Agar czekoladowy

Bakterie Yersinia pestis na tablicy czekoladowej. Źródło: Departament Zdrowia i Opieki Społecznej, Wikimedia Commons

Co to jest agar czekoladowy?

On Agar czekoladowy Jest to środek solidnej, wzbogaconej, nieselektywnej i niefronowej kultury. Jest stosowany głównie do izolacji wymagających mikroorganizmów od wartości odżywczej, chociaż każdy rodzaj bakterii może się w nim rozwijać.

Dlatego jego użyteczność wzrasta, szczególnie w próbkach próbkowania, które są zwykle sterylne, takie jak płyn CSF i staw. Chociaż jest również zawarty w pożywce wybranej do sadzenia próbek polimikrobiowych, ale w tych przypadkach konieczne jest dodanie antybiotyków, które hamują jednoczesną florę.

To medium ma charakterystyczny brązowy kolor bardzo podobny do czekolady, stąd jego nazwa. Przygotowanie jest bardzo podobne do preparatu agaru krwi, tylko w tym przypadku krew musi być podgrzana, aby czerwone krwinki pękły.

Jego przygotowanie, podobnie jak agar krwi, jest bardzo delikatny, ponieważ jest łatwo zanieczyszczenia. Dlatego wiele laboratoriów woli zdobyć to medium już przygotowane przez domy komercyjne, które gwarantują ich jakość.

Podstawa

Składa się z podstawy agaru i podgrzewanej krwią. Hemoliza czerwonych krwinek zapewnia średni czynnik X (Hemina) i czynnik V (NAD), niezbędny do wzrostu niektórych mikroorganizmów, takich jak płeć Haemophilus. Jest również bardzo przydatne do izolowania Neisserias sp.

Podobnie jak agar krwi, różne media mogą być używane jako agencja podstawowa, w zależności od potrzeby. Wśród użytych mediów są infuzja mózgowe serce i kruszenie soi, chociaż najbardziej zalecane są Columbia Agar, Müeller Hinton, GC Agar i Thayer Martin Agar.

Może ci służyć: prosta dyfuzja: proces i przykłady

Niektóre warianty agarów czekoladowych zawierają wzbogacony suplement, dostępny w handlu, zwany Isovalex lub Polyvitex.

Te suplementy zawierają witaminę B₁₂, L-glutamina, adenina, chlorowodorek guaniny, kwas p-aminobenzoesowy, dinukleotyd adeniny nikotynamidu (NAD), pirofosforan tiaminy, azotan żelazowy, chlorowodorku tiaminy, chlorowodorku cysteiny, chlorowodorku cysteiny.

Ważne jest, aby podkreślić, że agar czekoladowy jest bardziej wzbogacony niż agar krwi, ale nie pozwala na wzory hemolizy.

Aplikacje

• Agar czekoladowy z agarem Columbia: Zawiera trzustkę kazeinę i serce, trawiony mięs. Ponadto jest bogaty w witaminy, minerały i niezbędne aminokwasy. Ta podstawa z podgrzewaną krwią jest idealna do izolacji bakterii gatunku Neisseria. Z drugiej strony, jeśli dodano suplement do Brucella, Wspomniany mikroorganizm można izolować. Wyniki są poprawiane za pomocą krwi konnej.
• Agar czekoladowy z agarem bazowym GC (dla gonococci): Zawiera peptones, skrobię kukurydzianą, bufory monobazowe i dibasowe, chlorek sodu i agar. Większość skierowanych na rynku prezentacji czekoladowych jest wyposażona w tę podstawę i nie zawiera podgrzewanej krwi, ale syntetyczna mieszanina heminy i chemiczny suplement czynników wzrostu, witamin, minerałów, aminokwasów, czynnika V i glukozy.
• Agar czekoladowy przygotowany z Müeller Hinton Agar: Służy do wykonania testu podatności na środki przeciwdrobnoustrojowe wymagających mikroorganizmów, takich jak Streptococcus pneumoniae, Używając 5% podgrzewanej krwi pamięci RAM. Służy również do pierwotnej izolacji Neisseries I Haemophilus, ale w konkretnym przypadku izolacji Haemophilus Preferowane jest użycie krwi konnej, ponieważ jest bogata w czynnik X i V. Z drugiej strony, jeśli sadzona próbka pochodzi z obszaru niesterycznego, zaleca się dodanie antybiotyków w celu zahamowania normalnej flory tego obszaru. Przykład: W przypadku próbek oddechowych, w których podejrzewa się obecność bakterii płciowych Haemophilus Bausitracin służy do hamowania wzrostu Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus I Neisseries saprofity. 
• Agar czekoladowy z thayer Martin Agar: Istotowanie jest wyjątkowe Neisseria gonorrhoeae. Musi zawierać antybiotyki, aby zahamować towarzyszącą florę. Krew jagnięce jest używana.

Może ci służyć: flora i fauna Zacatecas: bardziej reprezentatywne gatunki

Przygotowanie

Należy zobaczyć wskazania do przygotowania bazowego agaru. Ogólnie rzecz biorąc, opisują, ile należy ważyć, aby przygotować litr medium kultury. W laboratorium możesz przygotować niezbędną dokładną kwotę, która może być mniej lub mniejsza niż litr.

Obliczenia

Zasada trzech ma na celu obliczenie, ile musisz ważyć, aby przygotować pożądany objętość. Przykład:

Jeśli dla 1 litra konieczne jest ważenie 40 gr, a laboratorium wymaga 800 ml, mówi się:

1000 ml -40 gr

800 ml - x

Formuła będzie następująca:

X = 32 gr (ilość pomimo 800 ml).

Ważyć i rozpuścić

Niezbędna kwota jest ważona i umieszczana w feloli z wodą.

Podgrzewa się nad umiarkowanym ciepłem i jest delikatnie mieszany z ruchami obrotowymi, aż odwodniona pożywka całkowicie się rozpuści, pozwalając mu gotować przez 1 minutę.

Sterylizować

Fixola jest wprowadzana do autoklawu w celu sterylizacji pożywki w 121 ° C przez 20 minut.

Agregat krwi

Po wychodzeniu z autoklawem może pozostać, aż temperatura pożywki wynosi około 56 do 70 ° C, aby umieścić krew i wymieszać, aż pożywka skróci brązowy kolor.

Jeśli zostaną dodane suplementy, nadszedł czas, aby to zrobić. Następnie wymieszaj i podawaj 20 ml do każdej sterylnej płyty Petriego.

Całą procedurę należy wykonać w laminarnym dzwonku przepływowym lub wokół zapalniczki Bunsena. Odstawić, dopóki się nie zestalili i oszczędzają w odwróconym stylu w lodówce.

Inny sposób na przygotowanie agaru czekoladowego bez użycia krwi

Podstawa podstawowa jest przygotowywana jak opisano powyżej, odwodniona hemoglobina uzyskana na rynku i sterylizowana w autoklawie rozpuszczana jest w autoklawie.

Może ci służyć: Hemoolinfa

Oba roztwory mogą ostygnąć w 50 ° C, suplement jest połączony i dodawany. Wymieszaj w warunkach aseptycznych, a następnie podawaj w sterylnych płytkach Petriego.

QA

Ważne jest, aby krew umieszczała się w wskazanej temperaturze, ponieważ jest idealna do lizaru czerwonych krwinek, a jednocześnie utrzymanie czynnika V, który jest termiczny.

Nie powinny być bąbelkami na powierzchni agaru. Z każdej partii 100 płyt jedna lub dwie płytki należy inkubować w kuchence w 37 ° C przez 24 godziny, aby sprawdzić jej sterylność.

Aby uzyskać lepsze wyniki, agar czekoladowy musi być używany wkrótce po jego przygotowaniu.

W laboratorium należy przyjmować kontrole odkształceń bakteryjnych w celu oceny skuteczności środowiska świeżo przygotowanego na rozwój głównych wymagających mikroorganizmów o znaczeniu klinicznym.

Bibliografia

1. Garcia, str., Ściany, f., Fernández del Barrio, m. Praktyczna mikrobiologia kliniczna. Uniwersytet Cadiz. Usługa publikacji UCA.
2. Agar czekoladowy. Odzyskane z.Wikipedia.org.