Thayer Martin Agar What Is, Foundation, przygotowanie, używa

On Thayer Martin Agar Jest to wysoce pożywne i selektywne solidne medium do izolacji Neisseria meningitidis i Neisseria gonorrhoeae; zarówno znane jako znaczenie patogenne lub kliniczne.

Jedną z najważniejszych specjalnych cech przedstawionych przez Agar Thayer Martin jest jego wysoka zawartość w pożywnych suplementach. Ta właściwość jest niezbędna, ponieważ neisseries są bardzo wymagającymi mikroorganizmami z odżywczego punktu widzenia i dlatego nie rośnie we wspólnych mediach.

Z drugiej strony, ponieważ te mikroorganizmy występują zwykle w obszarach niesterycznych, konieczne jest dodanie inhibitorów, które zapobiegają rozwojowi towarzyszącej flory, bez wpływu na rozwój rodzaju Neisseria.

Ten agar składa się z agaru podstawowego GC, hemoglobiny, dodatkowych suplementów diety i kompleksu substancji hamujących (antybiotyki i przeciwgrzybicze). Domy komercyjne sprzedają każdy z suplementów osobno.

Próbka do zasilania w tym medium będzie zależeć od poszukiwania mikroorganizmu. Dla Neisseria Gonorrhoeae Idealne próbki to wydzieliny pochwy i cewki moczowej. Podczas gdy Neisseria meningitidis Najczęściej używanymi próbkami są CSF, wysięki gardła i nosowo -gardła.

Podstawa

Neisseries to mikroorganizmy katalogowane jako denerwujące, a zatem ich izolacja jest trudna.  Dlatego Thayer Martín jest złożonym medium, a każdy z jego elementów wypełnia funkcję wyjaśnioną poniżej:

Agar bazowy GC

Agar GC zawiera białko peptonowe, skrobię kukurydzianą, chlorek sodu, fosfat dipotasowy. Jego składniki zapewniają podstawowe składniki odżywcze do rozwoju drobnoustrojów, zneutralizuj toksyczne kwasy tłuszczowe, przyczyniają się do utrzymania równowagi osmotycznej, zdefiniowania pH i zapewnienia solidnej spójności środowiska.

Hemoglobina

Hemoglobina dostarcza czynników V i X (odpowiednio nikotynamid adenina dinukleotyd NAD i Hemina). Dlatego w tym pożywce wyhoduj również gatunki z Haemophilus. Hemoglobinę można uzyskać na rynku odwodnienie lub dodać świeżo defibrybowaną bydlę do środowiska.

Suplement wzbogacania

Z drugiej strony, podłoże thayer-MARTIN należy również dodać suplement wzbogacania, ponieważ składniki odżywcze, które zawiera bazowy agar, nie są wystarczające dla wymagań rodzaju Neisseria.

Najczęściej stosowany suplement wzbogacania nazywa się Isavalex. Zawiera glutaminę, adeninę, NAD, kokarboksylazę, guaninę, azotan żelazowy, benzoiczne p-aminokwas, witamina B12, tiamina i glukoza. Wszystkie te związki są niezbędne do dobrego rozwoju patogennych neisseries.

Inhibitory

Ponieważ są to wysoce pożywne inhibitory średnie, które zapobiegają wzrostowi mikroorganizmów ze zwykłej flory tego obszaru, a tym samym sprzyjają izolacji rodzaju Neisseria.

Kompleks inhibitora składa się z wankomycyny, kolistyny ​​i nistatyny. Wankomycyna hamuje wzrost bakterii Gram dodatnich, kolistyna zapobiega rozwojowi bakterii gramowych, takich jak pseudomonas i niektóre saprofityczne neisserie, a nistatyna działa na drożdże jako drożdże, takie jak drożdże, takie jak drożdże, takie jak drożdże, takie jak drożdże, takie jak drożdże, jak drożdżki Candida albicans.

Jednak wówczas agar Thayer Martin został zmodyfikowany; Zmiany polegały na dodaniu trimetoprimu, wzrostu ilości agaru i agregatu dodatkowego glukozy. Zmiany te znacznie poprawiły odzyskanie gatunku Neisseria gonorrhoeae.

Należy zauważyć, że trimetoprim hamuje wzrost gatunku białka i jego wynikające z niego tworzenie roju. W tym sensie antybiotyki to te, które zapewniają selektywny charakter średniego Martina.

Przygotowanie

Thayer Martin Oryginalny agar

-Agar GC

Ważę 8,2 GR odwodnionej pożywki GC i zawiesaj przy 100 ml. Wymieszaj i gotuj przez 1 minutę z częstym pobudzeniem, aby rozpuścić w całości. Sterylizuj mieszaninę w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

-2% hemoglobina

Zawiesić 2 GR odwodnionej hemoglobiny w 2 lub 3 ml gorącej wody destylowanej, tworząc jednolitą mieszaninę. Stopniowo dodaj wodę, aby uzupełnić objętość 100 ml. Zawieszenie musi być jednorodne przed sterylizacją.

Sterylizuj w autoklawie przez 15 minut.

-Suplement wzbogacania

Odtworzają fiolkę komercyjną z rozcieńczeniem dostarczonym przez ten sam dom komercyjny. Dobrze wymieszaj. Ilość rozszerzenia do użycia zostanie określona w instrukcji zestawu.

-Suplement hamowania v.C.N (wankomycyna, kolistyna, nistatyna)

Odtworzają fiolkę z rozcieńczalnikiem dostarczonym przez dom komercyjny. Dobrze wymieszaj. Ilość rozszerzenia do użycia zostanie określona w instrukcji zestawu.

-Przygotowany

Na każde 100 ml agaru GC postępuj w następujący sposób:

Gdy agar GC opuszcza autoklaw, pozwól ostudzić do przybliżonej temperatury 50 ° C i dodaj 2 ml przygotowanego roztworu hemoglobiny, 2 ml suplementu wzbogacania (izoobalex lub bralex) i 2 ml suplementu hamowania. Wymieszaj i podawaj w sterylnych płytach Petriego.

Upowszechnij i zapisz w lodówce do użycia.

Kolor przygotowanego pożywki to wiśniowocze. Ostateczne pH pożywki wynosi 7,2 ± 0,2

THAYER MARTIN AGARIFOMOWANY

Ważę 8,2 GR odwodnionej pożywki GC i zawiesaj przy 100 ml. Dodaj 1 GR wody agarowej i dodaj 0,3 G. glukozy. Wymieszaj i gotuj przez 1 minutę z częstym pobudzeniem, aby rozpuścić w całości. Sterylizuj mieszaninę w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

Przygotuj hemoglobinę i suplement wzbogacania, jak opisano powyżej.

Zastosowanym suplementem hamowania jest v.C.N.T (wankomycyna, kolistyna, nistatyna, trimetoprim).

-Przygotowany

Postępuj w sposób opisany dla oryginalnego agaru Thayera Martina.

Używać

Agar thayer Martin powinien być temperamentowy przed siewem próbek. Powszechnie stosowanymi próbkami są wysięki gardła, wysięki nosa, pochwy, cewki moczowe i/lub odbytnicy oraz CSF.

Użyj świeżo pobranych próbek i rób silne inokulum o agarie. Próbki są wysiewane bezpośrednio z powodu rozładowania materiału, a następnie wyróżniają się z powodu wyczerpania na powierzchni.

Płytki inkubuje się w 35-37 ° C przez 24 do 48 godzin w dzbanku mikroaerofilii (5% CO₂). Po czasie inkubacji płytki są badane w poszukiwaniu małych kolonii, szarości, a czasem śluzu.

Wykonaj Gram i potwierdzające testy biochemiczne do podejrzanych kolonii.

QA

Aby wykonać kontrolę jakości, Thayer Martin może użyć następujących szczepów drobnoustrojów.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 i Neisseria meningitidis ATCC 13090; W obu szczepach oczekuje się zadowalającego rozwoju.

Należy również uwzględnić następujące szczepy: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 i Candida albicans ATCC 10231. We wszystkich z nich oczekiwano całkowitego lub częściowego hamowania w tym medium.

Ograniczenia

-Należy pamiętać, że w środkowych bakteriach odpornych na stosowane inhibitory mogą rosnąć.

-Są szczepy Neisseria Gonorrhoeae które mogą być wrażliwe na stężenie zastosowanej wankomycyny. Z tego powodu zaleca się stosowanie równoległego agaru czekoladowego uzupełnionego izovalex, ale bez inhibitorów.

-Istnieją szczepy drożdżowe oporne na niistatynę, które mogą rosnąć w tym pożywce i zakłócać izolację patogennych neisseries, zwłaszcza gonokoków.

Bibliografia

1. Britania Laboratories. THAYER MARTIN MEDIA MODIFILAT. Dostępne na: Britanialab.com