Maloniczny bulion, przygotowanie i zastosowania

On Bulion Malonato Jest to podłoże hodowli płynnej stosowana do testu diagnostycznego (test Malonato), stosowany do różnicowania niektórych gatunków rodziny Enterobacteriace. Został stworzony przez Leifson w 1.933, a następnie zmodyfikowane przez Ewing, który dodał niewielką ilość dekstrozy i ekstraktu drożdżowego do oryginalnego formuły.

Pożywka składa się obecnie z ekstraktu drożdżowego, siarczanu amonu, fosforanu dipotasowego, fosforanu monopotonicznego, chlorku sodu, malonanu sodu, dekstrozy i niebieskiego bromotimolowego. Ten test jest ogólnie uwzględniony w biochemicznej baterii identyfikacyjnej dla Enterobacteria, pomagając różnicować niektóre rodzaje i gatunki.

Graficzna reprezentacja testu Malonato. DO. Test negatywny, b. (Zakwaszenie) test ujemny, c. (Średnia alkalizacja) test pozytywny. Źródło: kolorowe lampy domeny publiczne.internet

Test malonato opiera się głównie na zdolności niektórych mikroorganizmów do używania sodu malonato jako pojedynczego źródła węgla i źródła azotu do siarczanu amonu.

Test Malonato zwykle daje pozytywny wynik w niektórych gatunkach gatunku Enterobacter, Klebsiella i Citrobacter. Podczas gdy większość gatunków gatunków Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus i Providencia, daje negatywną reakcję.

[TOC]

Podstawa

Test masowy obejmuje dowód.

Większość enterobakterii, które nie używają Malonato, są zdolne do rosnącego w tym pożywce, przyjmując jako składniki odżywcze, dekstroza i ekstrakt z drożdży.

W takim przypadku każda próba alkalizacji z powodu zastosowania peptones zostanie przeciwdziała wytwarzaniu kwasów generowanych przez fermentację dekstrozy. Podobnie, fosforany dipotasowe i monopotazowe działają jako bufor utrzymujący pH na 6,7.

Może ci służyć: wokół Donax

Dlatego, gdy test jest ujemny, bulion ma ten sam oryginalny kolor (zielony). Rzadko pożywkę można zakwaszić z powodu fermentacji dekstrozy; Bez użycia peptonas i wskaźnika pH obracałby kolor od medium na żółty. W tym celu pH musi spaść do 6.

Teraz, gdy ten test jest pozytywny, że mikroorganizm stosował malonato i siarczan amonu odpowiednio jako źródła węgla i azotu, bez użycia innych komponentów.

W tym przypadku medium jest zasadowe z powodu wyzwolenia sodu i wynikającego z tworzenia NaOH. W tym sensie wskaźnik pH (niebieski bromotimol) obraca kolor środka zielonego na niebieski, gdy pH jest równe lub większe niż 7,6. Niebieski może być wyraźny lub intensywny (Prus Blue).

Wreszcie, chlorek sodu utrzymuje osmolarność pożywki, a woda jest rozszerzeniem wszystkich składników.

Interpretacja

Bulion o tym samym kolorze (zielony): test ujemny

Żółty bulion: test ujemny

Jasny lub intensywny niebieski bulion: test pozytywny

Istnieje wariant zwany bulionem fenyloalaniny malonato, zwany także Shaw i Clarke Medium. W takim przypadku można przeanalizować dwa testy, zastosowanie malonato jako źródła węgla i wytwarzanie kwasu piruwicznego z fenyloalaniny.

Przygotowanie

Bulion Malonato

Ilość gramów określonych przez wstawkę wybranego domu komercyjnego waży (może się zmieniać w zależności od drugiego). Ciężkie gramy są zawieszone w litrom wody destylowanej. Podgrzewaj lekko, aż do całkowitego rozwiązania. Rozłóż 3 ml pożywki w rurkach testowych 13/100 z bawełnianą pokrywką.

Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 lub 20 minut.

Fajny. Jeśli nie będą używane natychmiast, zapisz w lodówce do czasu użycia. Hartować buliony w temperaturze pokojowej przed ich zaszczepieniem.

Może ci służyć: giptodon

Średnie pH musi wynosić 6,7 ± 0,2. Kolor przygotowanego medium to zielony butelka.

Malonato bulion fenyloalaniny

Zważyć 11 GR odwodnionej pożywki i rozpuść się w 1 litorze wody destylowanej. Reszta preparatu równa opisanej powyżej.

Można go również przygotować, dodając 2 gr/l fenyloalaniny do pożywki bulionu malonato przed sterylizowaniem.

Używać

Jest używany jako część biochemicznej baterii testowej, która jest zamontowana w celu identyfikacji bakterii rodziny Enterobacteriaceae.

Pomóż rozróżnić:

-Rodzaj Klebsiella i Enterobacter (+) z rodzaju Escherichia i Serratia (-).

-Gatunek Ssp arizonae entrico salsonella ssp, SSP SSP Salame Salmonella Salmonella enterica SSP Dirasonae (+), gatunku Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Z rodzaju Klebsiella ogólnie (+) z rodzaju Actinobacillus (-).

-Czasami może pomóc różnicowanie gatunków i gatunków bakterii nie należących do rodziny Enterobacteriaceae, jak wśród nieustannych bachilli z gramu Alcaligenes faecalis (+) Acinetobacter sp (-).

Źródło: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. Ed. Pan -american Editorial S.DO. Argentyna.

Procedura

Pod lżejszą, część czystej kolonii jest pobierana, stosując odpowiednio sterylizowany i chłodzony platynowy uchwyt. Próbka pobrana (lekki inokulum) rozpuszcza się w bulionie Malonato. Jest inkubowany z leniwą pokrywką w aerobiozie w temperaturze 35 ° C ± 0,2 przez 24 do 48 godzin.

Możesz także zaszczepić bulion Malonato z uprawy 18–24 godzin w trypozytowych bulionie sojowym. W takim przypadku 0,01 ml jest pobierany sterylną pipetą, a bulion Malonato zaszczepiony. Jest inkubowany z leniwą pokrywką w aerobiozie w temperaturze 35 ° C ± 0,2 przez 24 do 48 godzin.

Może ci służyć: wtórni konsumenci

Zakończył czas interpretacji wyników. Wszelkie ślady koloru niebieskiego zakończone 48 godzin inkubacji należy uznać za pozytywne. Test nie powinien być interpretowany jako negatywny, dopóki 48 -godzinny czas inkubacji nie zostanie zrealizowany.

W przypadku stosowania wariantu bulionu fenyloalaniny malonato, najpierw interpretowane jest malonato, a następnie dodaje się 5 kropli HCl 1N i 3-5 kropli 8% chlorku żelazowego. Ciemnozielony kolor jest interpretowany jako pozytywny test na fenyloalaninę. Jeśli wręcz przeciwnie, medium staje się jasnoniebieskie, test jest ujemny dla fenyloalaniny.

QA

Aby wykonać kontrolę sterylności pożywki, jeden lub dwa buliony należy inkubować w 35 ° C ± 0,2 przez 24 godziny inkubacji. Po tym czasie nie powinno być zmętnienia ani zmiany koloru.

Do kontroli jakości możesz użyć znanych lub certyfikowanych szczepów, takich jak: Enterobacter Aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Ssp arizonae entrico salsonella ssp ATCC 13314 i Escherichia coli ATCC 25922.

Oczekiwane wyniki to:

• Enterobacter Aerogenes, Klebsiella pneumoniae I Ssp arizonae entrico salsonella ssp Dają pozytywną reakcję (na wpół niebieski).
• Dla Escherichia coli Wynik musi dać negatywne, to znaczy oczekuje się, że nie ma zmiany koloru (zielony) lub że zmieni się żółty z powodu fermentacji glukozy.

Ograniczenia

Nie używaj bulionu, który pokazuje zmętnienie, wytrącania, zmianę koloru ani żadnego oznaki pogorszenia.

Bibliografia

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Izolacja mikrobiologiczna Salmonella spp. i narzędzia molekularne do wykrywania. Uninorte Health. Barranquilla (kol.) 2014; 30 (1): 73-94. Dostępne na: Scielo.org.współ
2. Bbl. Malonian Bucis, zmodyfikowany. 2007. Dostępne na: BD.com
3. Senna Laboratories. Bulion Malonato. Dostępne w: Scientific.com
4. Renylab. Bulion Malonato. 2013. Dostępne na: to.Renylab.Ind.Br
5. Diagnostyka Mbiology. Bulion Malonato. Dostępne na: Mbiology.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. Ed. Pan -american Editorial S.DO. Argentyna.
7. CDADA PREMADISA LABOROTIONS. Malonato bulion fenyloalaniny. Dostępne na: Condalab.com