Bulion mocznika Czym jest, podkład, przygotowanie, używa

On Bulion mocznika Jest to płynna pożywka hodowlana, stosowana do wykazania obecności enzymu Ureasa w niektórych mikroorganizmach. Ureasa jest enzymem drobnoustrojowym, który występuje w sposób konstytutywny, to znaczy jest syntetyzowany bez względu na to, że jest podłożem, na którym działa.

Funkcja Ureasy jest związana z rozkładem związków organicznych. Nie wszystkie mikroorganizmy są w stanie syntetyzować ten enzym, dlatego jego określenie w laboratorium pozwala zidentyfikować pewne szczepy bakteryjne, a nawet rozróżnić gatunki tej samej płci.

Istnieją dwa rodzaje testu mocznika: Stuart i Christensen. Różnią się składem i wrażliwością. Pierwszy jest specjalny, aby pokazać dużą ilość ureas wytwarzanych przez gatunki rodzaju białka.

Drugi jest bardziej wrażliwy i może ostatnio wykrywać niewielkie ilości Ureasy przez inne gatunki bakteryjne, takie jak Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter i Mycobacterium.

Bulion mocznika Stuarta składa się z mocznika, chlorku sodu, fosfatu dipotasowego.

Podczas gdy bulion lub uchwyt Christensena składa się z peptonas, chlorku sodu, fosforanu monopotásicznego, glukozy, mocznika, czerwieni fenolowej, wody destylowanej i agar. Ten ostatni tylko wtedy, gdy jest to solidne medium.

Podstawa

Enzym Ureasa hydrolizuje mocznik, tworząc bezwodnik węglowodany, wodę i dwie cząsteczki amoniaku. Związki te reagują na tworzenie produktu końcowego zwanego węglanem amonu.

Bulion moczowy

Bulion mocznika Stuarta jest bardziej buforowany pH 6,8. Dlatego mikroorganizm musi być w stanie utworzyć duże ilości amonu, aby obrócić czerwony fenol. PH musi wzrosnąć powyżej 8.

Dlatego bulion mocznika Stuarta jest selektywny dla gatunków proteusowych, co daje pozytywne wyniki w 24 do 48 godzin inkubacji i nie jest skuteczny dla bakterii, które wytwarzają niewiele ilości ureasa lub które powoli hydrolizują mocznik.

Wynika to z faktu, że gatunki proteusowe są w stanie użyć mocznika jako źródła azotu. Z drugiej strony inne bakterie produkujące Ureasę potrzebują dodatkowego źródła.

Jednak Pérez i in. (2002) ustalili, że bulion mocznika Stuarta był tak skuteczny jak agar mocznika Christensena, aby określić Ureasę w szczepach drożdży szczerości.

Autorzy badania twierdzą, że osiągnęli 100% zbiegiem okoliczności z obiema mediami (Stuart i Christensen), inkubując przez 24 i 48 godzin; Wyjątek, że szczepy, które udało się przekształcić media w silny kolor różowej fucsji, uznał za pozytywny.

To wyjaśnienie jest konieczne, ponieważ Lodder (1970) powiedział, że prawie wszystkim drożdżom udaje się umieścić ramkę mocznika mocznika. Wynika to z faktu, że mogą hydrolizować mocznik w minimalnych ilościach, a do tworzenia amin przez oksydacyjną dekarboksylację powierzchniowych aminokwasów. Nie należy tego interpretować jako pozytywnego.

Bulion lub agar mocznika Christensena

Bulion lub agar mocznika Christensena jest mniej buforowany, będąc w stanie wykryć niewielkie ilości amonu. Ponadto to medium jest wzbogacone o peptonas i glukozę. Te związki powodują, że inne mikroorganizmy wytwarzające Ureasę, które nie rosną w bulionie Stuart.

Podobnie test mocznika Christensena oferuje szybsze wyniki, szczególnie w przypadku Proteusa, będąc w stanie zapewnić silne pozytywne w zaledwie 30 minut jako minimalny czas i do 6 godzin jako maksymalny czas.

Reszta mikroorganizmów produkujących Ureasę udaje się nieznacznie zmienić kolor środowiska po 6 godzinach i mocno po 24, 48, 72 godzinach lub więcej, a nawet niektóre szczepy mogą powodować słabe reakcje po 5 lub 6 dniach.

Interpretacja obu mediów (Stuart i Christensen)

Medium jest pierwotnie żółto-pomarańczowe, a pozytywna reakcja obróci kolor od medium na różową fucsię. Intensywność kolorów jest wprost proporcjonalna do ilości wytwarzanego amonu.

Negatywna reakcja pozostawi oryginalny kolor, z wyjątkiem drożdży, które mogą dać jasnoróżowy z Medium mocznika Christensena.

Przygotowanie

Bulion moczowy

Ważyć niezbędne gramy zgodnie ze wskazaniami domu komercyjnego. Rozpuścić się w najlepiej sterylnej wodzie destylowanej.  Nie używaj ciepła do rozpuszczenia, ponieważ mocznik jest wrażliwy na ciepło.

Aby sterylizować metodę filtracji błony. W tym celu stosuje się filtr millipory z porami o średnicy 0,45 µ. Nie używaj autoklawów. Po filtrowaniu roztworu jest on rozmieszczony w sterylnych rurach. Aby uzyskać wiarygodne wyniki, między 1,5 ml należy przenieść jako minimalną ilość przy 3 ml jako maksymalna ilość na rurkę.

Zachowaj lodówkę i temperament przed użyciem.

Jeśli metoda filtracji nie jest dostępna, medium musi być używane natychmiast, aby uzyskać wiarygodne wyniki.

Innym sposobem na przygotowanie bulionu Stuarta Stuarta jest następujące:

Niektóre domy komercyjne sprzedają medium podstawowe do testu mocznika, nie uwzględniając mocznika.

Kwota wskazana przez dom komercyjny waży. Rozpuszcza się w wodzie destylowanej i sterylizuje w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Pozwól stać trochę, a gdy medium jest ciepłe 100 ml 20% przygotowanego roztworu mocznika i dodaje się filtrowanie przez filtrację.

Jest dystrybuowany w sterylnych probówkach, jak opisano powyżej.

Bulion lub agar mocznika Christensena

-Przygotowanie rozwiązania mocznika

Ważyć 29 grać odwodnionego mocznika i rozpuścić w 100 ml wody destylowanej. Użyj metody filtracji do sterylizacji. Nie autoklaw.

-Agar bazowy mocznika

Rozpuścić 24 grać odwodnioną zasadę w 950 ml wody destylowanej. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Pozostaw, aż osiągnie temperaturę 50 ° C i dodaj mocznik wcześniej przygotowany w sposób aseptyczny.

Wlej od 4 do 5 ml do sterylnych rur i przechyl się, aż się zestalają. Musi być długi szczyt fletu.

To medium można również przygotować w postaci płynnej.

Aplikacje

Test mocznika jest niezwykle skuteczny w odróżnieniu gatunku Proteus od innych gatunków rodziny Enterobacteriaceae, biorąc pod uwagę szybką reakcję, którą zapewnia Proteus.

Jeśli stosuje się skład Christensena, test pomaga odróżnić gatunki od tego samego rodzaju. Na przykład, S. Haemoliticus i s. Warneri sNA Staphylococcus negatywna i beahemolityczna koagulaza, Ale różnią się tym S. Haemoliticus Jest negatywny i S. Warneri To pozytywne mocznik.

Z drugiej strony McNulty z powodzeniem użył 2% bulionu mocznika Christensena, aby zbadać obecność Helicobacter pylori W próbkach biopsji pobranych z błony śluzowej żołądka (region antralny).

Obecność H. pylori Jest to dowodzone pozytywnym testem mocznika. Czas obserwowania wyników jest bezpośrednio proporcjonalny do ilości obecnych mikroorganizmów.

Jak widać, jest to prosta metoda diagnozy Helicobacter pylori W biopsjach żołądka.

Wreszcie, ten test jest również przydatny do odróżnienia gatunków od gatunków Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus i Mycobacteria.

Test mocznika zasiany

Dwie metody wymagają silnego inokulum drobnoustrojów, aby zoptymalizować wyniki. Kolonie bakteryjne są najlepiej pobierane z agaru krwi i drożdży Agar Sabouraud, z wyjątkiem niektórych wyjątków. Inokulum jest emulgowany w środowisku ciekłym.

W przypadku bulionu mocznika Stuarta 37 °. W przypadku drożdży możesz inkubować w 37 ° C lub w temperaturze pokojowej przez 24 do 48 godzin inkubacji.

W przypadku bulionu mocznika Christensena 37 ° C jest inkubowane przez 24 godziny. Jeśli test jest ujemny, można go inkubować do 6 dni. Jeśli test daje dodatni przed 6 rano, wskazuje, że jest to szczep gatunku białka.

W przypadku agaru mocznika Christensena ramka agaru jest silnie zaszczepiona, bez nakłucia. Bulion jest inkuba i interpretuj w ten sam sposób.

QA

Aby przetestować medium, możesz użyć elementów sterujących, takich jak Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 i Salmonella Typhimurium.  Pierwsze dwa muszą dać pozytywne wyniki, a dwa ostatnie wyniki negatywne.

Bibliografia

1. Britania Laboratories. Christensen Media (agar bazowy mocznika). Dostępne na: Britanialab.com