Sabouraud Agar What Is, Foundation, Preparation, Używa

On Sabouraud Agar, Znany również jako agar Sabouraud Dekstrose, jest to solidna pożywka hodowlana, szczególnie wzbogacona w izolacji i rozwoju grzybów, takich jak drożdże, formy i dermatofity.

Dlatego nie można brakować w tym medium w laboratorium mikrobiologii w celu zbadania obecności grzybów patogennych lub oportunistycznych, czyli próbek klinicznych lub nieklinicznych. Jest również idealny do wzrostu bakterii nitkowatych, takich jak Streptomices i Nocardias. Jego zastosowanie jest bardzo szerokie, ponieważ może być stosowane w mikologii ludzkiej, zwierząt, warzyw i przemysłowych.

DO. Sabouraud Agar bez Sow. B. Agar Sabouraud sadzony z drożdżami. Źródło: Zdjęcia wykonane przez autora MSC. Marielsa Gil

To medium zostało utworzone w 1896 roku przez wybitnego dermatologa Raimond Sabouraud, który stał się specjalistą uznanym na całym świecie w zaburzeniach skóry głowy, głównie spowodowanej przez dermatofity.

Jego stworzenie było tak ważne, że było używane od tego czasu i jest utrzymywane dzisiaj, chociaż z pewnymi modyfikacjami.

Chociaż jest to wyjątkowe w przypadku grzybów, w tych pożywkach bakterie mogą rosnąć, dlatego w przypadku próbek z mieszaną florą wymagane jest włączenie antybiotyków do jej przygotowania, a tym samym hamować wzrost flory bakteryjnej, która może być obecna.

Wybór antybiotyku musi być starannie przeprowadzony i biorąc pod uwagę rodzaj grzyba, który ma zostać odzyskany, ponieważ niektóre są hamowane w obecności niektórych substancji.

Podstawa

Agar Sabouraud Dextrose jest środkiem, że w pierwotnym preparatie jest słabo selektywne, ze względu.6 ± 0.2 jednak bakterie można opracować, głównie w przedłużonych inkubacjach.

Pożywka zawiera trzustkę pepton kazeiny i tkanki digreatycznej tkanki zwierzęcych, które stanowią źródło węgla i azotu do rozwoju mikroorganizmów.

Zawiera również wysokie stężenie glukozy, które działa jako źródło energii sprzyjającej wzrostowi grzybów powyżej bakterii. Wszystko to zmieszane z agarem, komponentem, który daje odpowiednią spójność.

Z drugiej strony agar Sabouraud dekstrose może być selektywny, jeśli dodane są antybiotyki.

W przypadku antybiotyków jest szczególnie przydatne w próbkach ran, otwartych wrzodach lub dowolnej próbce, w której podejrzewa się wielkie zanieczyszczenie bakteryjne.

Najczęściej używane kombinacje dekstrozy Sabouraud z antybiotykami

-Agar Sabouraud z chloramfenicką: Idealny do odzyskiwania drożdży i grzybów nitkowatych.

-Sabouraud agar z gentamycyną i chloramhenickiem: prawie wszystkie nitkowate grzyby i drożdże rosną w tym pożywce i hamuje dużą liczbę bakterii, w tym Enterobacteria, pseudomonas i gronkowca.

-Agar Sabouraud z cykloheksymidem: Jest on szczególnie przydatny do próbek ze skóry lub dróg oddechowych, o ile podejrzenia jest dimorficzne grzyby.

Cykloheksymid należy stosować ostrożnie; Chociaż służy do hamowania wzrostu grzybów nie patogennych lub środowiskowych i drożdży, które mogą być obecne jako zanieczyszczenia w próbce, hamuje również wzrost niektórych grzybów, takich jak Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Boydii Allescheria, Penicillium sp i Inne oportunistyczne grzyby.

-Agar Sabouraud z chloramhenikolem plus cykloheksyd: jest stosowany głównie do izolacji dermatofitów i grzybów dimorficznych. Ma niedogodności, które hamują niektóre gatunki oportunistycznych grzybów, takie jak Candida no albicans, Aspergillus, Zigomicetos lub C. Neoformany.

-Agar Sabouraud z chloramhenikolą, streptomycyną, penicyliną G i cykloheksydu: jest idealny do bardzo zanieczyszczonych próbek z bakteriami i saprofitami grzybami, ale ma niedogodność hamowania wzrost Actinomyces i Nocardias, Oprócz oportunistycznych grzybów wspomnianych powyżej.

Może ci służyć: proces hominizacji: cechy i fazy

Przygotowanie

Jeśli mają oddzielne składniki, można je przygotować w następujący sposób:

Sabouraud Dextrose 

Ważyć:

- 40 GR z dekstrozy

- 10 GR peptonu

- 15 GR Agar -agar

- Zmierz 1000 ml wody destylowanej

Wszystkie składniki są mieszane, pH jest dostosowywane do 5,6. Rozpuszczone są przez wrzenie, 20 ml pożywki jest rozmieszczone w rurkach 25 x 150 mm, bez trzymania i z bawełnianą pokrywką najlepiej.

Rurki z bawełnianą pokrywką. Źródło: Zdjęcie wykonane przez autora MSC. Marielsa Gil

Według dostępności można również zastosować inne miary rurki.

Zabierają autoklaw przez 10 minut do atmosfery ciśnienia (121 ° C). Nie należy go przekraczać w czasie autoklawów. Opuszczając autoklaw, rurki są nachylone przy pomocy wsparcia, dopóki nie zestalają się w szczycie fletu.

Innym sposobem jest rozpuszczenie składników poprzez podgrzewanie, aż się nie zagotuje. W tej samej autoklawowej feloli przez 10 minut, a następnie rozdziel 20 ml w płytkach Petriego.

Jeśli dostępne jest medium dekstrozowe Sabouraud, które już zawiera wszystkie składniki, określono kwotę określoną przez dom komercyjny dla litra wody. Reszta kroków jest równa osobom opisanym powyżej.

Agar Sabouraud Dextrose (Modyfikacja Emmons)

Ważyć:

-  20 GR z dekstrozy

- 10 GR peptonu

-  17 GR Agar -agar

-  Zmierz 1000 ml wody destylowanej

Wszystkie składniki są mieszane, pH jest dostosowywane do 6,9. Postępuj w ten sam sposób w poprzedniej sprawie.

Istnieją domy komercyjne, które oferują medium ze wszystkimi składnikami. W tym przypadku zważ i przygotuj sposób, w jaki opisuje to wkładka.

Agar Sabouraud Dextrose (Modyfikacja Emmons) z chloramfenikolem

Roztwór matki chloranfenikol

- Waż 500 mg podstawy chloramfenikolowej

- Zmierz 100 ml 95% etanolu

- Mieszać się

Medium dekstrozy Sabouraud (Emmons) jest przygotowywane jak już opisano i dodatkowo dla każdego litra dodania 10 ml roztworu matki chloranfenikolowej przed autoklawą.

Sabouraud Emmons z dekstrozą cyklohekmidową

Rozwiązanie macierzyste cykloheksydu

- Waż 5 GR cykloheksymidu

- Zmierz 100 ml acetonu

- Mieszać się

Sabouraud apoure.

Agar Sabouraud Dextrose (Emmons) z chloramfenikollem i cykloheksydem

Medium dekstrozy Sabouraud (Emmons) jest przygotowywane jak już opisano i dodatkowo dla każdego litra dodania 10 ml roztworu matki chloranfenikolowej i 10 ml roztworu matki cyklohekmidowej przed autoklawanymi.

Może ci służyć: nauki związane z biologią

Inne antybiotyki, które można dodać

20.000 do 60.000 jednostek penicyliny na litr medium.

30 mg streptomycyny na litr pożywki.

Oba muszą być włączone po nośniku, lekko schłodzonym (50-55 ° C).

0,04 g neomycyny na litr pożywki.

0.04 g gentamycyny na litr medium.

Uwagi specjalne

Bezpieczeństwo jest preferowane do zasiania agaru Sabouraud dekstrozy w rurkach w kształcie klina (nachylone w szczycie fletu) niż w płytkach Petriego, aby uniknąć dyspersji i wdychania zarodników.

Ważne jest, aby rurki z wiekami Sabouraud były pokryte bawełną, a nie niciową pokrywą, ponieważ wykazano, że warunki pół -aerobowe hamują tworzenie się sprorowatych w niektórych szczepach, na przykład Coccidioides immisis. Ponadto większość grzybów to tlen.

W przypadku użycia pokrywy gwint.

QA

Przygotowane media powinny być kontrolowane jakość, aby zweryfikować ich właściwe funkcjonowanie. W tym celu zasiane są pewne szczepy.

Dla Sabouraud Dextrose Candida albicans, które muszą mieć doskonały wzrost. Kolejna płyta jest zaszczepiona szczepami z Escherichia coli, Musi być całkowicie zahamowany.

Inkubowana jest również płytka blokowa bez zaszczepienia.

Dla agaru Sabouraud dekstrose z chloramhenikol i cykloheksyd  Trichophyton mentagrophytes, musi dobrze się rozwijać. Kolejna płyta jest zaszczepiona szczepem Aspergillus flavus, w którym musi istnieć ograniczony wzrost lub niezadowolenie. Dodatkowo inkubuje się nieokluczającą płytkę w celu wykazania jej sterylności.

Dla sabouraud dekstrozy z cykloheksydem, szczepy Candida albicans, Trichophyton Rubrum  albo Canis microsporum, który musi wykazać dobry wzrost.

Podobnie szczep Aspergillus flavus, Demonstrowanie ograniczonego wzrostu lub bezrogu. Wreszcie inkubuj płytkę bez zaszczepiania kontroli sterylności.

Aplikacje

Pierwotna uprawa

Klasyczny agar Sabouraud Dekstrose zawiera 4 GR dekstrozy i jest doskonały jako główny sposób izolacji, ponieważ pokazuje charakterystyczną morfologię każdego grzyba.

Jest również doskonały do ​​demonstrowania produkcji pigmentów. Jednak nie jest to najbardziej odpowiedni sposób na obserwowanie sporulacji.

Nie zaleca się też kultywowania Blastomyces dermatitidis, który jest hamowany przez wysokie stężenie obecnej glukozy.

Z drugiej strony należy pamiętać o pewnych rozważaniach.

Niektóre grzyby rozwijają się lepiej w temperaturze pokojowej, takie jak formy, inne z powodzeniem rozwijają się w 37 ° C, takie jak niektóre drożdże, a inne mogą rozwijać się w obu temperaturach (grzyby dimorficzne).

Dlatego czasami jest to konieczne.

Na przykład, Sporothrix Schencii Jest zasiany na dwóch płytkach; Jedna to inkuba w temperaturze pokojowej w celu uzyskania fazy pleśni, a druga inkubowana w 37 ° C w celu uzyskania fazy wieściowej, ale w tym ostatnim konieczne jest dodanie 5% krwi do środowiska.

Może ci służyć: glukoza oksydazy: charakterystyka, struktura, funkcje

W innych przypadkach, podobnie jak w próbkach mithom, dwie płytki agarowe Sabouraud są wysiewane, jedna z chloramfenikollem, a druga z cykloheksydem. Pierwszy zezwoli na wzrost przyczynowych środków mitów pochodzenia mitycznego (Eumicetoma) i drugiego przyczynowego środków miodowce pochodzenia bakteryjnego, takich jak aktynomicetomy.

Sporylacja

Agar Sabouraud DEXTROSE zmodyfikowany przez Emmons zawiera 2 GR dekstrozy i nie tylko służy do izolacji, ale także do sporulacji i ochrony grzybów.

W tym medium, jeśli możesz odzyskać szczepy od Blastomyces dermatitidis.

Ochrona

Aby zachować uprawy grzybów, można je przechowywać w lodówce (2-8 ° C). Czas ochrony może wahać się od 2 do 8 tygodni. Po tym czasie muszą być subiektywne, aby powtórzyć proces.

Niektóre grzyby pozostają lepsze w temperaturze pokojowej, na przykład Epiderermophyton Foccosum, Trichophyton Schoenleinnii, T. Violaceum I Microsporum audounii.

Utrzymanie szczepu można rozszerzyć, aby uniknąć pleomorfizmu, jeśli dekstroza agar.

Mikrokultury

W celu identyfikacji niektórych grzybów nitakowych konieczne jest wykonywanie mikrokultur przy użyciu Sabouraud Agar lub innych specjalnych środków do obserwacji struktur reprodukcji seksualnej i bezpłciowej.

W ludzkiej mikologii

Jest stosowany głównie do diagnozy chorób grzybiczych, zwłaszcza tych, które wpływają na skórę i jej aneksy (włosy i paznokcie).

Próbki mogą być wydzieliny, wysięki, skóra, włosy, paznokcie, plwocina, LC lub mocz. Powszechnie izolowane patogeny to dermatofity, grzyby powodujące mikozę podskórną i ogólnoustrojową.

Mykologia zwierząt

Na zwierzętach często wpływa infekcje grzybicze, dlatego agar Sabouraud jest równie przydatny w mikologii zwierząt, jak u człowieka.

Na przykład dermatofity mogą wpływać na zwierzęta. Tak jest Canis var zniekształcający mikrosporum, który często infekuje psy, koty, konie, świnie i małpy. Ponadto, Microsporum gypseum zaraża psy, koty i bydło.

Dotknięte są ptaki, takie jak kurczaki, koguty i kurczaki Microsporum gallinae.

Inne grzyby, takie jak Zymonema farciminosum, Są one również przyczyną chorób u zwierząt, głównie u koni, mułów i osłów, powodując ważne zapalenie w naczyniach limfatycznych.

Sporothrix schenkii i histoplasma capsulatum Wpływają na zwierzęta domowe i ludzkie.

Mykologia środowiskowa

Wiele grzybów patogennych lub oportunistycznych może się skoncentrować w danym momencie w danym środowisku, szczególnie w salach operacyjnych i oddziałach intensywnej terapii (OIOM) klinik i szpitali. Dlatego konieczne jest kontrolowanie tego samego.

Inne wrażliwe przestrzenie to stare biblioteki i budynki, na które mogą mieć wpływ koncentracja grzybów środowiskowych.

W badaniach środowiskowych stosuje się Agar Sabouraud dekstrose dla izolacji grzybów.

Mykologia przemysłowa

Agar Sabouraud DEXTROSE nie może brakować między innymi w badaniu zanieczyszczenia grzybów w produkcji kosmetyków, jedzenia, napojów, skóry, tekstyliów, tkanin.

Mykologia roślin

Rośliny cierpią również na choroby grzybów, wpływające na różne części rośliny, które mogą nawet zakończyć zbiory, powodując duże straty w rolnictwie.

Bibliografia

1. Laboratorium Valtek. (2009). Agar Sabouraud Dextrose z Cycloheximida. Dostępne na: Andinamedica.com.
2. Navarro lub. (2013). Mykologia weterynaryjna. National Agrarian University. Nikaragua.