Połowa mojego tego, co jest, podkład, przygotowanie, używa

On Moja połowa Jest to test biochemiczny, który służy do identyfikacji gatunków bakterii należących do rodziny Enterobacteriace. Jest dość pożywny i składa się z glukozy, ekstraktu drożdżowego, peptonu, tripteiny, chlorowodorku L -latiny, bromokresh i fioletu agarowego.

Znaczenie jego akronimu (kopalnia) opisuje każdy z parametrów, które można zaobserwować w tym medium; Ruchliwość, indol i ornityna. Motory to zdolność mikroorganizmu do poruszania się po obecności wici. Aby zaobserwować tę właściwość, spójność pożywki musi być półsolid.

Schemat interpretacji wyników w kopalni średniej. Źródło: przygotowane przez autora MSC. Marielsa Gil

Produkcja indolowa świadczy o obecności enzymu triptofanasa, który działa na aminokwas tryptofanu, który jest niezbędny do użycia odczynnika odkrywczego, aby zobaczyć produkcję indolu.

Wreszcie ornityna określa, czy bakterie są zdolne do dekarboksilarii.

Podstawa

Pepton, ekstrakt drożdżowy i tripteina

Elementy te przyczyniają się do siły żywieniowej tego medium. Służą jako źródło niezbędnych składników odżywczych i aminokwasów do rozwoju bakterii.

Ponadto Triptein jest źródłem tryptofanu w celu wykazania obecności enzymu Triptofanasa, który degraduje terptofan.

Indol jest bezbarwny, dlatego jego obecność ujawnia się przez dodanie pięciu kropli odczynnika Ehrlicha lub Kovacsa, oba z p-dimetyloaminobenzaldehydem.

Grupa aldehydu tego związku reaguje z indolem, generując produkt w kształcie czerwonego Fuchsia na powierzchni agaru.

Wszelkie ślady koloru należy uznać za test pozytywny. Test należy odczytać natychmiast, od czasu degradacji kolorów.

Z drugiej strony ten test należy ujawnić po odnotowaniu wyników ruchliwości i dekarboksylacji ornityny.

Może ci służyć: kompaktowa kość: charakterystyka, struktura, funkcje

Interpretacja

Pozytywny test: Tworzenie czerwonego pierścienia Fuchsia podczas dodawania kropli odczynników Kovacsa.

Test negatywny: Nie ma tworzenia pierścienia.

Poruszanie się

Bakteria pojemność ruchu będzie dowodem.

Ujemny test ruchliwości zostanie potwierdzony przez obserwowanie cienkiej linii wzrostu, a wszystko będzie bez wzrostu.

Ważne jest, aby ruchliwość była czytana przed ujawnieniem.

W mobilnych bakteriach, ale o powolnym wzroście trudno jest wykazać jego ruchliwość za pomocą tego medium. W takim przypadku zaleca się stosowanie innych testów lub metod, takich jak ruchliwość średniej lub metoda oczekująca.

Glukoza

Glukoza jest fermentowalnym węglowodanem, który oprócz zapewnienia energii zakwasza pożywkę, niezbędny stan, tak że może wystąpić dekarboksylacja aminokwasu ornityny.

Zawsze powinna wystąpić fermentacja glukozy, w oparciu o zasadę, że wszystkie bakterie należące do rodziny Enterobacteriaceae fermentowanie glukozy.

L -Nornitin

W przypadku, gdy bakterie wytwarzają enzym dekarboksylazę ornitynową, może działać po zakwaszaniu pożywki przez fermentację glukozy.

Dekarboksylaza ornityny enzymu działa na grupę karboksylową aminokwasu wytwarzającą aminę zwaną putresiną, która znów alkhei medium.

Ten test należy odczytać po 24 godzinach inkubacji, ponieważ jeśli spróbujesz przeczytać, zanim będziesz mógł źle zrozumieć test fałszywie.

Pamiętaj, że pierwszą reakcją występującą jest fermentacja glukozy, więc pożywka staje się żółta w początkowej fazie (pierwsze 10 do 12 godzin). Jeśli dekarboksylacja ornityny nastąpi później, medium będzie fioletowe.

Ważne jest interpretację testu dekarboksylacji ornityny przed ujawnieniem indol.

Może ci służyć: królestwa natury i jej cechy

Interpretacja

Test negatywny: żółte lub żółte medium.

Pozytywny test: Całkowicie fioletowa połowa.

Wskaźnik PH

W tym przypadku stosuje się purple bromokresolu; Osoba odpowiedzialna za ujawnienie, gdy nastąpi zmiana pH na środku. Poprzez zakwaszenie wskaźnik zmienia żółty, a gdy alkaliza.

Zasiany i ujawniony technika

Aby zasiewać moje medium, używana jest prosta lub igła, a część kolonii jest zebrana z nim.

Głębokie nakłucie jest wykonane w moim środku w linii prostej. To nie jest wskazane.

Inkubuj przez 24 do 48 godzin w 37 ° C w aerobiozie. Obserwuj wyniki w tej kolejności: ruchliwość, dekarboksylacja ornityny i wreszcie ujawnij indol.

Wskazane jest przeniesienie 2 ml do medium, przeniesienie go do sterylnej rurki i wykonanie tam testu indolowego, więc jeśli daje negatywne, resztę oryginalnej rurki można inkubować przez 24 godziny, aby ponownie odsłonić indol.

Rozwój indolu odbywa się w następujący sposób: 3 do 5 kropli odczynnika Kovacs są dodawane w moim środowisku i silnie miesza. Obserwuje się, czy pojawia się czerwony pierścień Fuksia.

Przygotowanie

Moja połowa

Ważyć 31 grać mojego środowiska i rozpuść się w litrom wody destylowanej.

Podgrzewaj, aż mieszanina zagotuje się przez minutę, często mieszając, aż całkowicie rozpuścisz agar. Rozłóż 4 ml pożywki w rurkach testowych 13/100 z bawełnianą pokrywką.

Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Wyjmij z autoklawu i pozostaw prosto w szoku, tak że powstało półsolidowe taco.

Przechowuj w lodówce 2-8 ° C. Niech temperament przed siewem bakteryjnym.

Kolor odwodnionego pożywki jest beżowy i koloru pożywki przygotowanej fioletowo lekko opaleczelne.

Może ci służyć: rozbieżna ewolucja: przyczyny i przykłady

Ostateczne pH przygotowanej pożywki wynosi 6,5 ± 0.2

Pożywka staje się żółta z kwasem pH i jest fioletowe do alkalicznego pH.

KOVACS reaktywny (deweloper testowy indol)

Ten odczynnik jest przygotowywany w następujący sposób:

Mierzy się 150 ml alkoholu amylowego, izoamylu lub butylowego (dowolny z trzech). 10 G-G-dimetyloaminobenzaldehyd rozpuszcza się w nim. Następnie powoli dodaje się 50 ml skoncentrowanego kwasu solnego.

Przygotowany odczynnik jest bezbarwny lub czysty żółty. Musi być przechowywany w bursztynowej butelce i zachować w lodówce. Ciemnobrązowy kolor pokazuje jego pogorszenie.

Również odczynnik Kovacs można zastąpić odczynnikiem Ehrlich. Ten ostatni, ponieważ jest bardziej wrażliwy, preferuje się ujawnienie indolu w bakteriach, które wytwarzają go w minimalnych ilościach, jak w niektórych nieustannych bachilli ujemnych i niektórych beztlewnych.

Używać

To medium jest testem, który uzupełnia baterię testów biochemicznych do identyfikacji bakterii należących do rodziny Enterobacteriace.

Dane dekarboksylacji ornityny służą do różnicowania Shigella Sonnei, To daje pozytywne Shigella Boydii, Shigella Flexneri i S. Dysenterieae, Dają negatywne.

Rozróżnia także rodzaj Klebsiella, który daje negatywne, z rodzaju Enterobacter, w którym większość jego gatunków daje pozytywne.

Źródło: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. Ed. Pan -american Editorial S.DO. Argentyna.

QA

Za każdym razem, gdy przygotowuje się połowa mojej, można przeprowadzić test kontrolny. W tym celu do obserwacji zachowania medium stosuje się znane lub certyfikowane szczepy.

Szczepy, które można użyć Escherichia coli, Morganella Morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter Aerogenes I Proteus mirabilis.

Oczekiwane wyniki są I. coli i m. Morganii. Dan M: +, i: + i o: +.

Klebsiella pneumoniae Daj wszystko negatywne (m:-i:-, o :-). Proteus mirabilis I Enterobacter Aerogenes Dan M:+ I:- i o: +.

Bibliografia

1. Mac Faddin J. (2003). Testy biochemiczne identyfikacji bakterii znaczenia klinicznego. Wydanie trzecie. Pan -american Editorial. Buenos Aires. Argentyna.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Pan -american Editorial S.DO. Argentyna.