Podkład buforu fosforanowego (PBS), przygotowanie i zastosowania

On Bufor fosforanowy, BPS lub bufor fosforanu soli fizjologicznej Jest to bufor i izotoniczne rozwiązanie, którego funkcją jest utrzymanie pH i presji osmotycznej najbliżej naturalnego (fizjologicznego) środowiska środowiskowego. Akronim PBS średnia sól fizjologiczna buforowana fosforanem.

PH i osmolarność to dwa bardzo ważne aspekty, które należy kontrolować w niektórych protokołach laboratoryjnych. W przypadku pH konieczne jest, aby był kontrolowany, szczególnie w reakcjach biochemicznych, ponieważ mogą one różnić się lub nie wykonywać, jeśli reagenty są w niewłaściwym pH.

Bufor Salino PBS fosforan w dwóch różnych pH. Źródło: Pixinio.com

Podczas gdy kontrola osmolarności jest niezbędna, szczególnie podczas pracy z żywymi komórkami, ponieważ błony plazmatyczne komórek reagują zgodnie ze stężeniem substancji rozpuszczonych, w którym się znajdują.

Jeśli komórki zostaną przeniesione na hipertoniczną pożywkę, odwadnią, ponieważ gradient wody zostanie przetransportowany na bok, gdzie istnieje większe stężenie substancji rozpuszczonych. Jeśli wręcz przeciwnie, komórki są umieszczane w pożywce hipotonicznej, komórki wchłaniają płyn do leżenia.

Dlatego stosuje się bufor PBS dla protokołów laboratoryjnych wymagających utrzymania komórek In vitro, W ten sposób komórki nie zostaną uszkodzone.

PBS składa się z kombinacji soli, takich jak chlorek sodu, fosforan sodu, chlorek potasu i fosforan potasowy. Skład PBS może się różnić w zależności od protokołu.

[TOC]

Podstawa

Zasadniczo funkcją buforu fosforanowego soli fizjologicznego jest utrzymanie stałego fizjologicznego pH obok stężenia elektrolitycznego podobnego do tego wewnątrz organizmu.

W tym środowisku komórki są w stanie pozostać stabilne, ponieważ warunki fizjologiczne symulują jak najwięcej.

Do oryginalnego preparatu PBS można dodać inne konieczne związki bycia, na przykład dodanie EDTA do buforu jest przydatne do mycia czerwonych krwinek w teście niekompatybilności krzyżowej.

EDTA zapobiega ułamku dopełniacza C1 obecnego w surowicy, do podzielenia i udzielania czerwonych krwinek, to znaczy unikanie fałszywych wyników niezgodności. Ponadto EDTA pomaga dysocjacji komórek.

Może ci służyć: drzewo filogenetyczne: typy i ich cechy, przykłady

Przygotowanie

Ilość soli, które należy zważyć w celu opracowania PBS fosforanu soli fizjologicznej, będzie zależeć od ilości wymaganej do przygotowania:

-Roztwór buforowy salino fosforan (PBS 10x)

Dla litra rozwiązania:

Ważyć:

80,6 g NaCl,

2,2 g KCl,

11,5 g na₂HPO₄,

2,0 g KH₂HPO₄

Technika przygotowania

W zlewku umieść ciężkie sole, dodaj wystarczającą ilość wody (80%) i wymieszaj mieszającą płytkę z prętem magnetycznym, aż sole rozpuściły się.

Przygotowanie PBS za pomocą agitującego żelaza z prętem magnetycznym . Źródło: Użytkownik: Ruhrfisch, Wikipedia. com

Filtr, aby usunąć cząstki nieporządne. Użyj filtrów z porów 0,45 µm. Autoklawe sterylice i rozpowszechniają się aseptycznie w laminarnym dzwonku przepływu w szklanych słoikach z pokrywką.

Do roztworu 10x (skoncentrowany) nie dostosowuje pH. Dostosowanie dokonuje się po rozcieńczeniu do stężenia PBS bufora 1x (rozcieńczenie 1:10).

-Bufor fosforanu soli (PBS 1x)

PBS 1x można przygotować bezpośrednio, ważąc odpowiednie ilości każdej soli lub może przygotować rozcieńczenie roztworu matki (1:10) sterylną wodą destylowaną.

-Aby bezpośrednio przygotować litr fosforanu soli PBS 1x żal:

8,06 g NaCl,

0,22 g KCl,

1,15 g na₂HPO₄,

0,20 g KH₂HPO₄

Technika przygotowania

Postępuj zgodnie z wyjaśnieniem w skoncentrowanym roztworze. Następnie pH należy dostosować. Aby to zrobić, zmierz pH i w zależności od wyniku, użyj kwasu (HCL) lub zasady (NaOH), aby obniżyć lub przesłać pH odpowiednio w razie potrzeby, aż do 7,4.

Kwas lub podstawa jest dodawana upuszczenie przez spadek podczas monitorowania wartości pH roztworu za pomocą pH-meter. Filtr, sterylice autoklawowe i w razie potrzeby rozpowszechnia się aseptycznie w rurkach stożkowych lub butelkach.

-Aby przygotować PBS 1x z 10 -krotnego rozwiązania matki:

Zrób rozcieńczenie 1:10. Na przykład, aby przygotować 1 litr PBS 1x, zmierz 100 ml roztworu macierzystego i dodaj 700 ml sterylnej wody destylowanej. Dostosuj pH i uzupełnij ilość wody, aż osiągnie 1000 ml.

Może ci służyć: Wybór kierunkowy: co to jest, definicja, przykłady

Przygotowany bufor PBS jest bezbarwny i przezroczysty.

Codzienne użycie PBS można przechowywać w temperaturze pokojowej, a resztę w lodówce.

.Rozwiązania do ustawienia pH

HCl

Dla 100 ml HCl (kwas solny) do 1 trzonowca.

Zmierz 91 ml wody destylowanej i umieść ją w naczyniu osadowym o pojemności 250 ml.

Zmierz 8,62 ml skoncentrowanego HCl i powoli dodaj go do zlewki zawierającej wodę (nigdy nie do góry nogami). Podejmij odpowiednie pomiary bezpieczeństwa biologicznego podczas obsługi silnych kwasów (substancja wysoce korozyjna).

Wymieszaj przez 5 minut za pomocą mieszającej płyty z magnetycznym prętem w szkle. Przejdź do piłki 100 ml i spłucz na 100 ml z H₂Lub destylowany.

Naoh

Dla 100 ml NaOH (wodorotlenek sodu) 10.

Zmierz 40 ml wody destylowanej i umieść ją w zlewce pojemności 250 ml. Zmierz 40 gr z NaOH i dodaj do wody. Wymieszaj za pomocą płyty mieszającej z magnetycznym paskiem wewnątrz szklanki.

Przejdź do 100 ml augroid piłki i spłucz wodą destylowaną. Przestrzegać standardów biologicznych, ponieważ reakcja ta jest egzotermiczna (uwalnia energię w postaci ciepła).

Jeśli chcesz przygotować inne ilości roztworu fosforanu soli fizjologicznej, możesz zapoznać się z poniższą tabelą:

Źródło: „Wirusowe i ludzkie laboratorium genomiki, UASLP School of Medicine”

Aplikacje

Głównie jest stosowany w laboratoriach biologii komórkowej, immunologii, immunohistochemii, bakteriologii, wirusologii i badaniach.

Idealny jest do prania komórkowego przez wirowanie (czerwone krwinki), monokapy komórkowe umyte w technikach elipsometrii spektroskopowej, w kwantyfikacji biofilmów bakteryjnych, w utrzymaniu upraw komórek dla wirusów, jako roztwór mycia w technice pośredniej immunofluorescencja i techniki charakterystyki przeciwciał monoklonalnych.

Służy również do transportu komórek lub tkanek, jako rozcieńczy do liczenia komórek, przygotowanie enzymów komórkowych (Tripsin), jako rozcieńczenie metody wysuszania biomolekułów i przygotowania innych odczynników.

Może ci służyć: odżywianie heterotrofów: cechy, etapy, typy, przykłady

Z drugiej strony Martin i współpracownicy w 2006 r. Wykazali, że PBS jest przydatny w laboratoriach nauk kryminalistycznych, szczególnie w odzyskiwaniu nasienia z rozmazu dopochwowego lub w odzyskiwaniu komórek dopochwowych rozmazu prącia prącia. W ten sposób można to ustalić, jeśli nastąpił związek seksualny.

Ograniczenia

-Niektóre bufory PBS przynoszą jako konserwatywną substancję zwaną azid sodu. Ten związek może generować substancje wybuchowe, jeśli wchodzi w kontakt z ołowiu lub miedzi. Z tego powodu należy zachować szczególną ostrożność podczas odrzucania tego odczynnika w celu drenażu. Jeśli zostanie odrzucony tą drogą, należy dodać obfitą wodę, aby rozcieńczyć do maksymalnego.

-Bufor fosforanowy nie powinien być dodawany cynku, ponieważ wytrącwa niektóre sole.

-Wangen i współpracownicy w 2018 r. Określili, że stosowanie PBS nie było odpowiednie do mycia pierwotnej ostrej białaczki szpikowej (AML) ekstrahowanej z krwi obwodowej, ponieważ wiele komórek jest traconych przez lizę, z dużym zmniejszeniem materiału białkowego materiału białkowego.

Dlatego ustalili, że pierwotne komórki AML nie należy myć PBS po magazynowaniu w ciekłym azocie.

Bibliografia

1. Coll J. (1993). Techniki diagnostyczne w wirologii. Ed Díaz de Santos. 360 pg
2. Rodríguez M, Ortiz T. Hodowlę komórkową. Zmiana medium. Department of Normal and Patological Histology University of Seville. Dostępne w personelu.nas.Jest
3. Przygotowanie soli fizjologicznej (PBS) buforowanej fosforan. (2008). Standardowe procedury operacyjne (SOP) Wirusowe i ludzkie genomika Laboratorium Medicine UASLP. Dostępne na: genomiki.UASLP.MX
4. „Buff fosforanu soli fizjologicznej." Wikipedia, bezpłatna encyklopedia. Kwiecień 2019, 19:36 UTC. Kwiecień 2019, 02:57 jest.Wikipedia.org.
5. Pietrasanta L, von-bilderling C.Tematy w biofizyce molekularnej. Dostępne na: Użytkownicy.Df.UBA.ar
6. Rediar. podręcznik. PBS+EDTA. Dostępne na: Felsan.com.ar
7. Martin NC, Pirie AA, Ford LV, Callaghan CL, McTurbate K, Lucy D, Scrimger DG. Zastosowanie soli fizjologicznej buforowanej fosforanem do odzyskiwania komórek i plemników z wymazów. SCI Justice. 2006; 46 (3): 179-84. Dostępne w: NCBI.NLM.Nih.Gov
8. Wangen R, Aasebø E, Trereni A, i in. Metoda konserwacji i fosforanowe buforowane mycie soli fizjologicznej apfect ostrego białaczki szpikowej. Int j mol sci. 2018; 19 (1): 296. Dostępne w: NCBI.NLM.Nih.Gov
9. Martínez R, Gragera R.  (2008). Teoretyczne i praktyczne podstawy histochemii. Najwyższa Rada Badań Naukowych. Madryt. Dostępne na: książki.Google.współ.Iść