Agar Tsi What Is, Foundation, Preparation, Używa

On TSI Agar o Triple cukrowy agar żelaza jest stałym pożywką hodowlaną, która służy jako test biochemiczny w celu prowadzenia początkowej identyfikacji gramowych pachnili. Opiera się na dowodach.

Jego skład i fundament są bardzo podobne do testu Kigler Hierro, z różnicą, że ta ostatnia zawiera tylko glukozę i laktozę. Z drugiej strony - Jak wskazuje nazwa - potrójny agar żelaza cukrowego zawiera trzy fermentowalne węglowodany: glukoza, laktoza i sacharoza.

Ponadto pożywka TSI ma cztery pochodne białka, które czyni go bardzo pożywnym agarem: ekstrakt z drożdżaku, ekstrakt mięsny, pepton i białko peptonowe. Zawiera także żelazny siarczan amonu, tiosulfinian sodu, chlorek sodu, czerwony fenolowy i agar.

Niezdolność mikroorganizmu w fermentacji glukozy obecnej w środowisku natychmiast wyklucza ją z przynależności do rodziny Enterobacteriaceae. Dlatego ten test jest niezbędny do podjęcia decyzji, która droga identyfikacyjna należy podjąć w celu ustalenia płci i gatunków.

Każde laboratorium decyduje, czy współpracuje z Agarem TSI, czy z Kligler Hierro.

Podstawa

Każdy ze związków wypełnia funkcję w medium.

Chlorek sodu i agar

Chlorek sodu jest niezbędny do utrzymania bilansu osmotycznego medium. Podczas gdy agar zapewnia solidną spójność.

Wskaźnik pH (fenol czerwony)

Przygotowane średnie pH jest zrównoważone przy 7,3, a wskaźnik pH (czerwony fenolowy) zmienia żółty poniżej 6,8. Oznacza to, że niewielkie ilości kwasów wytwarzanych przez fermentację cukrów zmienią czerwony pomarańczowy medium.

Jeśli nie wystąpi fermentacja, nastąpi alkalizacja pożywki z powodu użycia peptones, obracając się z czerwonej pomarańczowej na silny czerwony.

Pochodne białka (ekstrakt drożdży, ekstrakt mięsny, białko peptonowe i peptonowe)

Gdy bakterie metabolizują białka obecne w agarze TSI, powstają aminy, które alkalizują pożywkę (głównie na poziomie ramki), ponieważ reakcja wymaga tlenu. Aminy zmieniają ramkę w silną czerwień.

Ale będzie to zależeć od zdolności bakterii fermentacyjnych lub nie węglowodanów.

Fermentacja węglowodanów (glukoza, laktoza i sacharoza)

Badanie fermentacji cukrów może dać kilka obrazów, a każdy z nich jest interpretowany inaczej. Interpretacja testu dzieli mikroorganizmy na 3 kategorie: fermentory nie -glukozy, fermentory nie -laktozy i fermentory laktozy/sacharozy.

Należy zauważyć, że ilość glukozy w środku jest ograniczona, podczas gdy stężenie laktozy i sacharozy jest 10 razy wyższe.

Bakterie z rodziny Enterobacteriaceae i inne mikroorganizmy fermentujące glukozę zaczną fermentować ten cukier, ponieważ najprostszym węglowodanem jest uzyskanie energii w celu uzyskania energii.

Może ci służyć: Rozwiązanie izotoniczne: elementy, przygotowanie, przykłady

Z drugiej strony, laktoza i sacharoza są złożonymi węglowodanami, które muszą być rozkładane i stać się glukozą, aby mogły wejść do cyklu Embden-Meyerhof.

-Mikroorganizmy nieferyzacyjne

Gdy zaszczepiony mikroorganizm nie jest w stanie fermentować glukozy, znacznie mniej może fermentować inne węglowodany. Dlatego kwasy nie powstają tutaj, ale w ramce występuje tworzenie się aminy z powodu zastosowania peptonów.

W takim przypadku faza staje się silna.

Interpretacja: K / k oznacza alkaliczne stawy / zasadowe lub neutralne tło

Na obrazie znalezionym na początku artykułu patrz obraz rurki d.

Ten wynik wskazuje, że mikroorganizm nie należy do rodziny Enterobacteriaceae.

-Nieferyzacyjne mikroorganizmy laktozy/sacharozy

Jeśli bakterie są w stanie fermentować glukozę, ale nie laktozę ani sacharozę, następują:

Bakterie spożywają całą glukozę obecną po około 6 do 8 godzin, będąc w stanie zakwaszić zarówno ramkę, jak i taco; Oznacza to, że agar całkowicie zmienił żółty. Ale kiedy glukoza jest wyczerpana i uwzględniając niemożność stosowania laktozy i sacharozy, bakterie rozpoczną metabolizm białek.

Ta reakcja wymaga tlenu, więc na powierzchni występuje degradacja peptonas (ramka). Aminy wytworzyły alkleinizują się wiatry strojów żółty do czerwonego. Ta reakcja jest dowodzona po 18 do 24 godzin inkubacji.

Interpretacja: K/A oznacza ramkę alkaliczną i kwasowe taco.

Na obrazie znalezionym na początku artykułu patrz obraz rurki B.

-Fermentary/sacharoza fermentowanie mikroorganizmów

Mikroorganizmy zdolne do fermentacji laktozy i sacharozy mogą oczywiście fermentować glukozę. Po wyczerpaniu minimalnej ilości glukozy obecnej w pożywce, utworzony pirogronian zaczyna metabolizować tworzenie kwasów przez cykl aerobowy Krebsa, a w okresie od 8 do 12 godzin całe podłoże będzie żółte.

Jeśli bakterie są w stanie rozwinąć laktozę lub sacharozę, kwasy będą nadal wytwarzane, a po 18 do 24 godzinach cała rurka -wiązka i taco- będą kontynuowane żółte.

Należy zauważyć, że użycie glukozy wymaga.

Interpretacja: A/ A oznacza tło kwaśne/ kwasowe. Może przedstawić gaz lub nie.

Na obrazie znalezionym na początku artykułu patrz obraz rurki a.

Może ci służyć: cytozyna: struktura, funkcje, właściwości, synteza

Produkcja gazu

Niektóre mikroorganizmy są zdolne do wytwarzania gazu podczas fermentacji cukrów. Gaz jest dowodzony w rurce ze względu na ciśnienie, które wywiera wewnątrz agaru. Ciśnienie powoduje tworzenie bąbelków lub przemieszczenie agaru. Czasami tworzenie gazu może pękać w środowisku.

Ważne jest, aby podczas siewu medium TSI nakłucie odbywa się czysto przez środek agar. Jeśli nakłucie odbiega na ściany rurki, może powodować fałszywe pozytywy w produkcji gazu, ponieważ uniknie błędnie uformowanego kanału.

Produkcja gazu, a także reakcje występujące w stnieniu agarowym, potrzebują tlenu, dlatego zaleca się, aby rurka była pokryta bawełnianą nasadką, a jeśli zastosowano pokrywkę baquelitów, nie należy jej całkowicie dostosowywać.

Produkcja gazu jest zgłaszana jako dodatnia (+) lub ujemna (-).

Tiosiarczan sodu i żelazny siarczan amonu (Produkcja siarkowodoru)

Bakterie zdolne do wytwarzania siarkowodoru (gaz bezbarwny), weź siarkę tiosulfinianu sodu obecnego w pożywce. Po utworzeniu H₂S reaguje z wysokowodnikowym siarczanem amonu, wytwarzając siarczk żelaza (wyraźnie widoczny czarny osad).

H₂S jest zgłaszany jako dodatnia (+) lub ujemna (-).

Na obrazie znalezionym na początku artykułu patrz obraz rurki C.

Przygotowanie

Waż 62,5 gr z pół -smaru agaru żelaza (TSI) odwodniony i rozpuszczany w litrach wody destylowanej.

Gorąco rozpuścić agar. Gotować. Rozłóż 4 ml pożywki w rurkach testowych 13/100 z bawełnianą pokrywką.

Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Wyjmij z autoklawu i odstawić nachylenie. Należy zadbać o to, aby zarówno podstawa, jak i stawa miały tę samą odległość.

Przechowuj w lodówce 2-8 ° C. Niech temperament przed siewem bakteryjnym.

Kolor odwodnionego pożywki to lekki beż, a przygotowane pożywkę jest czerwono-pomarańczowa

Ostateczne pH przygotowanej pożywki wynosi 7,3 ± 0,2.

Aplikacje

Test TSI jest szeroko stosowany na poziomie laboratorium mikrobiologii. Test ten jest niezbędny, aby poprowadzić rodzaj testu, który należy zastosować w celu osiągnięcia identyfikacji rodzaju i gatunku. Twoje dobre wykonanie i interpretacja może oszczędzać materiał i pracę.

Jeśli wynikiem jest TSI K/K, test oksydazy cytochromu daje pozytywne, testy należy zastosować do identyfikacji nieustannych bachilli gramowych, takich jak pseudomonas, alkaliczna, achromobacter, Burkholderia, wśród innych gatunków. Jeśli jest to ujemna oksydaza, jest zorientowana na Acinetobacter, Stenotrofomonas itp.

Może ci służyć: totipotential: historia, cechy i znaczenie

Z drugiej strony, jeśli uzyskano TSI A/A lub K/A, a test oksydazy cytochromu jest ujemny, zmniejszają azotany do azotynów, będziemy pewni, że jest to mikroorganizm należący do Enterobacteriace Family Family Family. W takim przypadku droga identyfikacyjna zostanie zorientowana na określone testy dla tej grupy bakterii.

Z drugiej strony, jeśli uzyskano obraz K/A lub A/A, a test oksydazy cytochromu jest dodatni, dodatkowe testy zostaną skierowane do identyfikacji szczepów fermentacyjnych, które nie należą do rodziny Enterobacteriaceae, takich jak: aeromonas , Plesiomonas, Vibrio i Pasteurella.

TSI z siarczkiem wodoru, ujemna oksydaza, poprowadzi następujące gatunki rodziny Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella lub Salmonella.

TSI z rzadkim lub umiarkowanym siarkowym siarczkiem wodorowym w ramce alkalicznej z tłem alkalicznym i dodatnią oksydazą, poprowadzi testy identyfikacji niezażeniowych producentów bachilli z gram₂S, as Shewanella potrefaciens.

Wreszcie, TSI można wykorzystać do badania produkcji siarczku wodoru w dodatnich pachilli, szczególnie w przypadku podejrzenia Erysipelothrix rhusiopathiae.

Posiany

Medium TSI musi być zaszczepione czystymi kolonami, izolowanymi w uprawach pierwotnych lub selektywnych. Jeśli kolonia jest pobierana z selektywnych środków, które zostały wysiewane próbkami z mieszaną florą, należy zachować ostrożność tylko z powierzchni, ponieważ w dolnej części kolonii mogą być zahamowane opłacalne szczepy w tym medium.

Dlatego uchwyt nigdy nie powinien ostygnąć w selektywnym pożywce, a następnie przyjmować kolonię i zaszczepić medium TSI.

Zasiewane będzie z prostą lub igłą. Kłucie zostanie przeprowadzone, uważając, że przebywa przez środek środka, aż dotrze do dna, a następnie zasiewane jest zaszczepienie powierzchni w kształcie zygzaka. Nie rób dwóch nakłuć.

Inkubuj w 37 ° C w aerobiozie przez 18–24 godzin. Interpretuj w tej chwili, ani wcześniej, ani później.

Ograniczenia

Test TSI należy odczytać między 18 do 24 godzin inkubacji. Czytanie wcześniej może dać fałszywą fermentację A/A. Podczas gdy czytanie po tym czasie może prowadzić do fałszywego negatywnego obrazu nieferyzacyjnego, ze względu.

Bibliografia

1. Britania Laboratories. Agar TSI (Triple Sugar Iron Agar). 2015. Dostępne na: Britanialab.com
2. BD Laboratories. Triple Sugar Iron Agar (agar TSI). 2003. Dostępne na: BD.com