Utrużenie, przygotowanie i zastosowania

On Bulion EC lub bulion Escherichia coli Jest to selektywne podłoże hodowli płynnej. Ta medium jest zalecane standardowymi metodami liczby pełnej i kału coli, najbardziej prawdopodobną techniką liczb (NMP) w próbkach wody i żywności, w której zaangażowanym środkiem jest główny czynnik Escherichia coli.

Bulion EC składa się z tripteiny, laktozy, soli żółciowych, fosforanu pipotazowego, fosforanu monopotazowego, chlorku sodu i wody. Jego formuła jest strategicznie zaprojektowana w celu sprzyjania wzrostowi całkowitej i kału z grupy coli oraz zapobieganie rozwojowi innych towarzyszących mikroorganizmom.

Figuratywne przedstawienie przygotowania bulionu EC. Źródło: Pixabay.com

Bakterie Escherichia coli Jest to główny kał z grupy coli obecnych jako zanieczyszczenie w źródłach wodzie i żywności, ponieważ jest przyczyną ważnych skutków przewodu pokarmowego.

Należy zauważyć, że istnieje wiele serotypów Escherchia coli; Wśród nich można wymienić Enterohemorrágica (EHEC), Enteroinvasive (EIEC), enteopathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) i enteroagregative (EAEC).

To medium ma zdolność umożliwienia rozwojowi wszystkich z nich, ale niezdolnych do ich odróżnienia od siebie. W tym celu należy przeprowadzić dodatkowe testy.

Mikrobiologiczne badanie wody i żywności dla najbardziej prawdopodobnej liczby (NMP) w poszukiwaniu całkowitej i kału z grupy coli, jest protokołem składającym się z kilku faz; Faza przypuszczalna, faza potwierdzająca i faza zakończenia. Bucis EC jest używane w fazie potwierdzającej.

[TOC]

Podstawa

Bulion EC

Medium EC opiera się na dostarczaniu niezbędnych elementów odżywczych do optymalnego rozwoju całkowitej i kału bakterii, w których bakterie są uwzględnione Escherichia coli.

Te elementy żywieniowe są dostarczane przez Triptein, są doskonałym źródłem peptydów i aminokwasów. Ponadto zawiera również laktozę, fermentacyjny węglowodan, który zapewnia energię i pozwala pokazać, czy bakteria wytwarza gaz.

Z drugiej strony medium zawiera sole żółciowe, które zapewniają selektywną naturę, ponieważ hamuje wzrost mikroorganizmów dodatnich Grama, które mogą być obecne w próbce.

Może ci służyć: flora i fauna Nuevo León

Podobnie fosfat dipotasy. Ten układ jest konieczny, ponieważ laktoza zawarta w bulionie ma tendencję do zakwaszania pożywki, gdy jest fermentowany przez mikroorganizmy, ale kompensuje to sole fosforanowe.

Dlatego elementy te są niezbędne, ponieważ kwasowość bez kontroli może wpływać na dobry rozwój poszukiwanych mikroorganizmów.

Ze swojej strony chlorek sodu stabilizuje środowisko, podczas gdy woda jest rozpuszczalnikiem obecnych substancji rozpuszczonych i zapewnia spójność płynną dla środowiska.

Bulion EC zmodyfikowany novobiocin

OKrend i Rose stworzyli różnorodne bulion EC, zwany bulionem zmodyfikowanym EC. Modyfikacja polegała na zmniejszeniu stężenia soli żółciowych i agregatu 20 mg/dl novobiocina.

Ta modyfikacja sprzyja odzyskaniu szczepów Escherichia coli Enterohemorrágica (O157: H7).

Ten serotyp bakteryjny powoduje ciężkie krwotoczne zapalenie jelita grubego, które może powodować hemolityczny zespół mocznicowy (SUH); co z kolei może generować ostrą niewydolność nerek, z wysoką śmiertelnością, która może osiągnąć do 50% u osób starszych.

Z powodu chorobliwie spowodowanych przez bakterie do spożycia zanieczyszczonej żywności, Departament Rolnictwa Stanów Zjednoczonych (USDA) zdecydowanie zaleca stosowanie tego medium.

Przygotowanie

Bulion EC

Ważyć 37,4 GR odwodnionej pożywki i rozpuść się w 1 litorze wody destylowanej. Mieszanina musi być dozwolona przez 5 minut. Następnie w źródle ciepła często rozpuszcza się.

Po rozpuszczeniu jest rozmieszczone w rurkach testowych wcześniej kondycjonowanych za pomocą rurki Durham w środku. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

Może ci służyć: Sphingomyeline: co to jest, struktura, funkcje, synteza

Średnie pH musi wynosić 6,9 ± 0,2.  Kolor odwodnionego pożywki jest beżowy i przygotowany jest wyraźny bursztyn.

Bulionie są przechowywane w lodówce do czasu użycia. W czasie użycia buliony muszą znajdować się w temperaturze pokojowej.

Z drugiej strony bulion EC można również przygotować w podwójnym stężeniu.

Bulion EC zmodyfikowany novobiocin

Ważyć 36,7 grania odwodnionego pożywki i rozpuszcza się w 1 litorze wody. Reszta preparatu jest równa opisanej powyżej.

Używać

Całkowita analiza coli i kału

Bulion EC jest idealny do fazy potwierdzającej badań coli z metodą NMP, zarówno w próbkach wody, jak w produktach farmaceutycznych i spożywczych.

Imowsze bulionki produkcyjne i gazowe uzyskane w fazie domniemanej powinny być przywrócone w jasnozielonych bulionie na poziomie 2% oraz w bulionie EC.

W przypadku całkowitej grupy z grupy coli bulionki inkubowane są w aerobiozie przez 24 do 48 godzin w 37 ° C, a dla coli z grupy coli kału inkubowane są w aerobiozie przez 24 do 48 godzin w 44 ° C.

W obu przypadkach jest interpretowany w następujący sposób: Mroczne rury z produkcją gazu są uważane za pozytywne. Jeśli w ciągu 24 godzin nie ma produkcji gazu, inkubacja do 48 godzin.

Pozytywne buliony EC trafiają do pełnej fazy potwierdzającej, która polega na nagradzaniu w selektywnych mediach, takich jak Mac Calkey, EMB lub Endo Endo Agar.

Jeśli zastosowany bulion jest modyfikowany za pomocą novobiocyny, zalecane są rurki dodatnie do przypominania agaru Mac Sorbitol.

QA

Kontrola jakości należy wykonać z każdej przygotowanej medium partii. Po pierwsze, sterylność środowiska musi. W tym sensie inkubuje się jeden lub dwa bulionie bez zaszczepienia aerobiozy przez 24 godziny w 37 ° C. Oczekiwanym rezultatem jest przezroczysty bulion, bez zmętnienia lub zmiany koloru.

Może ci służyć: kompetencje międzygatunkowe: cechy i przykłady

Po drugie, należy ocenić wzrost znanych szczepów, ponieważ można tego użyć następujących bakterii: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella Typhimurium ATCC 14028.

We wszystkich przypadkach oczekuje się zadowalającego rozwoju drobnoustrojów, obserwując pochmurny bulion z produkcją gazu dla I. coli i bez gazu na salmonellę.

Inne szczepy, które można uwzględnić w kontroli, to: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Te szczepy muszą być całkowicie zahamowane.

Zalecenia

-Umieszczenie rurek Durham jest niezbędne do badania coli z baliliami.

-Rozłóż medium w rurach testowych przed sterylizacją, nigdy później.

-Nie używaj, jeśli medium jest przygotowane dłużej niż 3 miesiące.

-Nie używaj, jeśli zaobserwowano jakąkolwiek zmianę zwykłych charakterystyk medium.

Bibliografia

1. Britania Laboratories. Middle EC. 2015. Dostępne na: Britanialab.com
2. I. coli Enterohemorrhagic. Centrum bezpieczeństwa żywnościowego i zdrowia publicznego. 2010. Dostępne na: CFSPH.IAystate.Edu
3. Corporation Neogen. Medium EC. Dostępne na: Foodsafety.Neogen.com
4. Neogen. Medified EC zmodyfikowane novobiocina. Dostępne na: Foodsafety.Neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, autor: Castillo M. Wykrywanie, izolacja i charakterystyka Escherichia coli Producent toksyn Shiga z świeżego mielonego mięsa od rzeźników Concepción, prowincji Tucumán. Rev arg of Microbiol; 2010, 42 (4): 284-287.  Dostępne na: www.Scielo.org.