Agar cytryniany Simmons

Pseudomonas fluorescens w agaru cytrynianowym Simmons. Źródło: wątpliwość, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Co to jest simmons cytrynian apar?

On Agar cytryniany Simmons Jest to solidne pożywkę stosowaną jako biochemiczny test identyfikacji mikroorganizmów, zwłaszcza gram -ujemne. Oryginalne medium zostało stworzone przez Kosera w 1923 roku.

Pożywka cytrynianowa Kosera składała się z bulionu zawierającego fosforan sodu, fosforan amonu, fosforan monopotoniczny, siarczan magnezu i cytrynian sodu.

Jak widać, jedynym źródłem węgla w pożywce jest cytrynian, a azot jest fosforan amonu, pomijanie białek i węglowodanów jako źródło tych elementów, powszechnie obecnych w innych pożywkach.

Dlatego zaszczepione bakterie w tym pożywce mogą się rozmnażać tylko wtedy, gdy jest w stanie wziąć węgiel cytrynianu. Test był pozytywny, jeśli w środku doszło do zmętnienia. Miałem jednak niedogodności, że może wystąpić niezgodne zmętnienie.

Problem został rozwiązany przez Simmons, dodając agar bromotimol do oryginalnej formuły Kosera. Chociaż zasada jest taka sama, jest interpretowana inaczej.

Podstawa

Niektóre bakterie mają zdolność przetrwania przy braku fermentacji lub produkcji kwasu mlekowego, wymagające osiągnięcia energii za pomocą innych substratów. W tym teście jedynym oferowanym źródłem węgla jest cytrynian.

Bakterie zdolne do przeżycia w tych warunkach szybko metabolizują cytrynian przez alternatywną drogę do tradycyjnego, przy użyciu cyklu kwasu trikarboksylowego lub cyklu fermentacji cytrynian.

Katabolizm cytrynianu przez bakterie obejmuje mechanizm enzymatyczny bez interwencji koenzymu. Ten enzym jest znany pod nazwą Citrica (cytrynian szczawian-liasa) lub cytrynianu demolazy. Reakcja wymaga obecności kationu dwuwartościowego, które w tym przypadku jest dostarczane przez magnez.

Może ci służyć: rodzaje oddychania i ich cechy

Reakcja wytwarza szczawiooctan i pirogronian, które następnie powodują powstanie kwasów organicznych w środku pH alkalicznego utworzonego przez zastosowanie źródła azotu. Te kwasy organiczne są wykorzystywane jako źródło węglowe węglanów i wodorowęglanów, co dodatkowo alkalizuje medium.

Tryb zasiany

Pożywka cytrynianowa Simmons musi być lekko zaszczepiona ogonem rybnym za pomocą prostej lub igły i inkubować przez 24 godziny do 35-37 ° C. Kulminacją, kiedy wyniki są obserwowane.

Zasiewane odbywa się tylko na powierzchni agaru, bez nakłucia.

Interpretacja

Jeśli medium jest oryginalnym kolorem (zielonym) i nie ma widocznego wzrostu, test jest ujemny, ale jeśli medium zmienia niebieskie, wskazuje na obecność produktów alkalicznych, które są wykrywane przez wskaźnik pH. W takim przypadku test jest pozytywny.

Dzieje się tak, ponieważ jeśli bakterie wykorzystują węgiel cytrynianu, jest on również w stanie pobrać azot z fosforanu amonu, z którym uwalnia amoniak, alkalizując medium.

Z drugiej strony, jeśli wzrost bakterii jest obserwowany pośrodku, ale nie ma zmiany koloru, test należy również uznać za pozytywny, ponieważ jeśli nastąpi wzrost, oznacza to, że bakterie były w stanie użyć cytrynianu jako A Źródło węgla, chociaż w tym czasie nie ma zmiany pH (czasami może to zrobić).

Jeśli istnieją wątpliwości w interpretacji końcowego koloru, można go porównać z niezamieszkaną rurką cytrynianową.

Przygotowanie

Ważyć 24,2 grania odwodnionego pożywki na litr wody. Wymieszaj i wyjdź po około 5 minutach. Zakończyć rozpuszczenie średniego ogrzewania przez 1 lub dwie minuty, machając często.

Może ci służyć: jaki jest poziom makrocząsteczkowy?

Serwuj 4 ml w probówkach testowych i autoklawarowych w 121 ° C przez 15 minut. Wychodząc z autoklawu, przechylając się za pomocą wsparcia, aby agar został zestalony w postaci piku fletu z małym taco lub tłem i więcej ramki.

Ostateczne pH średniego cytrynianu wynosi 6,9 (kolor zielony). To medium jest bardzo wrażliwe na zmianę pH.

PH 6 lub poniżej, medium staje się żółty kolor. Ten kolor nie jest obserwowany w teście bakterii.

A przy pH 7,6 lub wyższym średnim zmieniającym się w niebieskiej intensywnej Prusy.

Używać

Agar cytryniany Simmons służy do identyfikacji niektórych mikroorganizmów, zwłaszcza pachilli należących do rodziny Enterobacteriaceae i innych nieustraszonych pachilli glukozowych.

Ostateczne rozważania

Medium cytrynianowe Simmons jest bardzo delikatnym testem, ponieważ można uzyskać fałszywe pozytywy, jeśli popełniane są pewne błędy.

Opieka, którą należy podjąć, są następujące:

Inoculo

Nie należy wykonywać bardzo grubego lub obciążonego inokulum bakteryjnego, ponieważ może powodować rozwój miedzianego żółtego koloru w miejscu zasi, bez wpływu na resztę medium, ale może uwierzyć, że istnieje wzrost. Nie oznacza to pozytywnego dowodu. 

Podobnie gruby inokulum może generować fałszywie dodatnie, ponieważ wstępnie uformowane związki organiczne w ścianach komórkowych bakterii morbaginowych mogą uwalniać wystarczającą ilość węgla i azotu, aby obrócić wskaźnik pH.

Dlatego ideałem jest sieanie za pomocą igły zamiast platyny, aby uniknąć przyjmowania nadmiaru materiału.

Może ci podać: łańcuch pokarmowy dżungli

Posiany

Z drugiej strony, gdy bateria testów biochemicznych do identyfikacji danego mikroorganizmu jest siew, ważne jest, aby test cytrynianu był pierwszym zaszczepieniem, aby uniknąć oporu białka lub węglowodanów z innego średniego.

W tych okolicznościach możliwe jest uzyskanie fałszywie dodatnich, ponieważ każda z tych substancji wprowadzonych przez błąd zostanie metabolizowana i spowoduje zmianę pH.

Innym sposobem uniknięcia przeciągania substancji jest spalenie uchwytu i przyjmowanie nowego inokulum między jednym testem a drugim.

Należy również zachować ostrożność podczas dotykania kolonii w celu przeprowadzenia inokulum, ponieważ należy unikać, aby przeciągnąć część agaru uprawnego.

W tym sensie Matsen, Sherris i Branson zalecają rozcieńczenie inokulum w roztworze fizjologicznym przed zaszczepieniem testu cytrynianu, aby uniknąć przeniesienia innych źródeł węgla.

Intensywność kolorów

Należy wziąć pod uwagę, że intensywność koloru wyprodukowanego, gdy test jest dodatni, może się różnić w zależności od domu komercyjnego.

Ponadto istnieją mikroorganizmy, które dodatnie po 24 godzinach, ale istnieją inne szczepy, które wymagają 48 godzin lub więcej do wywołania zmiany pH.

Bibliografia

1. BBL Simmons Cytrynian Agar Slants. BD wyzdrowiał.com.
2. Agar cytryniany Simmons. Odzyskane z Britanialab.com.