Historia kamery Neubauer, charakterystyka, używa

Kamera Neubauer, Heatymetr lub hechocytometr, jest instrumentem laboratoryjnym, który składa się ze specjalnej szklanej płytki nazębnej. Ta komora służy do wykonywania niektórych rodzajów komórek, takich jak czerwone krwinki, białe krwinki i płytki krwi, chociaż można ją użyć do zliczenia zarodników, nasienia, pasożytów itp.

Przedstawia bardzo szczególne cechy, ponieważ składa się z 3 stref, centralnego dla liczby i dwóch stref wsparcia. Każda kamera ma dwa obszary lub site, jeden u góry i jeden na dole.

Kamera Neubauer. Źródło: Santibadia [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licencje/nabrzeże/4.0)]. Edytowany obraz.

Mają one wiele podziałów w formie siatki. Obszary zliczające to średnie pudełka znalezione w 4 zakątkach obu site, a także centralny kwadrat.

Zespół kamery powinien być wykonany bardzo ostrożnie, ponieważ każdy szczegół wpływa na liczbę komórek. Można popełnić wiele błędów, ale jeśli pojawi się którykolwiek z nich, aparat musi zostać zdemontowany, czyszczony i ponowne złożenie. Wśród głównych błędów można wspomnieć:

Rebosar aparat lub wykonaj niewystarczające napełnienie, pozwól aparatowi wyschnąć, spróbuj usunąć nadmiar płynu z gazą, przechyl kamer. Wszystkie te błędy przyniosą nierealną wartość.

[TOC]

Historia

Kamera Neubauera jest precyzyjnym instrumentem, aw procesie produkcyjnym przechodzi przez ścisłą kontrolę jakości. Został stworzony dla precyzyjnych cząstek lub form przez MM³, takie jak komórki w różnych płynach. Jego delikatna grafika jest rzeźbiona ołówkiem diamentowym.

Charakterystyka komory Neubauer

Kompletny aparat to rozmiar normalnego szkiełka, dzięki czemu można go umieścić na płycie mikroskopowej.

Kamera składa się z trzech centralnych prostokątnych powierzchni (A, B, C). W strefie „B” strefa R lub Count znajduje się, zwana także retikulum. Jeden z każdej strony aparatu, oddzielony strefą „D”.

Schemat graficzny kamery Neubauer. Źródło: Practical Hematology Guide. Bioanalysis School of University of Carabobo, Wenezuela.

Każdy retikulum to polerowany obszar zawierający grawerowany obszar wkładu. Składa się z kwadratu o powierzchni 9 mm² I jest wewnętrznie podzielony na 9 zdjęć z 1 mm² powierzchnia. Cztery rogi są podzielone na 16 mniejszych siatek (0.0625 mm² Powierzchni).

Siatki te są tworzone przez serię milimetrowych linii, które przecinają się ze sobą, stanowi idealnie graficzne siatki i ograniczone do określonych miar. Te linie zostały zarejestrowane z diamentową końcówką.

Ulepszone retikulum Neubauer. Źródło: Practical Hematology Guide of the Bioanalysis School of University of Carabobo, Wenezuela.

Cztery strony odpowiadają obszarze zliczania. W tych stronach lub zakątkach występuje relacja większości komórek (czerwone krwinki i leukocyty), podczas gdy płytki krwi są liczone w obszarze centralnym.

Może ci służyć: Malachite Green: Charakterystyka, przygotowanie, zastosowania, toksyczność

Strefa centralna ma więcej podziałów, składa się z kwadratu 1 mm² podzielone na 25 obrazów o powierzchni 0,04 mm² każdy. Te z kolei są podzielone na 16 siatek o powierzchni 0,0025 mm².

Opis ulepszonego retikulum Neubauer. a) kwadrat narożników, b) kwadrat centralny, c) średni kwadrat centralnego kwadratu. Źródło: Practical Hematology Guide of the Bioanalysis School of University of Carabobo, Wenezuela.

Obszar „A” i „C” służy jako wsparcie do umieszczania specjalnych pokrowców obiektów, które nazywa się lamelą hematymetryczną lub hematymetrem.

Wysokość między blaszką a powierzchnią zliczającą wynosi 0,1 mm. Mierniki powierzchniowe pól zliczających, a także wysokość aparatu i rozcieńczenie próbki, są niezbędnymi danymi do wykonania końcowych obliczeń.

Aplikacje

Służy do liczby komórek. Zwłaszcza jest to bardzo pomocne w obszarze hematologii, ponieważ pozwala na wykonanie 3 serii krwinek; to znaczy czerwone krwinki, białe krwinki i płytki krwi.

Można go jednak zastosować w innych obszarach, na przykład do liczenia nasienia, zarodników, bakterii lub innych ważnych elementów w zależności od rodzaju próbki.

Jak jest używane?

przygotowanie próbki

Aby wykonać liczbę komórek, zwykle zaczyna się od poprzedniego rozcieńczenia. Przykład: Aby zliczyć białe krwinki, rozcieńczenie 1:20 przygotowuje się za pomocą cieczy TURK. Rozcieńczenie jest dobrze wymieszane przed załadowaniem pipety i ustawienie kamery Neubauer.

Są sytuacje, w których rozcieńczenie 1:20 nie wystarcza do policzenia. Na przykład u pacjentów cierpiących na niektóre rodzaje przewlekłych białaczki. W takich przypadkach należy wykonać wyższe rozcieńczenia jako 1: 100.

Jeśli wręcz przeciwnie, konto jest bardzo niskie, jak u ciężkich leukopenii, można skoncentrować próbkę. Przykład: Możesz zrobić rozcieńczenie 1:10.

Wprowadzane zmiany wpływają na obliczenia.

Montaż komory Neubauer

Komora Neubauera jest montowana przez umieszczenie lamelli hematymetrycznej w strefie środkowej. Oba muszą być bardzo czyste i suche. Aby umieścić lamella, jest przyjmowana przez krawędzie i delikatnie upada na kamerę.

Jest to wypełnione przez umieszczenie czubka automatycznej pipety lub pipety Thoma pod kątem 35 ° na krawędzi obszaru ładunku. Ciecz jest rozładowywana delikatnie, a strefa ładowania jest wypełniona kapilarnością. Odbywa się to po obu stronach, aby załadować dwa siły.

Żadnych siatków nie należy przeładować, a cieczy nie należy odmawiać. Obciążenie musi być dokładne. Ważne jest, aby wypełnienie odbyło się jednorodnie, to znaczy nie powinno być bąbelków.

Po ustawianiu aparatu na 2 minuty, aby komórki mogły wytrącić w tle, a jej wizualizacja i liczenie są łatwiejsze.

Po zamontowaniu czasu odpoczynku na światło mikroskopu świetlnego do obserwacji. Najpierw koncentruje się z obiektywem 10x, a jeśli to konieczne, jest przekazywany na 40x.

Może ci służyć: Gap Anion

Aby poprawić wizualizację, światło mikroskopowe jest zmniejszone. Aby to zrobić, skraplacz jest obniżony, a przepona nieco zamyka.

Konto

W przypadku relacji białych krwinek lub leukocytów należy policzyć całą powierzchnię czterech średnich kwadratów narożników i centralny kwadrat każdego retikulum.

Liczba zaczyna się na kwadracie lewego górnego rogu. Zaczyna się od pierwszego kwadratu pierwszego rzędu, to znaczy od lewej do prawej, aby osiągnąć przeciwny koniec.

Tam jest obniżony, a wygląd jest zwracany od prawej do lewej, aż do osiągnięcia drugiego końca i tak dalej na komórkach w każdej siatce w postaci zygzaka. 16 siatek każdego średniego kwadratu jest liczone.

Aby uniknąć liczenia komórki dwukrotnie, istnieją zasady na komórkach, które znajdują się na granicy granicznej każdej siatki. Komórki znajdujące się w lewej i górnej linii są zliczane, a te, które znajdują się po prawej i dolnej linii, są ignorowane.

Ręczny licznik komórek powinien być dostępny, aby operator uciska klucz urządzenia tyle razy, jak obserwowanie komórek. Przy użyciu księgowego operatora może liczyć bez potrzeby wyszukiwania w polu mikroskopowym. Na końcu konta zaobserwujesz całkowitą liczbę zliczonych komórek.

Obliczenia

Do obliczeń możesz kontynuować na kilka sposobów. Możesz policzyć pojedynczy retikulum lub oba można policzyć i średnio z obu. W tych dwóch sytuacjach zliczone komórki muszą być pomnożone przez czynnik, który w tym przypadku wynosiłby 40. I tak otrzymuje całkowitą liczbę na mm³.

Ale jeśli dwa siły są zliczone i nie ma średniej, należy go pomnożyć przez inny czynnik, w tym przypadku przez 20.

-Współczynnik mnożenia

Następnie obliczany jest współczynnik mnożenia.

W przypadku obliczeń branych pod uwagę kilka danych, w tym tytuł rozcieńczenia, wysokość komory i powierzchni powiedziano.

Roztwór

Rozcieńczenie stosowane w standardowy sposób wynosi 1:20 dla liczby leukocytów.

Wysokość komory

Wysokość między kamerą a blaszką hematymetryczną wynosi 0,1 mm.

Policzona powierzchnia

Jeśli policzy się 5 kwadratów 1 mm² powierzchnia oznacza to, że całkowity rachunek liczby wynosi 5 mm². Dane te muszą być pomnożone przez wysokość aparatu, aby uzyskać całkowitą objętość powiedzianą. To znaczy 5 mm² x 0,1 mm = 0,5 mm³.

Wzory i obliczenia

W przypadku powiedzianych danych mówi się:

Jeśli przy 0,5 mm³ -Istnieje ° komórek

W 1 mm³ --będzie - x liczba komórek

X komórka N ° = (N ° komórek Caled x 1) /0,5 mm³

Ale należy również wziąć pod uwagę rozwodnienie. Dlatego formuła jest następująca:

(N ° zliczonych komórek x 1) x 20/0,5 mm³

Wreszcie, podsumowując, możesz pomnożyć liczbę komórek zliczonych przez 40. Zatem uzyskuje się wartość leukocytów na mm³.

Może ci służyć: Osmoza: proces, typy, różnice z dyfuzją i przykłady

W przypadku zliczania dwóch siatków, dane danych są zmieniane, że w tym przypadku wyniosłyby 10 kwadratów, to znaczy 10 mm². I całkowity objętość 1 mm3. Formuła pozostanie:

(N ° komórek zliczonych x 1) x 20/1 mm³

Dlatego w tym przypadku współczynnik mnożenia wynosiłby 20.

Błędy

-Jeśli podczas ładowania aparatu jest przekroczony lub przekroczony płynem, wysokość aparatu będzie się różnić. Powoduje to liczenie rzeczywistości. Jeśli spróbujesz usunąć nadmiar za pomocą gazy lub bawełny, reprezentuje to błąd karafalny. To działanie sprawi, że komórki się koncentrują, zwiększając liczbę.

-Jeśli zostanie słabo naładowany, liczba będzie w rzeczywistości.

-W przypadku zamontowania kamery i wypuszczania, nie można już wywierać liczby, ponieważ będzie transmitować błędne wyniki.

-Jeśli przed załadowaniem aparatu rozcieńczenie próbki nie jest dobrze mieszane, istnieje ryzyko błędu odczytu, ponieważ komórki nie będą rozmieszczone jednorodnie. Dlatego będzie mniej lub większe stężenie komórek, w zależności od tego, czy próbka jest pobierana odpowiednio z powierzchni cieczy, czy z dna rurki.  

-Obecność pęcherzyków zmniejsza ilość cieczy, która musi wejść do siatki, zakłócając prawidłową wizualizację i rozkład komórek. Wszystko to znacząco wpływa na wyniki.

-Podczas liczby nie podnoś mikroskopu, dopóki każdy duży kwadrat nie zostanie ukończony, aby uniknąć zgubienia.

-Powodem błędu jest pokłonienie aparatu po zamontowaniu. Dlatego należy dokładnie przesłać płytkę mikroskopową.

Rekomendacje

Jeśli z jakiegoś powodu wykryjesz nieprawidłowość w złożeniu aparatu, najbardziej zaleca się demontaż tego przygotowania, wyczyszczenie aparatu i ponowne złożenie od zera.

Bądź bardzo ostrożny podczas czyszczenia aparatu, aby uniknąć zarysowania siły siły. Z drugiej strony pamiętaj, że lamel hematymetryczny jest delikatny i kruchy. Nieodpowiednia manipulacja może to złamać.

Przed rozpoczęciem liczenia upewnij się, że komórki zostały dobrze rozmieszczone. Nierówny rozkład komórek występuje przez słabą mieszaninę próbki lub rozcieńczenia. Jeśli tak się stanie, montaż musi zostać powtórzony.

Sposobem wiedzy, czy komórki są dobrze rozmieszczone, jest porównanie opisu każdego dużego kwadratu, liczba komórek zliczanych przez każdy kwadrat nie powinien być przesadzona między jednym a drugim.

-Jeśli białe krwinki liczą ponad 50.000 mm³ Wskazane jest powtórzenie konta, czyniąc większe rozcieńczenie.

-Jeśli modyfikuje rozcieńczenie, współczynnik mnożenia musi obliczyć ponownie, ponieważ wpływa to na wzór.

Bibliografia

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Porównanie stężenia nasienia za pomocą aparatu Maklera i kamery Neubauera. Urol esp 2008; 32 (4): 443-445. Dostępne na: Scielo.
2. Kamera Neubauer. (2018, 27 marca). Wikipedia, bezpłatna encyklopedia. Data konsultacji: 04:10, 23 czerwca 2019 z ES.Wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Zastosowanie alternatywnej metody zliczania w komorze Neubauera w celu określenia stężenia pochwy tichomonas. Obrót silnika. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Dostępne na: Researchgate.internet
4. Gómez-Pérez Roald e. Analiza eksperymogramu. Obrót silnika. Wenez. Endokrynol. Metab.  2007; 5 (2): 19-20. Dostępne w: ve.Scielo
5. Praktyczny przewodnik hematologiczny w Bioanalysis School University of Carabobo. Wenezuela.1998