Fundacja SIM, przygotowanie i zastosowania

On Sim Medium Jest to półsolidowy i różnicowy agar, specjalnie zaprojektowany, aby pomóc w identyfikacji niektórych bakterii, głównie z rodziny Enterobacteriaceae. Składa się z tripteine, peptonu, siarczanu żelaza, siarczanu amonu, tiosulfinianu sodu i agaru.

To medium pozwala na wykonanie trzech ważnych testów: produkcji siarkowodoru (H₂S), tworzenie indolu i ruchliwości, stamtąd nadchodzi akronim SIM. Ze względu na swoją wielką użyteczność nie można jej brakować w laboratorium bakteriologii.

DO. Middle Sim Commercial B. SIM H2S (-), indol (-) i ruchliwość (+) i SIM H2S (+), indol (-), test testowy ruch (+). Źródło:. Zdjęcie wykonane przez autora MSC. Marielsa Gil ur. Mfloayza [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licencje/by-sa/3.0)]

W przeciwieństwie do innych mediów, musi to być półsolid, aby wykryć pojemność ruchu, którą mają niektóre bakterie. W tym sensie test ten działa bardzo dobrze w enterobakterii, ale nie w niefera negatywnych bachilli, gdzie preferowane są inne metody, takie jak toczące się kropla.

Medium SIM pozwala odróżnić pewne określone właściwości, które charakteryzują niektóre bakterie w stosunku do innych. Na przykład Escherichia coli wyróżnia się byciem h₂S (-), indol (+) i ruchliwość (+), podczas gdy Proteus mirabilis to h₂S (+), indol (-), ruchliwość (+).

[TOC]

Podstawa

Jest to środki kultury, które są uważane za różnicowe, ponieważ jej zastosowanie udaje się rozróżnić mikroorganizmy zdolne do wytwarzania siarkowodoru od tych, którzy tego nie robią; Podkreśla również te, które tworzą indol z tryptofanu od tych, którzy nie tworzą, i ostatecznie odróżnia ruchowe bakterie od nieruchomości.

Źródło prądu

Jak każdy sposób kultury, ma elementy, które dostarczają niezbędnych składników odżywczych, dzięki. Te elementy są reprezentowane przez Peptones i Triptein.

Rozwój mikroorganizmu w środowisku jest niezbędny do obserwowania obecności lub braku cech, które to oznacza.

Produkcja siarkowodoru

Litera s akronimu SIM odnosi się do wytwarzania siarkowodoru (H. H₂S). Bakterie zdolne do tworzenia siarkowodoru będą przyjmować siarczan sodu.

Może ci służyć: konkurencja wewnątrzgólna: cechy, typy i przykłady

Po utworzeniu H₂S -Gas bezbarwne -reaguje to z solą żelaza obecną na środku, tworząc siarczek żelazny, wyraźnie widoczny (czarny osad). Bakterie, które nie tworzą H₂S, opuść oryginalne medium kolorowe (beż).

Obecność czarnego osadu może utrudniać interpretację ruchliwości. Wiadomo jednak, że większość enterobakterii wytwarzających HT₂S to pozytywna ruchliwość, taka jak Salmonella, Proteus i Citrobacter. Ponadto czarny osad, który obejmuje prawie całe medium, sugeruje pozytywną ruchliwość.

Formacja indolowa

Druga litera akronimu SIM to „i”, który reprezentuje tworzenie się indolu.

W tym sensie Tripteine, oprócz tego, że jest źródłem składników odżywczych, wypełnia kolejną fundamentalną funkcję. Ten pepton jest bogaty w aminokwas zwany tryptofanem, dlatego może pokazywać bakterie, które wytwarzają triptofanazę.

Ten enzym jest odpowiedzialny za Clivar do aminokwasu triptofanowego, z wynikającym z tego tworzenia indolu (substancji bezbarwnej), kwasu piruvinowego i amonu.

Dlatego, aby pokazać tę reakcję, jest to konieczne. Każdy z dwóch reaguje z indolem, tworząc pierścień w kształcie czerwonej fucsia na powierzchni agaru. Jeśli pojawi się pierścień kolorowy Fuchsia, test indolowy jest interpretowany jako pozytywny.

Bakterie, które nie posiadają tego enzymu, nie tworzą pierścienia i są interpretowane jako ujemny test indolowy.

Należy zauważyć, że dowód indolowy musi być ostatnim interpretacją, ponieważ po dodaniu odczynnika medium utrudnia wizualizację ruchliwości.

Poruszanie się

Wreszcie litera „m” słowa SIM oznacza ruchliwość. Aby ocenić ruchliwość, to medium jest strategicznie pół-stolidowe, ponieważ ta cecha jest niezbędna do obserwowania, czy istnieje ruch bakteryjny. Bakterie, które mają wici, to te, które dają ten pozytywny test.

Może ci służyć: limfocyty T: struktura, funkcje, typy, dojrzewanie

Pozytywny test zostanie udowodniony, gdy zaobserwowano zmętnienie, zarówno w początkowym inokulum, jak i wokół tego. Podczas gdy bakterie inne niż mobile rozwijają się tylko podczas początkowej podróży inokulum.

Przygotowanie

Sim Medium

Zważyć 30 grać odwodnioną pożywkę i rozpuść się w litrom wody destylowanej. Mieszanina pozostaje w spoczynku przez 5 minut, a następnie ogrzewa się do gotowania, często mieszając, aż do całkowitego rozwiązania.

Rozłóż mieszaninę w probówkach z bawełnianą pokrywką i autoklawanem w 121 ° C przez 15 minut. Zdejmij stojak z rurek autoklawowych i pozwól zestalić się w pozycji pionowej, tak aby medium jest w postaci taco.

W przypadku jego ochrony jest zapisywane w lodówce do momentu jej użycia. Przygotowana pożywka musi mieć końcowe pH 7,3 ± 0,2.

Podczas zaszczepienia medium musi to być w temperaturze pokojowej. Kolor medium to beżowy.

Odczynnik Kovaca

Zmierz 150 ml alkoholu amylowego, izoamylu lub butylowego. (Użyj jednego z trzech wymienionych).

Rozpuścić 10 G-G-dimetyloaminobenzaldehyd. Następnie powoli dodaj 50 ml skoncentrowanego kwasu solnego.

Odczynnik gotowy do użycia jest bezbarwny lub czysty żółty. Musi być trzymany w bursztynowej butelce i przechowywać w lodówce. Nie używaj, jeśli masz ciemnobrązowy kolor; To wskazuje, że jest on uszkodzony. Ten odczynnik jest preferowany, jeśli chodzi o Enterobacteria.

Odczynnik Erlich

Waż 2 G-dimetyloaminobenzaldehyd i rozpuść się w 190 ml absolutnego alkoholu etylowego i powoli mieszaj się z 40 ml stężonego kwasu chlorowodorowego. Trzymaj odczynnik Kovaca w ten sam sposób. Odczynnik Ehrlicha jest wykorzystywany bardziej do bakterii nieferycznych i beztlenowych.

Aplikacje

Medium SIM jest wysoce stosowane w laboratoriach bakteriologii. Zaletą można zaobserwować trzy istotne cechy w identyfikacji enterobakterii.

Może ci służyć: fermentacja octowa: Charakterystyka, zastosowania, przykłady

Posiany

Właściwym sposobem zasiania tego medium jest użycie igły, z jaką część czystej kolonii jest przyjmowana i wkładana w centrum medium pionowo. Należy zrobić pojedyncze lęk. Kłucie nie powinno dotrzeć do dna rurki, właściwą rzeczą jest pokrycie tylko dwóch stron trzecich.

Nie wskazane jest powtarzanie inokulum, ponieważ może to zawierać fałszywe interpretacje pozytywnej ruchliwości. Współpracowana pożywka inkubuje się w aerobiozie w 37 ° C przez 24 godziny.

Po zakończeniu czasu obserwuje się, czy nastąpiła produkcja H₂S i przeczytaj ruchliwość. Wreszcie indol jest ujawniony, dodając od 3 do 4 kropli odczynnika Ehrlicha lub Kovaca, mieszane delikatnie i interpretowane.

Źródło: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. Ed. Pan -american Editorial S.DO. Argentyna.

QA

Jako kontrola sterylności inkubuje się jedną lub dwie rurki bez zaszczepienia w 37 ° C na 24 godziny. Oczekuje się, że po tym czasie nie ma zmiany ani zmiany koloru.

Jako kontrola jakości możesz użyć certyfikowanych znanych szczepów, takich jak: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter Aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella Typhimurium ATCC 14028, Shigella Sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Oczekiwane wyniki to: Escherichia coli H₂S negatywne, indolowe i pozytywne ruchliwość, Enterobacter Aerogenes Tylko pozytywna ruchliwość, Salmonella Typhimurium H₂S i pozytywna ruchliwość, z ujemnym indolem. Proteus vulgaris Wszystkie pozytywne, tak długo Klebsiella pneumoniae I Shigella Sonnei Wszystkie negatywne.

Ograniczenia

-Niektóre szczepy Morganella Morganii, Wśród innych szczepów może wytwarzać brązowawą pigment w tym pożywce z powodu produkcji melaniny, nie należy tego mylić z osadem siarczku żelaza. U niedoświadczonych profesjonalistów sytuacja ta może generować fałszywe pozytywy w interpretacji testu H₂S.

-Ścisłe bakterie aerobowe będą rosły tylko na powierzchni rurki, co utrudnia interpretację ruchliwości.

Bibliografia

1. BD Laboratories. BBL Sim Medum. 2008. Dostępne na: BD.com
2. Neogen Laboratories. Sim Medum. Dostępne na: Foodsafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. Sim Medum. 2009. Dostępne na: http: // f-soria.Jest
4. Laboratorium Brizuela-Lab.  Przeciętny SIM. Dostępne w: .Brizuela-Lab.com
5. Britania Laboratories. Przeciętny SIM. 2015. Dostępne na: Studyres.To jest/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. Ed. Pan -american Editorial S.DO. Argentyna.