Fundacja Bioret, odczynniki, procedura, zastosowania

On Biuret Jest to odczynnik stosowany do oznaczania białek długiego łańcucha i krótkiego łańcucha. Jest on szczególnie stosowany w obszarze chemii analitycznej i uroanalizy w celu zbadania stężenia całkowitej surowicy, osocza i białek moczu.

Wartości białka można zwiększyć lub zmniejszyć w niektórych patologiach. Zdjęcia hipoproteinemii są zwykle prezentowane u pacjentów z chorobą nerek, u niedożywionych i u pacjentów z przewlekłymi infekcjami.

Struktura chemiczna kompleksu utworzonego w reakcji biuretu pozytywny test biuretu. Źródło: Yikrazuul [domena publiczna]/flickr

Podczas gdy hiperproteinemia obserwuje się w patologiach takich jak szpiczak mnogim, toczeń rumieniowczynowy, bakteryjne zapalenie wsierdzia, bakteryjne zapalenie opon mózgowych, macroglobulinemia Waldenstrom, między innymi, między innymi.

Z drugiej strony obecność białek w moczu wynika z filtracji albuminy przez nerkę. Jest to patologiczne zachowanie, które należy zbadać.

W tym sensie biuret jest bardzo przydatny, ponieważ pozwala na kwantyfikację obecności białek surowicy, osocza, moczu, wśród wielu innych próbek.

Nawet biuret można wykorzystać do zbadania obecności i stężenia białek w nieznanych lub nieznanych próbkach składu. Dlatego jest szeroko stosowany w obszarze badań.

Test BIURET oparty jest na wykryciu linków peptydowych. Test podano w pożywce alkalicznej. Próbka musi zawierać co najmniej dwa łącza peptydowe, aby można było utworzyć kompleks koloru fioletowego. Kompleks powstaje przez połączenie linków i jon miedzi.

[TOC]

Podstawa

Odczynnik biuretu składa się z wodorotlenku potasu, siarczanu miedzi oraz tartrato sodu i potasu. Wodorotlenek sodu jest stosowany do alkalizacji środowiska, ponieważ ten stan jest niezbędny do wystąpienia reakcji.

Substancje, które reagują z białkami to siarczan miedziowy, podczas gdy sodowe tartato ma funkcję nie pozwalając na tworzenie wodorotlenku miedzi, które ma tendencję do wytrącania się i zakłócenia reakcji.

Może ci służyć: fermentacja: historia, proces, typy, przykłady

Jeśli w próbce istnieją substancje, które mają wiązania peptydowe (polipeptydy lub białka), test da pozytywne.

Reakcja jest interpretowana jako pozytywna, gdy rozwiązanie staje się fioletowe. Kolor jest wytwarzany przez tworzenie kompleksu między co najmniej dwoma wiązaniami peptydowymi, które mają grupę CO-NH i obecnymi kationami.

Kompleks fioletowy można uformować na dwa sposoby: jeden wynika z utraty protonów z grup, które wiążą się z metalem (zgrubne), a drugie przez połączenie elektronów tlenu i azotu, które są wolne i wiążą z miedzi.

Ta reakcja może różnić się intensywnością i kolorem w zależności od rodzaju białka.

Test można przeprowadzić jakościowo lub ilościowo. W postaci jakościowej jest to zgłaszane jako pozytywne lub negatywne. Podczas gdy w postaci ilościowej stężenie można zmierzyć metodą spektrofotometryczną.

Reakcja jest odczytywana między 540-560 nm. Intensywność kolorów jest wprost proporcjonalna do stężenia połączeń peptydowych w próbce.

Odczynniki

-Wodorotlenek sodu (NaOH) na 20%

-1% siarczan pentahydratu (cuo₄. 5h₂ALBO)

-Mieszany sód i tetrahydrat potas tartrato (KNAC₄H₄ALBO₆· 4H₂ALBO)

Stabilność odczynnika biuretu

-Należy go przechowywać w chłodnistwie.

Procedura

Technika

-Umieść 100 µl próbki lub wzór do analizy w rurze testowej.

-Dodaj 2 ml wodorotlenku sodu.

-Wymieszaj bardzo dobrze.

-Dodaj 5 ml odczynnika biuretu.

-Wymieszaj i pozostaw 25 minut w temperaturze pokojowej, przykryj i chroń przed światłem.

-Obserwuj tworzenie się lub nie koloru i mierz spektrofotometrycznie.

Krzywa kalibracji

Aby wykonać krzywą kalibracyjną, możesz użyć albuminy bydlęcej surowicy jako wzoru. Przygotowano z niego kilka stężeń. Na przykład 25, 50, 75, 100, 125 i 150%.

Reakcja jest montowana z wszystkimi znanymi stężeniami, a absorbancja jest odczytywana do długości fali 540 nm. Z danymi znanych stężeń i odczytów pochłaniających przeprowadzana jest krzywa kalibracji.

Może ci służyć: chińska flora i fauna: reprezentatywne gatunki

W każdej determinacji lub wielu przetworzonych próbkach jest to wskazane. Jako wzór kalibracji można użyć albuminy bydlęcej surowicy 0,1-2 mg/ml.

Pomiary wykonuje się w spektrofotometrze 540 nm.

Liniowość jest wypełniona do stężenia 12 g/dl.

Ingerencja

Substancje zakłócające test biuretu

Chociaż nie jest to bardzo częste, należy zauważyć, że podczas wykonywania tego testu niektóre substancje mogą zakłócać. Na przykład obecność amonu może hamować tworzenie kolorów.

Podobnie inne substancje mogą pochłaniać tę samą długość fali, na przykład niektóre pigmenty.

Z drugiej strony można wygenerować zakłócenia, gdy inna substancja inna niż łącznik peptydowy tworzy kompleks z solą metalową. Przykład: niektóre węglowodany i niektóre lipidy.

W przypadku, gdy pokazuje, że analizuje pewien rodzaj osadu, należy go odfiltrować lub odwirować przed skonfiguracją testu.

Substancje, które nie zakłócają testu biuretu

Obecność:

-Bilirubina do stężenia 20 mg/dl.

-Hemoglobina do stężenia 750 mg/dl.

-Dekstran do stężenia 30 g/l.

-Trójglicerydy do stężenia 4000 mg/dl.

Zalety

-Jest to prosta metoda wykonywania.

-To test ekonomiczny.

-Ma wysoką specyficzność białka.

-Niewiele zakłóceń.

Niedogodności

Ma niewielką wrażliwość na wykrycie niskich ilości białek. Prace wykonane przez Fuentesa i współpracowników potwierdzają, że metoda testu Bioret ma limit wykrywania 1 mg/ml białka i granicę kwantyfikacyjną 3 mg/ml.

Jednak kolejne badania przeprowadzone na University of Amazon podają znacznie niższe wartości. Limit wykrywania, który zgłasza badanie wynosi 0,020 mg/ml, a granica kwantyfikacji 1.33 mg/ml.

Aplikacje

Odczynnik lub test BIURET stosuje się do oznaczania białka w próbkach klinicznych i nieklinicznych w rutynowych i badawczych laboratoriach.

Może ci służyć: cechy żywych istot

Patologie, które badają lub zmniejszały Białka

W wielu patologiach ważne jest określenie stężenia całkowitej białek w próbkach klinicznych, możliwość bycia wysokim lub zmniejszonym.

Są podwyższone w:

-Szpiczak mnogi,

-Sędzia systemowy rumieniowo,

-Bakteryjne zapalenie wsierdzia,

-Bakteryjne zapalenie opon mózgowych,

Makroglobulinemia Waldestrom, między innymi.

Jest zmniejszone w:

-Niewydolność nerek,

-Osoby z poważnym niedożywieniem,

-Pacjenci z przewlekłymi infekcjami, między innymi.

Próbki kliniczne

Najczęstsze próbki kliniczne to surowica, osocza i mocz. Normalna wartość białek w surowicy lub osoczu wynosi 6.0-8.8 gr/dl.

Stężenie białka u dorosłych u dorosłych nie przekracza liczby 150 mg/24 -hour.

Normalna wartość wskaźnika białka moczu/kreatyniny w moczu

Niemowlęta: < a 0,50 mg

Dzieci 2 lata i starsze: indeks: 0,20 mg

Dorośli ludzie: < 0,2 mg

Próbki niekliniczne

Reakcję biuretu może być stosowana do wielu rodzajów próbek nieklinicznych, takich jak produkty nabiałowe, surowice przeciwzagociowe lub jakakolwiek nieznana substancja, do której pragnie zbadać obecność białek.

Bibliografia

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez i. (2014). Charakterystyka fizyczna i zawartość białka w ekstraktach płynów Ostriona Mangrove (Crassostrearyzophorae). Cuban Journal of Chemistry, 26 (1), 66-74. Pobrano 26 czerwca 2019 r. Z http: // scielo.Sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Funkcjonalna charakterystyka migdałów nasion mango (Mangifera wskazuje l.) Magazyn rozwoju naukowy. 2015; 6 (1): 67-75
3. „Biuret." Wikipedia, bezpłatna encyklopedia. 19 czerwca 2019, 16:37 UTC. 26 czerwca 2019, 22:18
4.  Fuentes F, Quispe I, García J. Standaryzacja metody biuretu w celu kwantyfikacji całkowitego białka w multipurpose surowicy przeciwbotropowej wytwarzanej w National Biological Products Center. BOL - Inst NAC Health 2012; 18 (11-12).  Dostępne na: Repozytorium.Ins.Gęba.pe
5. Winer Laboratories. Całkowite białka. Metoda kolorymetryczna do określania całkowitej surowicy i białek w osoczu. Dostępne na: Wiener-Lab.com.ar