kwantyfikacja kolonii, testy konserwacji i podatności. Zostanie opisany później.

Funkcjonować

Niezależnie od rodzaju medium kultury, każdy ma coś wspólnego i jest to, że ułatwiają lub promują reprodukcję niektórych mikroorganizmów. Różnica polega na składzie każdego z nich, co jest decydującym czynnikiem dla ostatecznej użyteczności, którą będą mieli.

Każda z istniejących mediów kulturowych jest strategicznie zaprojektowana dla konkretnej funkcji, dla której została utworzona, to znaczy, ma podstawę, która reguluje wytyczne dotyczące ich konkretnej funkcji.

Należy zauważyć, że media hodowlane po zasienie muszą podlegać warunkom temperatury i tlenu odpowiednie dla rodzaju bakterii lub grzyba, które chcesz wyodrębnić.

Na przykład, jeśli chcesz izolować mezofilowe bakterie beztlenowe, agar krwi i inkubuj w warunkach beztlenowych (bez tlenu) w 37 ° C przez 48 godzin przez 48 godzin przez 48 godzin.

Teraz, jeśli do izolacji jest potrzebny grzyb, stosuje się agar Sabouraud z antybiotykami. Jest inkubowany w aerobiozie, w temperaturze pokojowej przez kilka dni, ponieważ te ostatnie są powolnym wzrostem.

Proste pożywne media kulturowe

Jak sama nazwa wskazuje, te pożywki hodowlane zawierają substancje odżywcze, takie jak witamina, aminokwasy, źródła azotu i węgla, wśród nich można je wspomnieć: ekstrakt mięsny lub ekstrakt z drożdżaków, skrobia kukurydziana, trawienie trzustki, peptones, glukoza, między innymi.

Zawierają również inne elementy, które zapewniają środowisko równowagi osmotyczne, ponieważ większość upraw wymaga pH blisko 7,0. Te pierwiastki mogą być: chlorek sodu, fosforan disodowy, między innymi.

Rozcieńczalnikiem jest woda destylowana, a nośniki stałe mają addd agar.

Celem tych hodowli jest odzyskanie mikroflory bakteryjnej lub grzybowej, która istnieje w określonej próbce. Nie rozróżnia mikroorganizmów, ponieważ jest w stanie wyhodować dużą liczbę bakterii, zarówno Grama dodatnich, jak i gramowych, a także grzybów drożdży i grzybni.

Zaleca się, aby wysiewać próbki pochodzące z normalnie sterylnych miejsc. Jednak nie służą one wymagającym mikroorganizmów.

Są również przydatne do utrzymania szczepów, o ile nie zawierają glukozy.

Wzbogacanie mediów kulturowych

Jeśli dodaje się krew lub podgrzewana krew do prostych pożywek żywieniowych, stają się wzbogaconymi mediami (odpowiednio krew i agar czekoladowy).

Środki te są bardzo przydatne do zasilania próbek, które są zwykle sterylne, do ratowania szczepów, które są słabe i izolujące wymagające mikroorganizmy z odżywczego punktu widzenia.

Selektywne media kultury

Selektywne pożywki hodowlane, oprócz zawierania niezbędnych składników odżywczych do wzrostu niektórych interesujących mikroorganizmów, są również dodanymi substancjami hamującymi, takimi jak antybiotyki, przeciwgrzybicy, barwniki, sole żółciowe, między innymi.

Substancje inhibitora mają na celu zmniejszenie różnorodności szczepów, które mogą rosnąć, faworyzując wzrost szczególnie specjalnej grupy, która chce uratować.

Przykład: bulion EC (specjalny dla całkowitej i kałowej coli) lub Agar Sabouraud z antybiotykami (specyficzne dla grzybów).

Media różnicowe kultury

Media różnicowe zawierają elementy żywieniowe niezbędne do wzrostu określonej grupy mikroorganizmów, a także zawierają substancje, które w obecności niektórych mikroorganizmów będą metabolizowane lub zdegradowane.

Oznacza to, że będą one wywoływać reakcje chemiczne, które w taki czy inny sposób będą udokumentowane w pożywce hodowlanej.

Może ci służyć: strefa fotikuryczna: charakterystyka, flora światła, fauna

Niektóre reakcje alkaliczne lub zakwaszone pożywkę i dzięki obecności wskaźnika pH zmiany te można udowodnić przez kolorowy zakręt w środku i kolonii.

Dlatego wśród dużej grupy bakterii, które mogą rosnąć w tym pożywce, te, które metabolizują lub degradują substancję i te, które tego nie robią, po prostu obserwując kolor kolonii i medium.

Na przykład agar krwi pozwala odróżnić bakterie, które wytwarzają hemoliza beta (przezroczysta halo) od tych, które wytwarzają hemoliza alfa (zielona halo) i od tych, które nie wytwarzają hemolizy.

Media selektywne i różnicowe

Przykładem tego jest to, co dzieje się w Agar MacConkey. Jest selektywny, ponieważ pozwala jedynie na wzrost gram negatywnych bachilli; I jest zróżnicowany, ponieważ może rozróżnić bakterie fermentacyjne laktozy (kolonie kolorów fuksia) niefermentowania (blady lub bezbarwny różowy kolor).

Media transportowe

Jak sama nazwa wskazuje, są to środki używane do transportu próbek, które zostały zabrane w mniej lub bardziej odległym miejscu do laboratorium, które przetworzy próbkę. Środki transportu zachowują próbkę w najlepszych warunkach dla wiarygodnych wyników.

Te pożywki hodowlane mają bardzo szczególne cechy, ponieważ nie mogą przekraczać składników odżywczych, ponieważ obecna populacja bakteryjna pozostaje opłacalna, ale bez wzrostu liczby.

Zazwyczaj są to media półsolidowe, umożliwiając nawodnienie próbki. Nie należy jednak rozpraszać wysyłania próbki jak najszybciej do laboratorium. Przykłady środków transportu: Medio Stuart, Cary Blair i Ama.

Kultura połowy i wzbogacania

Te pożywki hodowlane są płynne. Służą one do ratowania określonych patogenów, które w danym momencie mogą być obecne w próbce minimalnej ilości.

Przydatne jest również ratowanie szczepu patogennego, który może być słaby z powodu niektórych wcześniejszych leczenia. Np.: Woda Peptonada, bulion tioglikolanowy i bulion selenito.

Środki te mają substancje hamujące, które unikają wzrostu towarzyszącej mikroflory i określonych składników odżywczych, które sprzyjają rozwojowi mikroorganizmu zainteresowania.

Media uprawne do celów identyfikacyjnych 

Te pożywki mają substancje, które mogą być chemicznie metabolizowane przez niektóre bakterie, wytwarzając reakcje chemiczne, które pokazują obecność określonych enzymów lub szlaków metabolicznych.

Dlatego są one stosowane jako testy biochemiczne, które pomagają rozpoznać gatunek i gatunki określonej grupy szczepów. Np. Średni Kigler dowodzi, jeśli mikroorganizm jest w stanie fermentować glukozę i laktozę, jeśli wytwarza wodór i siarak gazowy.

Ta pożywka zawiera ujawniające substancje, które pozwalają obserwować reakcję, takie jak wskaźnik pH i jony żelaza.

Ten prosty test może różnicować dwie duże grupy mikroorganizmów bakteryjnych, takie jak bakterie należące do rodziny bakterii Enterobacteriaceae o nazwie Non -fermenting.

Oznacza liczenie kolonii

Są to proste, nieselektywne środki, które służą do kwantyfikacji populacji drobnoustrojów, takich jak konto standardowe. Rodzaj mikroorganizmu, który wzrośnie w tym pożywce, będzie zależeć od ustalonych warunków temperatury i tlenu.

Media uprawne dla dowodu podatności

Standaryzowanym medium do tego celu jest agar Müellera Hintona, oznacza to, że jest idealny do oceny zachowania różnych antybiotyków przeciwko izolowanym mikroorganizmowi.

Jest to szczególnie przydatne w mało wymagających bakteriach, podczas gdy w żądaniu bakterii można go zastosować tylko wtedy, gdy jest to uzupełnione krwią.

Środki konserwacyjne do konserwacji

Środki te mają na celu odtworzenie mikroorganizmu, a także utrzymanie w dłuższej możliwej żywotności bakterii lub grzyba, a także, że ich funkcje fizjologiczne są zachowane.

Ważną cechą jest to, że ten rodzaj pożywki nie powinien zawierać glukozy, ponieważ chociaż jest to element zapewniający szybki wzrost, jego fermentacja wytwarza kwasy, które zmniejszają żywotność mikroorganizmu.

Niektóre laboratoria muszą zachować pewne mikroorganizmy opłacalne, aby były później wykorzystane w badaniach, kontrolach wewnętrznych lub do celach dydaktycznych.

Przygotowanie

Obecnie istnieje wiele znaków towarowych, które dystrybuują różne media kultury. Media są dostępne w postaci liofilizowanej lub odwodnionej, zawartej w hermetykach i chronionych słoikach światła.

Każde medium wnosi etykietę, która określa nazwę medium, jego komponenty, numer partii i ile ważyć, aby przygotować litr medium kultury.

Może ci służyć: ewolucja prebiotyczna: gdzie to się stało i co jest konieczne

Jako rozcieńczający stosuje się wodę destylowaną. Ciężka ilość rozpuszcza się w litrom wody destylowanej, aż mieszanina nie zostanie homogenizowana. Większość mediów jest zabierana do autoklawu, 15 funtów, 121 ° C temperatury, przez 15 minut czasu.

Płynne media są już rozpowszechniane w odpowiednich rurach roboczych, podczas gdy solidne media autoklawują się w kolbach Erlenmeyer.

Te ostatnie pozostawiają, aż osiągną temperaturę 55 ° C i podawane w płytkach Petriego wewnątrz laminarnego dzwonka przepływowego lub w pobliżu zapalniczki Bunsena. Mogą się zestalić i są odwrócone w lodówce.

Istnieją również stałe pożywki hodowlane, które są rozmieszczone w probówkach, co pozwala na zestalenie się w piku tacos (prostym) lub fletu (nachylone).

Przed użyciem jakiegokolwiek przygotowanego pożywki hodowlanej, niezależnie od tego, czy cieczy, musi ono temperować przed siewem próbki.

Znaczenie

Media hodowlane są niewątpliwie bardzo cennym narzędziem do pracy dla mikrobiologów, ponieważ umożliwiają odzyskanie czynnika zakaźnego, które w określonym czasie mogą wpływać na osobę lub zanieczyszczanie jedzenia, środowiska lub powierzchni.

W tym sensie można powiedzieć, że mikrobiologia ma różne pola, w tym kliniczna, przemysłowa, środowiskowa, żywnościowa mikrobiologia, i we wszystkich środkach kultury są stosowane.

Oczywiście rodzaj pożywki używanej w każdym przypadku może się różnić w zależności od potrzeb i rodzaju przetworzonej próbki. Wpływa również na grupę poszukiwanego mikroorganizmu.

Izolacja patogennego mikroorganizmu lub powodowania zanieczyszczenia jest niezbędna do umieszczenia skutecznego leczenia lub przyjęcia procedur, które pomagają wyeliminować dany zanieczyszczenie.

W przypadku mikrobiologii klinicznej jest to nie tylko ważne.

To badanie, które wykorzystuje również pożywkę hodowlaną, pozwoli powiedzieć, który środek przeciwdrobnoustrojowy jest wrażliwy, a który jest odporny lub w skrócie, który może być stosowany jako leczenie, a co nie jest.

Dlatego media hodowlane nie można brakować w laboratorium mikrobiologii, bez względu na obszar.

Wreszcie można powiedzieć, że media kulturowe pozwoliły nam zbadać różne aspekty, zarówno bakterie, jak i grzyby.

Kontrola jakości mediów uprawnych

Przygotowanie i użycie mediów hodowlanych nie powinno być wykonywane lekko. W każdym laboratorium musi istnieć mieszkanie, które stosuje protokoły kontroli jakości do mediów, za każdym razem, gdy przygotowywane są nowe partie, a tym samym gwarantują, że są odpowiednio przygotowane, sterylne i funkcjonalne.

Aby ocenić ich sterylność, jeden lub dwa środki każdej działki są losowo pobierane i inkubowane w 37 ° C przez kilka dni (nie powinno być wzrostu). Aby sprawdzić, czy stosuje się odniesienia funkcji ATCC (kolekcja kultury amerykańskiej) należycie uprawiane i opłacalne.

Usuwanie mediów uprawy

Po korzystaniu z mediów kulturowych należy je odrzucić w taki sposób, aby nie zanieczyszczyć środowiska.

Aby to zrobić, materiał jest sterylizowany w autoklawie, zanim zostanie odrzucony. Następnie materiał szklany jest usuwany. Ten ostatni zostaje umyty, wysuszony, sterylizowany i zapisywany do późniejszego użycia. W przypadku używania płyt jednorazowych są one sterylizowane, a następnie odrzucane w specjalnych workach.

Bibliografia

1. Borrego Microbiology in Stamps VIII. Robert Koch: Triumf wytrwałości (i). SEM 2018, 117 (1): 1-18 University of Malaga. Dostępne na: dni.UAB.Kot/
2. Volcy c. Genesis i ewolucja postulatów Kocha i ich związku z fitopatologią. Recenzja Kolumb. 2008; 26 (1): 107-15. Dostępne na: Scielo.org.współ/
3. Burguet Lago Nancy, Castillo Abraham Lourdes. Kontrola jakości mediów hodowlanych wykorzystywanych w monitorowaniu środowiskowym tajnych obszarów produkcyjnych. Epidemiol kubańskiego Rev Hig 2013; 51 (2): 155-160. Dostępne na: Scielo.
4. Bonilla M, Pajares S, Vigueras J, Sigala J, Le Borgne S. Podręcznik materiału dydaktycznego podstawowych praktyk mikrobiologii. Metropolitan Autonomous University. Dział nauk przyrodniczych i inżynierii. Jednostka Cuajimalpa. 2016. Dostępne na: CUA.Uam.MX/
5. Carbajal a. Media hodowli komórkowej: recenzja. Labome świat laboratoriów. University of Pittsburgh Medical Center, Stany Zjednoczone. 2013 Dostępny na: ES/
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. Ed. Pan -american Editorial S.DO. Argentyna.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Pan -american Editorial S.DO. Argentyna.