Agar krwi

Podejście krwi. Z licencją

Co to jest agar krwi?

On Agar krwi Jest to wzbogacone solidne pożywkę hodowlaną, stosowaną do odzyskiwania i rozwoju szerokiej gamy mikroorganizmów z próbek klinicznych lub subiektywnych.

Ta pożywka hodowlana składa się zasadniczo z wzbogaconego agaru bazowego i 5% krwi owiec. Baza agarowa może się różnić w zależności od potrzeb, ale głównie będzie składać między innymi peptonas, aminokwasy, witaminy, ekstrakt mięsny, chlorku sodu, agarze. Jeśli chodzi o krew, czasami stosuje się ludzką krew.

Zbiór krwi można przygotować w laboratorium lub już można ją kupić od firm, które są na to poświęcone. Przygotowanie tego medium jest bardzo delikatne, każda nieostrożność w jego opracowaniu spowoduje zanieczyszczoną działkę.

Dlatego należy podjąć wszelkie możliwe środki ostrożności, a ostatecznie wykonać kontrolę jakości inkubującą 37 ° C 1 płytkę na 100, które są przygotowane.

Podstawa

Staphylococcus aureus uprawiany w agarze krwi. Źródło: Nathan czyta o Flickr Nathan R. Na Twitterze Wikimedia Commons

Agar krwi jest wzbogaconym, różnicowym i nieselektywnym pożywką. 

• Jest to wzbogacone medium, ponieważ przenosi się jako główny dodatek 5-10% krwi na bazie agarowej. Oba związki zawierają wiele składników odżywczych, które umożliwiają uprawianie w nim większości uprawnych bakterii.
• Ten wzrost występuje bez ograniczeń, więc nie jest selektywny. Jeśli jednak dodano związki, które zapobiegają wzrostowi niektórych mikroorganizmów i faworyzowanie innych, staje się selektywne. Na przykład, jeśli dodano niektóre rodzaje antybiotyków lub przeciwgrzybiczy.
• Jest zróżnicowany, ponieważ pozwala na rozróżnienie 3 rodzajów bakterii: beta-hemolityczny, alfa-hemolityczny i gamma-hemolityczny.
• Beta-hemolityka to te, które mają zdolność do Lisar lub wypełnienia. Przykłady bakterii ß-hemolitycznych są Streptococcus pyogenes I Streptococcus agalactiae.
• Alfa-hemolityczna to te, które wykonują częściową hemolizę, w której hemoglobina jest utleniona do metemoglobiny, generując zielonkawe zabarwienie wokół kolonii. Zjawisko to jest znane jako hemoliza α lub α-hemolizy, a bakterie klasyfikuje się jako α-hemolity. Przykład bakterii α-hemolitycznych są Streptococcus pneumoniae I Paciorkowiec z grupy Viridans.
• Bakterie gamma-hemolityczne lub nie hemolityczne rosną nad agarem bez generowania zmian w IT, efekt znany jako hemoliza γ, a mikroorganizm są γ-hemolityczne. Przykład bakterii γ-hemolitycznych: niektóre szczepy Paciorkowiec grupy D (Streptococcus bovis i enterococcus faecalis).

Aplikacje

• To pożywkę hodowlaną jest jednym z najczęściej stosowanych w laboratorium mikrobiologii. Wśród mikroorganizmów zdolnych do wzrostu w tym pożywce są: ścisłe, opcjonalne, mikroaerofilowe, beztlenowe, pozytywne lub gramowe lub gramowe, bakterie szybkiego wzrostu lub powolny wzrost lub powolny wzrost lub powolny wzrost.
• Niektóre wymagające lub irytujące bakterie również rosną z odżywczego punktu widzenia, a także grzybów i drożdży. Jest przydatny do subiektywnych lub reaktywujących szczepów, które są metabolicznie bardzo słabe.

Może ci służyć: Cyclopentanoperhydropenantreno: Struktura i znaczenie

Jednak wybór agencji krwi i podstawy będzie się różnić w zależności od mikroorganizmu, który może się odzyskać, i zastosowanie, które zostanie podane do płyty (uprawa lub antybiogram).

Wybór grupy krwi

Krew może być z jagnięcy, królika, konia lub człowieka.

Najbardziej zalecana jest krew jagnięcych, z wyjątkiem niektórych wyjątków. Na przykład, aby izolować gatunki Haemophilus, gdzie zalecaną krew jest koń lub królika, ponieważ krew jagnięcy ma enzymy, które hamują czynnik V.

Najmniej zalecany jest człowiek, chociaż jest najczęściej używany, być może dlatego, że jest najłatwiejszy do uzyskania. 

Krew musi być defibryzowana, uzyskana bez dodatku i od zdrowych zwierząt. W przypadku użycia ludzkiej krwi należy pamiętać o kilku czynnikach:

• Jeśli krew pochodzi od osób, które doznały infekcji bakteryjnych, będą miały określone przeciwciała. W tych warunkach prawdopodobne jest, że wzrost niektórych bakterii zostanie zahamowany.
• W przypadku uzyskania z banku krwi zawiera cytrynian i możliwe jest, że niektóre bakterie nie rozwijają się w jego obecności.
• Jeśli krew pochodzi od pacjentów przyjmujących antybiotyki, wzrost podatnych bakterii można hamować.
• A jeśli krew pochodzi od osoby z cukrzycą, nadmiar glukozy zakłóca odpowiednio rozwijające się wzorce hemolizy.

Wybór stawki podstawowej

Agar podstawowy stosowany do przygotowania agaru krwi może być bardzo szeroki. Wśród nich są: Agar składający się z odżywczych, wlew serca, soja z tryptyk, Müeller Hinton, Thayer Martin, Columbia Agar, Brucella Agar, Campylobacter Agar itp.

Zastosowania agaru krwi zgodnie z podkładem podstawowym używanym do przygotowania

Agar składników odżywczych

Ta baza jest najmniej używana, ponieważ będą rosły głównie bakterie nie wyświetlane, takie jak bachilli jelitowe, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, pośród innych. Nie zaleca się izolowania Paciorkowiec.

Wlew serca (BHI)

Jest to jeden z najczęściej używanych jako podstawa, ponieważ ma niezbędne składniki odżywcze do wzrostu większości bakterii, w tym Streptococcus sp i inne wymagające bakterie. Chociaż nie jest właściwe obserwowanie wzorców hemolizy.

Z tą podstawą stosuje się krew jagnięciny.

Możesz także przygotować warianty agaru krwi, w których dodawane są inne związki w celu izolacji niektórych mikroorganizmów. Na przykład serce w infuzji uzupełnione krew królików, cystynę i glukozę, służy izolowaniu Francisella tularensis.

Podczas gdy w Cistinie telurito warto izolować Corynebacterium Diphteriae. Można użyć krwi ludzkiej lub jagnięciny.

Może ci służyć: potencjał biotyczny

Z pierwszą, beta-trimoliza będzie postrzegana jako wąska halo, podczas gdy z drugim halo będzie znacznie szersze.

Ta podstawa, wraz z bakitraciną, skrobią kukurydzianą, krew konną i innymi suplementami wzbogacania (ISOVALEX), jest stosowana do izolacji płciowej Haemophilus sp Z próbek oddechowych.

Jeśli dodano kombinację chloramfenikolu-gentamycyny lub antybiotyków z penicyliną z krwią koni, służy do izolacji wymagających grzybów patogennych, nawet przy wyższej wydajności agaru glukozy w Sabouraud glukozy. Szczególnie jest przydatny w oderwaniu Histoplasma capsulatum.

Agar sojowy tryptyty

Ta podstawa jest najbardziej zalecana do lepszego obserwowania wzorca hemolizy i realizacji testów diagnostycznych, takich jak opto -rorner i podatki od akumulatora. Jest to klasyczny agar krwi używany przez rutynę.

Dzięki tej bazie możesz również przygotować specjalny agar krwi Corynebacterium Diphteriae, Z Telurito Cistiną I Krew jagnięce.

Połączenie tej krwi agarowej, więcej kanamycyny-wankomycyny, jest idealna do wzrostu beztlenowego, szczególnie do wzrostu beztlenowego Bacteroides sp.

Müeller Hinton Agar

Ta podstawa suplementowana przez krew stosuje się do wykonania antybiogramu wymagających mikroorganizmów, takich jak Streptococcus sp. Jest również przydatny do izolowania bakterii, takich jak Legionel Pneumophila.

Thayer Martin Agar

To medium jest idealne jako podstawa agaru krwi, gdy podejrzenie rodzaju Neisseria, zwłaszcza Neisseria meningitidis, jeśli się uwzględni N. Gonorrhoeae Nie rośnie w agarze krwi. Służy również do przeprowadzania testów podatności na Neisseria meningitidis.

Agar Columbia

Ta podstawa jest doskonała do siewu próbek biopsji żołądka w poszukiwaniu Helicobacter pylori.

Pożyód przygotowuje 7% defibrybowanej krwi jagnięce z antybiotykami (wankomycyna, trimetoprim, amfoterycyna B i cefsulodina) w celu ograniczenia wzrostu innych rodzajów bakterii, które mogą być obecne.

Ta sama baza uzupełniona krwią ludzką lub jagnięciny, Nalidíxico i kwas kolistinowy jest przydatna do izolowania Gardnerella Vaginalis. Idealnie jest również ocena podatności przeciwdrobnoustrojowej na antybiotyki tego samego mikroorganizmu.

Ponadto służy do przygotowania agaru krwi do uprawy beztlenowej, dodając aminoglikozydy i wankomycynę. Ta podstawa pozwala nam prawidłowo obserwować wzorce hemolizy.

Agar Brucella

Ta medium stosowana jako baza agencji krwi, wraz z dodaniem witaminy K, jest idealne do uprawy bakterii beztlenowych. W takim przypadku zaleca się stosowanie krwi jagnięcych.

Może ci służyć: oddychanie skóry: charakterystyka i przykłady zwierząt

Campylobacter Agar

Agar Campylobacter uzupełniony 5% krwi RAM i 5 antybiotykami (cefalotyna, amfoterycyna B, trimetoprim Campylobacter Jejuni W próbkach kału.

Przygotowanie

Każdy dom komercyjny prowadzi na odwrót opakowania wskazania, aby przygotować litr medium kulturowego. Według wybranego agaru bazowego można wykonać odpowiednie obliczenia w celu przygotowania pożądanej kwoty.

Ważyć i rozpuścić

Agar podstawowy jest odwodniony (w pyle), dlatego należy go rozpuścić w wodzie destylowanej do pH 7,3.

Ilość wskazana przez wybrany agar podstawowy jest ważony i rozpuszczany w odpowiedniej ilości wody w usterce, a następnie ogrzewa się ono na umiarkowanym cieple i miesza się z ruchami obrotowymi, aż cały kurz.

Sterylizować

Po rozpuszczeniu sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 20 minut.

Agregat krwi

Po wychodzeniu z autoklawem Fixola zostanie schłodzona, aż temperatura wahnie się od 40 do 50 ° C. Jest to temperatura, która wspiera ludzką skórę, a jednocześnie agar nie zestalił.

Aby to zrobić, fixola jest dotknięta ręką, a jeśli ciepło jest tolerowane, jest to idealna temperatura do dodania odpowiadającej krwi defibryzowanej (50 ml na litr agaru). Wymieszaj do homogenizacji.

Przejście agregatu krwi jest kluczowe, ponieważ jeśli odbywa się to, gdy pożywka jest bardzo gorąca, czerwone krwinki pękną, a pożywka nie będzie służyć do obserwowania hemolizy.

Jeśli zostanie dodany zbyt zimny, zostaną utworzone grudki, a powierzchnia medium nie będzie gładka, aby mieć prawidłowo prążkowanie.

Wlać do płyt Petriego

Podawać w sterylnych płytkach Petriego natychmiast po homogenizacji krwi. Na każdej płycie Petriego wylewa się około 20 ml. Ta procedura jest wykonywana w laminarnym dzwonku przepływowym lub w pobliżu zapalniczki.

W momencie serwowania krwi na płytkach Petriego pęcherzyki powietrza nie należy pozostawić na powierzchni płytki nazębnej. Jeśli tak się stanie, płomień zapalniczki Bunsena jest szybko przekazywany na płycie, aby.

Płytki mogą się zestalić i są przechowywane w lodówce (2-8 ° C) odwrócone. Przed użyciem płytek z agarem we krwi muszą one temperować, aby móc sieać.

Przygotowane płyty mają przybliżony czas trwania 1 tygodnia.

Bibliografia

1. Bayona, m. Warunki mikrobiologiczne do uprawy Helicobacter pylori. Obrót silnika. Kapusta. Gastroenterol. 
2. Forbes, B ,, Sahm, D., Weissfeld, a. Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. Pan -american Editorial S.DO.