Czeek, ​​przygotowanie, zastosowania i ograniczenia

On Czapek agar (CZA) jest selektywną solidną pożywką hodowlaną specjalnie zaprojektowaną do uprawy bakterii i grzybów saprofitów. Został stworzony przez botanika Friedricha Johanna Franza Czapka z polskiego pochodzenia i amerykańskiego chemika Arthura Waylanda Dox; Właśnie dlatego ten agar jest również znany jako Czopka-Dox.

Pierwotne medium było płynne, ale później dodano agar, aby zrobić solidne medium. Pożywka Czapka składa się z azotanu sodu, fosforanu dwupotazowego, siarczanu magnezu, chlorku potasu, siarczanu żelaza, sacharozy, agaru i wody destylowanej.

Czapek a. Aspergillus parasiticus b. Aspergillus fumigatus Źródło: a. Medmyco [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licencje/nabrzeże/4.0)]/ B. Zdjęcie: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

Agar Czapek wynosi 7.3, ale istnieje wariant, do którego dodaje się 10% kwas mlekowy, którego pH wynosi 3,5. Ta kwaśna pożywka jest stosowana do hodowli kwasofilowych mikroorganizmów.

Z drugiej strony niektóre domy komercyjne zmodyfikowały skład agaru Czapek poprzez zmianę siarczanu magnezu i fosforanu dwupotazowego przez gliceofosforan; Ta modyfikacja zapobiega osadowi fosforanu magnezu zaobserwowanego z konwencjonalnym wzorem. Podobnie istnieje inny wariant, do którego dodaje się ekstrakt drożdży.

Wreszcie, agar Czapek jest zalecany przez American Public Health Association APHA do badania Actinomycetes SP, Aspergillus SP, Paecilomyces SP I Penicillium sp. Gatunki te charakteryzują się byciem mikroorganizmami środowiskowymi i patogenami oportunistycznymi.

[TOC]

Podstawa

To medium zawiera sacharozę; Ten węglowodan służy jako źródło węgla, podczas gdy azotan sodu jest źródłem azotu, ale w przeciwieństwie do innych oznacza, że ​​azot jest typem nieorganicznym.

Z tego powodu pożywka Czapek jest uważana za selektywność, ponieważ może rozwijać tylko mikroorganizmy zdolne do stosowania związków nieorganicznych jako jedynego źródła azotu.

Jako substancja regulacyjna średniej osmolarności jest fosforan dwupotazowy. Z drugiej strony siarczan magnezu, chlorek potasu i siarczan żelaza zapewniają niezbędne minerały do ​​wzrostu mikroorganizmów saprofitów (wolne życie). Z tym wzorem powstaje osad fosforanu magnezu.

Może ci służyć: standardowe konto Agar: podkład, przygotowanie i zastosowania

Wreszcie, dodanie agarów jest związkiem, który zapewnia solidną spójność dla środowiska, a woda jest rozpuszczalnikiem wszystkich elementów.

Ze zmodyfikowaną wzorem agaru CzeSp nie ma tworzenia się osadu i poprawia wzrost wzrostu niektórych grzybów.

Ekstremalna kwasowość agaru kwaśnego cZapek sprawia, że ​​jest to bardziej selektywny sposób, umożliwiając jedynie wzrost kwasofilowych mikroorganizmów, zdolny do stosowania nieorganicznego azotu. Podczas gdy agar Czapek-Levadura poprawia wydajność niektórych grzybów.

Przygotowanie

Pół Czapek-dox

Ważyć 49 gr z odwodnionej hodowli i rozpuszcza się w wodzie destylowanej. Zastosuj ciepło, aby zagotować. Często wstrząśnij mieszaniną, aż całkowicie się rozpuści.

-Czapek agar

Rozłóż mieszaninę rozpuszczoną w probówkach i autoklaw w 121 ° C przez 15 minut. Po usunięciu z autoklawu homogenizuj przed snem i pozwól się zestalić.

-CZAPK PŁYTA AGAROWE

Autoklaw mieszaninę rozpuszczoną w 121 ° C przez 15 minut, a podczas ostygnięcia w 50 ° C, homogenizując i wylewając 20 ml do sterylnej Petri. Pozwól, aby umocnić, zainwestować i zapisać w lodówce do użycia.

PH musi wynosić 7,3 ± 0,2. Kolor odwodnionego pożywki jest biały i przygotowany jest lekki, nieco mętny ze względu na obecność osadu flockulantowego.

Pół czapek kwas pH

Przygotuj się zgodnie z opisem, ale dodanie 10 ml sterylnego kwasu sterylnego do 10% dla każdego litra przygotowanego pożywki. Zmodyfikowana pożywka Czapek musi wynosić pH 3,5 ± 0,2.

W połowie zmodyfikowanym Czapek

Waż 45,4 grania odwodnionego pożywki i rozpuść się w 1 litorze wody. Reszta preparatu jest równa opisanej powyżej. Kolor odwodnionego pożywki jest biały i przygotowany. Ostateczne pH pożywki wynosi 6,8 ± 0,2.

Może ci służyć: vymentin: Charakterystyka, struktura, funkcje i zastosowania

Pół Czapek-Levadura

Nazywany także ekstraktem z wiadomości drożdży (CYA). Zawiera elementy klasycznego agaru Czapek oraz ekstrakt drożdżowy.

Używać

Medium Czapek służy do poszukiwania mikroorganizmów saprofitów w próbkach gleby, warzywach, ziarnach, powietrza, owadach,.

Czapek Kwaśny agar stosuje się do wzrostu mikroorganizmów kwasofilowych, podczas gdy zmodyfikowany agar Czapek jest szczególnie przydatny do tworzenia klamidosporów u złożonych gatunków Candida albicans.

Wreszcie, agar Czapek -Levadura jest bardzo przydatny do izolacji Aspergillus i Penicillium.

Posiany

-Czapek agar

Aby szukać aktynomycetes na ziemi, postępuj w następujący sposób: Próbka z wodą fenolizowaną o 30 minut jest traktuje. Inkubuje w 28 ° C przez 5 do 7 dni.

W przypadku próbek warzyw, zboża i owadów są one umieszczane bezpośrednio na agarie. Rozcieńczenia można również wykonywać i zasiewać 0,1 ml na powierzchni agaru.

-Zmodyfikowany agar Czapek

W przypadku wysiewanej ręki lub igły jest używana, jest ona przenikająca wymaz. Inkubuj przez 24 godziny w 28 ° C i zbadaj mikroskopem powyżej i poniżej płyty, aby zauważyć, czy utworzyły się clamidospor.

Temperatura i czas inkubacji

Temperatura i czas inkubacji różnią się w zależności od rodzaju mikroorganizmu, który ma na celu izolowanie. Zwykle płytki są inkubowane przez jeden do dwóch tygodni w zakresie temperatur od 20 do 25 ° C.

Istnieją jednak określone warunki dla niektórych szczepów. Na przykład większość gatunków z rodzaju Aspergillus ma optymalny wzrost w 30 ° C; Jednakże DO. fumigatus rosnąć w 50 ° C.

Jeśli chodzi o czas inkubacji, jeden lub dwa tygodnie jest normalne, Candida albicans Może się rozwijać za 24 do 48 godzin w 25 ° C.

Może ci służyć: lipogeneza: cechy, funkcje i reakcje

Charakterystyka niektórych kolonii na tym medium

-Penicillium atravenetum

Odbywa się w ciągu 12 dni inkubacji w 27 ° C. Jego kolonie są małe (25 mm).

Kolonie wyglądają na natunnie, z białą zdefiniowaną krawędzią, a pośrodku przedstawia zielonkawy niebieski ton, który zgadza się, staje się szary. Odwrotność kolonii jest pomarańczowy, umieszczający w środku tego samego koloru według produkcji pigmentu.

-Aspergillus Niger

Rozwija się z białym do żółtym grzybni i czarnych zarodników.

-Candida albicans

Kremowe beżowe kolonie światła rozwijają się. W zmodyfikowanej formie agaru Czapka.

-Aspergillus parasiticus

Ciemnozielona grzybnia rozwija się w ciągu 7 dni w 25 ° C.

QA

Aby ocenić jakość medium kulturowego, certyfikowane szczepy kontrolne można zasnąć, na przykład: Aspergillus Niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus Niger rozwija biały do ​​żółtej grzybni i czarnych zarodników w ciągu około 5 dni, a Candida albicans Będzie miał zadowalający wzrost w ciągu 24 godzin inkubacji w temperaturze 25 ° C; Kolonie mają kremowy kolor.

Ograniczenia

Niektóre badania ujawniły, że w przypadku odzyskania akcizinomycetetów agar z najlepszą wydajnością jest agar papieża dekstrozy, pozostawiając agar cZapek na drugim miejscu, ale w celu odzyskania Aspergillusa i penicylium agar Czapek jest tym, który zapewnia największe wyzdrowienie wskaźnik.

Bibliografia

1. Dávila M i in. Antagonistyczne aktynomycetes przeciwko fitopatogennym grzybom o znaczeniu rolnym. Obrót silnika. Mex. nauka. Rolnictwo 2013, 4 (8): 1187-1196. Dostępne na: Scielo.org.
2. Luna M, Lozada i pszenica. Izolacja szczepów Aspergillus Niger, Ocratoksyna Producentów w kawiarni Verde (Arabica Coffea) przechowywana. Obrót silnika. Mex. Mikrofon . 2010; 32: 63-68. Dostępne w.Scielo.org.
3. Współtwórcy Wikipedii. Czapek Medum. Wikipedia, wolna encyklopedia. 13 stycznia 2019, 20:30 UTC. Dostępne na: w.Wikipedia.org
4. CDADA PREMADISA LABOROTIONS. Zmodyfikowany agar Czapek-DOX. Dostępne na: Condalab.com
5. MICROKIT HULTIVATIVE Media. Agar Czapek-DOX. Godponible w: Media Cultive.com