Połowa fundamentu, przygotowania, zastosowań i ograniczeń

On Połowa lub fermentacja glukozy jest półstałowym agarem specjalnie zaprojektowanym do badania oksydacyjnego i fermentacyjnego metabolizmu węglowodanów w ważnej grupie mikroorganizmów innej niż enterobakteria, zwana nie-enterrycznymi bachillami ujemnymi.

Został stworzony przez Hugh i Leifson; Badacze ci zdali sobie sprawę, że konwencjonalne media do badania produkcji kwasu z węglowodanów nie były odpowiednie dla tej konkretnej grupy bakterii.

DO. Środek podstawowej reklamy. B. Rurki z połową zasianego. Źródło: A i B Zdjęcia wykonane przez autora MSC. Marielsa Gil.

Wynika to z faktu, że niechusteryczne bachilli ujemne zwykle wytwarzają małe ilości kwasów, w przeciwieństwie do enterobakterii.

W tym sensie medium ma specjalne cechy, które mogą wykryć małe ilości utworzonego kwasu, zarówno przez oksydacyjne, jak i fermentacyjne. Różnice te są związane z ilością peptones, węglowodanów i agaru.

Ta pożywka zawiera mniej peptonas i większe stężenie węglowodanów, w ten sposób produkty, które alkheat pożywka są zmniejszone w wyniku metabolizmu białek, a wytwarzanie kwasów jest zwiększone przez stosowanie węglowodanów.

Z drugiej strony zmniejszenie ilości agaru sprzyja rozprzestrzenianiu się kwasu wytwarzanego przez całą pożywkę, oprócz obserwowania ruchliwości.

Położenie składa się z peptonu, chlorku sodu, niebieskiego bromotimolowego, fosforanu dipotasowego, agaru i węglowodanów. Najczęstszym węglowodanem jest glukoza, ale inne mogą być stosowane według tego, które chcesz zbadać, takie jak laktoza, maltoza, ksyloza, między innymi.

[TOC]

Podstawa

Jak każdy sposób kultury, środowisko musi zawierać substancje odżywcze, które gwarantują wzrost bakteryjny; Te substancje są peptonami.

Ze swojej strony węglowodan zapewnia energię, a jednocześnie służy do zbadania zachowania mikroorganizmu przeciwko niemu, to znaczy pozwala klasyfikować bakterie jako oksydacyjne, fermentacyjne lub nie -krzyżowe organizm.

Medium zawierające stosunek peptonu/węglowodanów 1: 5 w przeciwieństwie do konwencjonalnych pożywek 2: 1. Gwarantuje to, że ilość alkalicznych amin utworzonych z degradacji peptonesa nie neutralizuje tworzenia się słabych kwasów.

Może ci służyć: Sphingomyeline: co to jest, struktura, funkcje, synteza

Z drugiej strony medium zawiera chlorek sodu i fosforan dipotasowy. Związki te stabilizują osmotycznie w środku i regulują pH odpowiednio. Bromootimol Blue to wskaźnik pH, który sprawia, że ​​kolor żółtej zieleni z produkcją kwasu.

Niektóre mikroorganizmy mogą używać węglowodanów w drodze oksydacyjnej lub fermentacyjnej, podczas gdy inne nie trwają.

To zależy od charakterystyki każdego mikroorganizmu. Na przykład niektóre ścisłe mikroorganizmy aerobowe mogą utleniać niektóre węglowodany, a opcjonalne beztlenowe mogą utleniać i fermentować w zależności od otaczającego ich środowiska, podczas gdy inne nie utleniają węglowodanów ani fermentować (Ascarolitics).

Wreszcie istnieje modyfikacja medium zalecanego przez CDC, która zawiera specjalną podstawę z czerwonym fenolem jako wskaźnikiem.

Proces utleniania

Proces utleniania glukozy nie wymaga fosforylacji glukozy, jak występuje w procesie fermentacji. W tym przypadku grupa aldehydu jest utleniona do grupy karboksylowej, co powoduje kwas glukonowy. To z kolei jest utleniane do 2-Zo-glikonów.

Te ostatnie lub dwie cząsteczki kwasu piruwicznego gromadzą się lub degradują. Ten system potrzebuje obecności tlenu lub związku nieorganicznego jako ostatecznego akceptora elektronów.

Produkcja kwasów tą drogą jest słabsza niż uzyskana przez trasę fermentacyjną.

Proces fermentacji

Aby zrobić fermentację glukozy przez którąkolwiek z dostępnych dróg, należy ją najpierw fosforylować, stając się glukozą-6-fosforanem.

Fermentacja glukozy może zabrać kilka dróg, główną jest ścieżka Embden-Meyerhof-Parna degradacji pentozy.

Wybrana ścieżka będzie zależeć od układu enzymatycznego, który ma mikroorganizm.

Via de Embden-Meyerhof-Parna

W fermentacji glukozy przez Embden-Meyerhof-Parnę. Stamtąd pochodzi substancja pośrednia, która jest kwasem piruwicznym.

Może ci służyć: fotoperiod

Stamtąd powstają różne rodzaje mieszanych kwasów, które mogą się różnić w zależności od gatunku do drugiego.

Ten system występuje przy braku tlenu i potrzebuje związku organicznego jako ostatecznego akceptora elektronów.

Route Encoudoroff

W fermentacji glukozy przez trasę intner-Doucoroff 6-fosforan glukozy idzie do glukonu-laktonu-6-6-fosforanu, a stamtąd jest utlealizowany do 6-fosfogluwignianu i 2-Zo-3-dedexi-6 fosfoglukonianu, w końcu utworzyć kwas piruwiczny. To wymaga tlenu, tak aby istniała glikoliza.

Droga do degradacji monofosforanu pentozy lub Warburga-Dikensa

Ta trasa jest hybrydą poprzednich 2. Zaczyna się podobnie do szlaku Entnera-Doudoroffa, ale następnie gliceraldehyd-3-fosforan powstaje jako prekursor kwasu piruwicznego, jak ma to miejsce na ścieżce Embden-Meyerhof-parnana.

Przygotowanie

Ważyć:

2 GR peptonu

5 GR chlorku sodu

10 GR d-glukozy (lub węglowodan, który zostanie przygotowany)

0,03 GR Bromotimol Blue

3 gr. Agar

0,30 gr gipotazowego fosforanu

1 litr wody destylowanej.

Wymieszaj wszystkie związki oprócz węglowodanów i rozpuść w 1 litorze wody destylowanej. Rozgrzewaj się i mieszaj, aż rozpuszczają się w całości.

Podczas chłodzenia w 50 ° C dodaje się 100 ml glukozy do 10% (filtrowane).

Aseptycznie rozkładaj 5 ml medurów w testach z bawełnianą pokrywą i autoklawanem w temperaturze 121 ° C, 15 funtów ciśnienia przez 15 minut.

Wypuść w pozycji pionowej.

Średnie pH musi wynosić 7, 1. Kolor przygotowanego medium jest zielony.

Zachowaj w lodówce.

Aplikacje

Medium jest specjalnym sposobem określenia zachowania metabolicznego mikroorganizmu przeciwko węglowodanowi. Szczególnie dla tych, którzy tworzą kwasy o niewielkiej, słabej lub zerowej drogi.

Posiany

Dla każdego mikroorganizmu potrzebne są 2 rurki, obie należy zaszczepić mikroorganizm do badania. Kolonia jest pobierana z prostym uchwytem, ​​a na środku rurki wykonuje się nakłucie bez dotarcia do dna; Możesz zrobić kilka nakłuć, o ile nie jesteś zainteresowany obserwacją ruchliwości.

Może ci służyć: Alanine: Charakterystyka, struktura, funkcje, biosynteza

Do jednej z rur dodaje się warstwa sterylnej ciekłej wazeliny lub sterylnej stopionej parafiny (około 1 do 2 ml) i jest oznaczona literą „F”. Druga rurka jest oryginalna i oznaczona literą „O”. Obie rury są inkubowane w 35 ° C i obserwuje się codziennie do 3 do 4 dni.

Interpretacja

Metabolizm gazowy i produkcja

Tabela: Klasyfikacja mikroorganizmów zgodnie z ich zachowaniem w otwartych (oksydacyjnych) i zamkniętych (fermentacyjnych) rurkach (fermentacyjne)

Źródło: Wykonane przez autora MSC. Marielsa Gil

Gaz obserwuje się wraz z tworzeniem pęcherzyków lub przemieszczenia agaru.

Należy zauważyć, że organizm, który utlenia tylko glukozę, ale nie fermentację, nie może fermentować innych węglowodanów, w każdym razie tylko go utlenia. Dlatego w tej sytuacji zapieczętowana rurka zostanie pominięta do badania innych węglowodanów.

Poruszanie się

Dodatkowo można zobaczyć w środku ruchliwości.

Pozytywna ruchliwość: Wzrost, który nie ogranicza się do strefy zaszczepienia. Wzrost po bokach rury jest.

Negatywna ruchliwość: Wzrost tylko w początkowym inokulum.

QA

Jako sterowanie jakością możesz użyć następujących szczepów: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa I Moraxella sp. Oczekiwane wyniki to:

1. coli: Fermentor glukozy (zarówno rurki żółtej, jak i gazowej).
2. aeruginosa: Utleniacz glukozy (żółta otwarta rurka i zielona lub niebieska uszczelka).
3. Moraxella SP: Nie -nemoval (zielona lub niebieska rura otwarta, zielona rurka uszczelniająca).

Ograniczenia

-Niektóre mikroorganizmy nie mogą rosnąć w środowisku. W takich przypadkach test jest powtarzany, ale do średniej surowicy 2% lub 0,1% ekstraktu drożdży.

-Reakcje utleniania są często obserwowane blisko powierzchni, a reszta pożywki może być zielona, ​​podobnie jak jest to dodatnie.

Bibliografia

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. Ed. Pan -american Editorial S.DO. Argentyna.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Pan -american Editorial S.DO. Argentyna.
3. Mac Faddin J. (2003). Testy biochemiczne identyfikacji bakterii znaczenia klinicznego. Wydanie trzecie. Pan -american Editorial. Buenos Aires. Argentyna.
4. Laboratories Francisco Soria Melguizo. 2009. Pożywki glukozy. Dostępne na: http: // f-soria.Jest
5. CDADA PREMADISA LABOROTIONS. Środek glukozy. Dostępne na: Condalab.com
6. BD Laboratories. 2007. Medium podstawowego. Dostępne na: BD.com