Ziemniak dekstroza, przygotowanie i użycie

On Agar ziemniaczany dekstrozy Jest to solidne, nieselektywne pożywkę do hodowli żywieniowej. W nim gatunki bakteryjne i grzybowe mogą rosnąć, ale jego zastosowanie jest wskazane szczególnie do izolacji grzybów i drożdży. Jest również znany jako medium PDA w wyrażeniu angielskiego agaru dekstrozowego ziemniaczanego.

Jest to szczególnie przydatne do izolacji grzybów fitopatogennych, to znaczy tych, które wpływają na warzywa. Aby zasiewać próbki z zainfekowanych warzyw, można użyć innych mediów, takich jak Sabouraud lub Maltarze.

Aspergillus Niger i Sinemas w agarach z dekstrozą papieża. Źródło: Alextrevelian 006 w angielskiej Wikipedii [domena publiczna]/Joselrojas [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licencje/nabrzeże/4.0)]

Służy również do liczenia kolonii grzybowych w próbkach kosmetyków, produktów farmaceutycznych i niektórych produktów mlecznych. Sprzyja również siew próbek zeskrobania skóry w poszukiwaniu dermatofitów, które bardzo dobrze rosną w tym medium, rozwijając ich charakterystyczne pigmenty.

Medium Papież z dekstrozą jest bardzo prostym i łatwym medium do przygotowania w laboratorium. Zawiera, jak sama nazwa wskazuje, wlew ziemniaka, dekstrozę i agar -agar. Dodatkowo można dodać substancje hamujące, aby uniknąć wzrostu bakterii i zwiększyć selektywność dla gatunków grzybów.

[TOC]

Podstawa

Agar z dekstrozą Papież jest pożywką hodowlaną, która zapewnia niezbędne elementy żywieniowe do rozwoju grzybów i drożdżaków.

Połączenie wlewu ziemniaka z glukozą stanowi idealne źródło energii, dzięki czemu nastąpi zadowalający wzrost grzybów. Podczas gdy Agar jest tym, który zapewnia spójność środowiska.

Sama medium nie hamuje wzrostu bakterii, dlatego jest to pożywka nieselektywna. Aby to zrobić selektywne, potrzebują agregatu substancji hamujących, takich jak kwas tartarowy lub antybiotyki.

Przygotowanie

-Domowy (niekomercyjny) Papa Dextrose Agar

Tablice Petriego

Jest przygotowywany w następujący sposób:

Po pierwsze, ziemniaki są bardzo dobrze myte, usuwając posiadaną ziemię. Są one krojone na drobne plastry ze wszystkim i skorupą. 200 GR ziemniaków jest ważonych i gotuje się w litorze wody destylowanej, przez pół godziny.

Czas jest gotowy filtry lub odkręć całe przygotowanie przez gazę.

Otrzymana ciecz jest uzupełniana wodą destylowaną, aż osiągnie litr. Infuzja dodaje się 20 GR z agaru -agar i 20 grania dekstrozy, dobrze miesza i autoklaw w 121 ° C, 15 funtów ciśnienia przez 15 minut.

Może ci służyć: koewolucja

Pozwól ostygnąć do 50 ° C i podawać w sterylnych płytkach Petriego. Przygotowane płyty są przechowywane w lodówce.

Kliny

Możesz także przygotować kliny ziemniaczane dekstrozy.

W takim przypadku przed sterylizowaniem w autoklawie. Zapisz w lodówce.

Medium ma pH 5.6 ± 0.2 Jednak niektóre laboratoria dodają 10% kwasu tartarowego, aby obniżyć pH do 3,1 ± 0.1 W celu hamowania wzrostu bakteryjnego.

W tym samym sensie inne laboratoria wolą dodawać antybiotyki, aby zrobić to selektywne dla uprawy grzybów i unikać rozwoju bakterii.

-Przygotowanie komercyjne agaru papieża dekstrozowego

Ważyć 39 GR dostępnych w handlu odwodnionych i rozpuszczonych w litrach wody destylowanej. Pozostaw na 5 minut.

Mieszanina jest ogrzewana przez często mieszanie się aż do całkowitego rozwiązania. Następnie jest sterylizowany w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

Możesz przygotować płyty lub kliny. Postępuj zgodnie z opisem powyżej.

PH wynosi 5,6 ± 0,2. Jeśli pożądane jest pH 3,1, 14 ml steryarycznego kwasu tartarowego należy dodać do 20% przed podaniem w płytkach.

Kolor nieprzygotowanego pożywki jest beżowy i przygotowany jest wyraźny bursztyn z nieco pochmurnym lub opakowym wyglądem.

Aplikacje

Proces sadzenia próbek roślin w doniczce dekstrozowej

-Na liście z plamami

Liście są krojone na kawałki.

W naczyniu 50 cm3 z 50% alkoholem umieść kawałki liści (zabarwione i zdrowe), aby dezynfekować powierzchnię o 20 do 30 sekund. Rzuć alkohol i dodaj hipochloryt sodu 20% przez 40 do 50 sekund, jeśli są to drobne liście i zwiększ czas do 80 sekund, jeśli jest to kora i pnie.

Rzuć podchloryn sodu i weź zdezynfekowane kawałki za pomocą sterylnego zacisku i umieść je na średniej powierzchni (maksymalnie 10 sztuk). Umieść datę i inkubuj od 20 do 30 ° C.

-Dla owoców i bulw

Jeśli owoc jest mięsisty, otwórz owoce dotknięte grzybem i weź kawałki sterylnym skalpelem, zarówno chorych, jak i zdrowej części i umieść je na powierzchni agaru.

Jeśli owocem jest cytrusy, takie jak cytryna lub pomarańcza, jego nasiona muszą być otwarte i siekają.

Może ci służyć: fosfatydyloinozytol: struktura, trening, funkcje

Gdy dotknięta jest powierzchnia owoców i obserwuje się sporowanie, ideałem jest zastosowanie tartej metody na płycie; Składa się z grania w The Spish ze sterylizowaną i chłodzoną szpatułką w kształcie „L”, a następnie wysiewana zygzakiem 2 do 3 razy na agarze.

-Za ziarna

Dezynfekują to samo, jak opisano w liściach, a następnie umieszczone na agarie.

-Dla gałęzi i łodyg

Raspecue kory jest wykonywana, a następnie fragmenty zdrowej i chorej są pobierane i zasiane bezpośrednio na agarie.

Posadzone płytki są inkubowane w aerobiozie w 20-30 ° C przez 72 godziny.

Proces sadzenia łusek skóry, włosów lub paznokci na agar

Próbkę należy wykonać za pomocą arkusza skalpela nr 11, albo do cięcia dotkniętych włosów, skóry lub paznokci w poszukiwaniu dermatofitów. Przed przyjęciem próbki obszar z 70% alkoholu musi zostać zdezynfekowany.

-Próbka skóry

W zmianach oszustw krawędź urazu musi zostać zeskrobana, ponieważ jest bardziej prawdopodobne, że znajdzie grzyb.

W zmianach wysiękowych próbka jest pobierana z suchym lub mokrym wymazem. Saw natychmiast nad papieżem dekstrozą lub Agarem Sabouraud. Unikaj środków transportu.

Kolejna metoda przyjmowania próbki jest technika Mariat i Ada Campos Squet Square. W tym przypadku dotknięty obszar jest wcierany 5 razy kawałkiem sterylnej wełny dla późniejszej uprawy.

Próbkę można umieścić bezpośrednio w pożywce hodowlanej.

-Próbka włosów

W zależności od patologii, dotknięta część lub korzenie można wyciąć. Umieść próbkę w pożywce hodowlanej.

-Próbka paznokci

Można je zeskrobać lub wyciąć określoną część dotkniętego paznokcie. Będzie zależeć od rodzaju urazu.

Pokrój próbkę na bity 1 mm przed siewem w celu zwiększenia prawdopodobieństwa kontaktu grzyba z podłożem hodowlanym.

Procedura identyfikacyjna

Kolonie uzyskane na płycie są izolowane w rurkach zawierają.

Badanie mikroskopowe (obserwacja struktur i ich formacji), można wykonać za pomocą mikrokultury lub bezpośredniej obserwacji mikroskopu między arkuszem a lamelą.

Może ci służyć: histydyna: Charakterystyka, struktura, funkcje, jedzenie

Liczą się kolonie

To medium można również użyć do określenia ładunku grzybów i drożdży obecnych w próbkach roślin, żywności, kosmetykach lub lekach. W tym celu stosuje się agar uzupełniony ziemniakami z antybiotykami, takimi jak: (chloramhenicol, chlorotetracyklina lub oba).

Wlać 1 ml próbki - najlepiej rozcieńczona - na sterylnej i pustej płycie Petriego, a następnie stopić pistolet z dekstrozy i pozwól mu ostygnąć w temperaturze 45 ° C. Wlać płytkę Petriego i obracaj się, aż homogenizacja. Odejdź w spoczynku.

Inkubuj w aerobiozy w 20-25 ° C (formy) lub w temperaturze 30-32 ° C (drożdże) przez 5 do 7 dni lub dłużej, w zależności od rodzaju poszukiwanego grzyba i rodzaju próbki. Do inkubowania obu zakresów temperatury można użyć dwóch płyt.

Profesor kolonii grzybiczych w próbce żywności. Agar ziemniaczany dekstrozy uzupełniony antybiotykami. Źródło: Pxhere.com Photo/777267

Utrzymanie szczepów grzybów

Agar z dekstrose papież może być używany do utrzymania realnych szczepów grzybów przez kilka lat.

W tym celu grzyb jest uprawiany w klinach ziemniaczanych dekstrozy, a po uprawie grzyba jest on pokryty olejem mineralnym. Olej musi być sterylizowany w autoklawie przez 45 minut i mieć przybliżoną lepkość od 300 do 330 saybolt. Olej musi przekraczać 1 do 2 cm końcówką ramki.

QA

Z każdej przygotowanej działki należy pobrać 1 lub 2 płytki i inkubować w 25 ° C przez 48 godzin lub 20 ° C przez 96 godzin. Dobra kontrola sterylności to taki, w którym nie obserwuje się rozwoju kolonii.

Możesz także użyć znanych lub certyfikowanych elementów sterujących, takich jak:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. We wszystkich przypadkach oczekuje się dobrego wzrostu.

Bibliografia

1. Britania Laboratories. Glycosado Pot. 2015. Dostępne na: Britanialab.com
2. Neogen Laboratories. Ziemniak dekstrozowy. Dostępne na: Foodsafety.Neogen.com
3. Laboratorium Insumolab. Agar ziemniaczany dekstrozy. Dostępne na: insumolab.Cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Pan -american Editorial S.DO. Argentyna.
5. Dom domowy g. Ogólna mikologia. 1994.  2 edycja. Central University of Wenezuela, Biblioteka. Wenezuela Caracas.
6. AceiTuno m. Ocena jakości mikrobiologicznej w cieniu do powiek, zwartego rodzaju kurzu krajowego laboratorium produkcyjnego, zgodnie z Pharmacoea USP 2005. Praca, aby zdecydować się na tytuł chemika farmaceutycznego. University of San Carlos z Gwatemali.
7. Cuétara m. Przetwarzanie próbek powierzchniowych. Ibero -american Mycology Magazine. 2007; pp. 1-12